HER2蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及曲妥珠单抗对卵巢癌SKOV3细胞的影响

发布时间：2017-08-17 10:40

  本文关键词：HER2蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及曲妥珠单抗对卵巢癌SKOV3细胞的影响

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【摘要】：目的:检测HER2蛋白在上皮性卵巢癌组织中的表达及基因扩增情况,初步探讨HER2与年龄,病理分期,组织分级,病理类型及淋巴结转移的关系;初步研究新型HER2靶向治疗药物曲妥珠单抗(赫赛汀,Herceptin)对HER2蛋白过表达的卵巢癌SKOV3细胞增殖的作用,对SKOV3细胞凋亡、周期及早期凋亡蛋白caspase-3表达的影响,分析曲妥珠单抗的抗肿瘤机制,进一步探讨HER2蛋白在上皮性卵巢癌发生发展中的作用,为上皮性卵巢癌的靶向治疗提供实验依据。方法:1收集河北医科大学第四医院妇产科2013年2月~2014年2月期间手术切除并经病理证实的上皮性卵巢癌56例(其中浆液性乳状头囊腺癌40例,黏液性乳头状囊腺癌16例),术前均未接受过激素治疗或放化疗,患者的年龄为35~75岁,平均58.2岁。选取上皮性卵巢良性肿瘤20例(浆液性乳头状囊腺瘤13例,黏液性乳头状囊腺瘤7例),正常卵巢组织15例。根据FIGO标准,在56例上皮性卵巢癌中,I~II期21例,III~IV期35例。高分化(G1)13例,中分化(G2)21例,低分化(G3)22例。淋巴转移阳性者40例,淋巴转移阴性者16例。采用免疫组化(IHC)SP方法检测HER2蛋白在上皮性卵巢癌、上皮性卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织中的表达情况。采用q RT-PCR法检测HER2基因在上皮性卵巢癌及正常卵巢组织中的相对扩增情况。实验所得数据应用统计软件SPSS13.0处理,以P0.05为差异具有显著统计学意义。2体外培养人上皮性卵巢癌SKOV3细胞,37℃,5%CO2的恒温培养箱中传代培养并冻存。3本实验分为对照组(药物浓度为0μg/l)及不同浓度曲妥珠单抗(赫赛汀,Herceptin)药物组,采用MTS方法检测SKOV3细胞加不同浓度赫赛汀(5、10、20、40和80μg/l)继续培养48h后,药物对细胞增殖活力的影响,计算相应浓度抑制率及IC50。4本实验分为对照组(药物浓度为0μg/l)及不同浓度曲妥珠单抗(赫赛汀,Herceptin)药物组。SKOV3细胞加不同浓度的赫赛汀(0、10、20、40μg/l)继续培养48h后,采用PI染色法利用流式细胞仪对其进行细胞周期的分析;采用Annexin V/PI染色法利用流式细胞仪对其进行细胞凋亡分析;采用Western blot法检测细胞内早期凋亡蛋白caspase-3的相对表达情况。实验所得数据应用统计软件SPSS13.0处理,以P0.05为差异具有显著统计学意义。结果:1 HER2蛋白在卵巢恶性组、良性组、正常组织组中阳性表达率分别是42.9%、15.0%、6.7%,恶性组HER2表达率显著高于良性组及正常组(P0.05),且随FIGO分期及肿瘤组织学分级的升高,HER2表达率相应增加(P0.05),淋巴结转移阳性者HER2表达率显著高于阴性者(P0.05)。HER2蛋白与年龄及病理类型不相关(P0.05)。2 q RT-PCR结果进一步显示,上皮性卵巢癌组织中HER2表达显著高于卵巢正常组织组,2-ΔΔCт值为55.26±2.00,恶性组与正常组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。在上皮性卵巢癌中,病理分期越晚、肿瘤组织学分级越高,HER2基因的相对表达越高(P0.05)。另外在淋巴结转移阳性的上皮性卵巢癌组织中HER2的相对表达量显著高于淋巴结转移阴性者(P0.05)。3 MTS结果显示,赫赛汀对人上皮性卵巢癌SKOV3细胞具有增殖抑制作用,实验组(赫赛汀浓度为5、10、20、40、80μg/l),培养48h后,OD值分别为0.622±0.019、0.547±0.023、0.410±0.020、0.350±0.016、0.322±0.021,而对照组(赫赛汀为0μg/l)OD值为0.806±0.020,实验组与对照组及各实验组间相比,差异均具有统计学意义(P0.05)。统计学Logit法计算IC50为29.224μg/l。4 PI染色法(FCM)结果显示,实验组SKOV3细胞加药(赫赛汀浓度10、20、40μg/l)培养48h后,G0/G1期细胞比例明显增高(54.300±1.776、63.150±1.792、68.800±1.120),与对照组(47.967±1.983)比较,组内及组间差异均具有显著性(P0.05),而G2/M期(13.150±0.903、10.835±0.776、8.797±0.680)和S期(32.417±1.745、26.017±1.429、22.483±1.402)细胞比例相应减少,与对照组G2/M期(15.167±1.242)和S期(37.067±1.772)相比较,组内及组间差异均有统计学意义(P0.05)。5 Annexin V/PI染色法(FCM)结果显示,SKOV3细胞加药(赫赛汀浓度10、20、40μg/l)培养48小时后,总凋亡率随药物浓度的增加而显著升高,实验组SKOV3细胞总凋亡率分别为11.745±1.346、19.905±1.793、24.830±2.120,对照组凋亡率为6.397±1.598,实验组与对照组及各实验组间相比,差异具有统计学意义(P0.05)。6蛋白质印迹(Western blot)结果显示,实验组SKOV3细胞加药(赫赛汀浓度10、20、40μg/l)培养48小时后,caspase-3蛋白随药物浓度的增加而相应增加,SKOV3细胞内caspase-3蛋白相对表达量依次为0.432±0.023,0.639±0.026,0.683±0.019,对照组为0.348±0.020。实验组与对照组及各实验组间相比,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:HER2蛋白在上皮性卵巢癌中高度表达,基因相对扩增率较高,且HER2表达与病理分期、肿瘤组织学分级及淋巴结转移相关,说明HER2蛋白在上皮性卵巢癌的发生、发展中起重要作用,并可能成为卵巢恶性上皮肿瘤预后不良的指标。赫赛汀对体外培养的卵巢癌SKOV3细胞具有明显的增殖抑制作用,使细胞周期阻滞于G0/G1期。同时赫赛汀使SKOV3细胞的总凋亡率增加及上调SKOV3细胞内caspase-3蛋白,说明周期阻滞,诱导凋亡可能是赫赛汀抗肿瘤机制之一。本研究为HER2基因靶向治疗应用于上皮性卵巢癌提供了基础实验依据,为上皮性卵巢癌的治疗提供了新靶点。
【关键词】：HER2 上皮性卵巢癌 赫赛汀 卵巢癌SKOV3细胞 细胞周期 凋亡 caspase-3
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 英文缩写11-12
• 前言12
• 材料与方法12-20
• 结果20-23
• 附图23-28
• 附表28-32
• 讨论32-35
• 结论35-36
• 参考文献36-40
• 综述40-53
• 参考文献46-53
• 致谢53-54
• 个人简历54

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本文编号：688586