TCF21对卵巢癌细胞增殖和凋亡的作用

发布时间：2017-08-18 17:48

  本文关键词：TCF21对卵巢癌细胞增殖和凋亡的作用

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【摘要】：卵巢癌的致死率居妇科恶性肿瘤的首位。卵巢癌起病隐匿,70%发现时已为晚期,晚期卵巢癌的生存率不到30%,而早期发现的卵巢癌经过手术和化疗,大部分可以达到治愈或完全缓解,其5年生存率可达90%。据美国卵巢癌治疗研究报道,卵巢癌在美国女性恶性肿瘤的死亡原因中位于第五。因此早诊断、早治疗对于提高卵巢癌患者的生存率非常重要。诊治卵巢癌的一大难点是其早期缺乏特异的临床表现和灵敏的筛查方法,因此研究卵巢癌发生发展的分子机制,为早期诊治卵巢癌寻找新的靶点是非常必要的。近来研究表明,TCF21是一种抑癌基因,在头颈癌、肺癌、乳腺癌、结肠癌、胃癌和黑色素瘤等多种肿瘤中呈低表达状态。关于TCF21在肿瘤中的作用机制有两个方面:一是启动子甲基化导致其表达下调,从而导致肿瘤的发生发展,这种下调机制已得到了较多研究的证实;另一方面是Zhang等人在肾癌中发现mi R-21通过下调TCF21,从而抑制Kiss-1基因的表达,增加肾癌的侵袭能力,表明TCF21上游调控基因可能是mi R-21,其下游调控基因可能是Kiss-1基因。在恶性黑色素瘤、肾癌和结直肠癌均发现TCF21的下游调控基因可能是Kiss-1基因,那么在TCF21下游,是否只调控Kiss-1使其表达增高,从而抑制肿瘤的转移?在肿瘤的增殖和凋亡方面是否同样存在TCF21的下游调控基因?有待进一步证实。研究发现恶性黑色素瘤、肺癌、头颈癌、乳腺和卵巢癌的发生可能与6号染色体区域6q22和6q23-q24的杂合型缺失相关,而TCF21基因就位于6号染色体区域6q23-q24,且已有研究报道TCF21在恶性黑色素瘤、肺癌、头颈癌、乳腺呈低表达状态,但对于TCF21在卵巢癌的表达情况及作用机制目前尚无文献报道。目的:本研究探讨TCF21对卵巢癌细胞增殖和凋亡的作用及其可能的作用调控机制。方法:1分别采用荧光实时定量PCR和Western-blot方法检测卵巢癌组织和正常卵巢组织的TCF21m RNA和蛋白水平。2利用Gateway克隆技术把目的基因TCF21克隆到目的载体上,并对目的载体进行琼脂糖凝胶电泳和DNA序列检测检测。3利用慢病毒转染技术在卵巢癌Ovcar8细胞中高表达TCF21基因,并用抗生素对转染后的细胞进行筛选。4将细胞分为空白对照组(Ovcar8)和实验组(Ovcar8-TCF21),以荧光实时定量PCR和Western-blot方法检验TCF21基因在实验组第1、3、5代和空白对照组的表达水平。5采用MTT法检测TCF21高表达对Ovcar8增殖的影响。6采用流式细胞术检测TCF21高表达对Ovcar8凋亡的影响。7运用荧光实时定量PCR检测Cyclin A、B、C、D和CKD2、3、4、6在实验组和空白对照组的表达水平。结果:1卵巢癌组织中的TCF21的表达:荧光实时定量PCR和Western-blot均显示,卵巢癌组织中的TCF21m RNA和蛋白表达水平较正常卵巢组织低;2目的载体检测:电泳条带显示两条带,DNA序列检测显示目的载体的序列与TCF21基因的69-1028bp重合;3转染效果的观察:利用抗生素筛选,空白对照组细胞全部死亡,实验组细胞90%存活;4目的基因的表达:荧光实时定量PCR和Western-blot检测均显示实验组的第1、3、5代细胞组较空白对照组TCF21m RNA和蛋白表达水平明显上升;5 MTT法检测TCF21高表达对Ovcar8增殖能力的影响:结果显示实验组与空白对照组比较在24h的OD值无统计学差异(P0.05),在48h、72h、96h的OD值降低,且有统计学差异(P0.05);6流式细胞术检测TCF21高表达对Ovcar8凋亡的影响:结果显示实验组较空白对照组细胞凋亡率明显上升,有统计学差异(P0.05);7 Cyclin A、B、C、D和CKD2、3、4、6在实验组和空白对照组的表达水平:荧光实时定量PCR检测显示,实验组与空白对照组比较,Cyclin C和CKD2表达水平明显降低,有统计学差异(P0.05),其余基因表达无统计学差异。结论:1卵巢癌组织中的TCF21基因的表达下降。2高表达TCF21后Ovcar8的细胞生长受抑制,凋亡率增高。
【关键词】：TCF21 卵巢癌 增殖 凋亡 细胞周期蛋白
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文缩写10-11
• 前言11-12
• 材料与方法12-28
• 结果28-29
• 附图29-34
• 附表34-35
• 讨论35-39
• 结论39-40
• 参考文献40-42
• 综述 TCF21在肿瘤中的研究进展42-48
• 参考文献45-48
• 致谢48-49
• 个人简历49

【参考文献】

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1 Fabio Coppedè;Angela Lopomo;Roberto Spisni;Lucia Migliore;;Genetic and epigenetic biomarkers for diagnosis, prognosis and treatment of colorectal cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2014年04期

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本文编号：695930