MTX对映体耐药A549细胞中VEGF、MMP-2的表达及其与侵袭能力差异的研究

发布时间：2017-08-19 01:10

  本文关键词：MTX对映体耐药A549细胞中VEGF、MMP-2的表达及其与侵袭能力差异的研究

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【摘要】：目的:研究氨甲蝶呤(MTX)对映体耐药人非小细胞肺癌A549细胞中血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)基因及蛋白的表达及其与细胞侵袭能力差异的研究。方法:(1)采用浓度递增并结合低剂量持续诱导的方法建立MTX不同对映体耐药细胞系,分别命名为:L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549,MTT法测定其耐药指数并检测MTX对映体对A549细胞的生长抑制作用,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;(2)Transwell侵袭实验检测L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549及亲本A549细胞侵袭能力的差异;(3)通过实时荧光定量PCR检测L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549及亲本A549细胞中VEGF、MMP-2m RNA的表达;(4)Western blot检测L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549及亲本A549细胞中VEGF、MMP-2蛋白的表达量。结果:(1)倒置相差显微镜下观察,L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549及亲本A549细胞均呈梭形贴壁生长。L-(+)-MTX/A549的耐药指数为5.8,为中度耐药;D-(-)-MTX/A549的耐药指为15.7,为高度耐药。两种MTX对映体抑制A549细胞的生长呈剂量与时间依赖性,L-(+)-MTX对A549细胞的抑制作用明显强于D-(-)-MTX。(2)Transwell小室检测D-(-)-MTX/A549细胞穿过人工基底膜Matrigel的细胞数(242±32)明显高于L-(+)-MTX/A549(104±15)细胞及亲本细胞(127±15),差异有统计学意义(P0.05)。L-(+)-MTX/A549细胞穿过人工基底膜Matrigel的细胞数(104±15)略小于亲本细胞(127±15),但差异无统计学意义(P0.05)。(3)D-(-)-MTX/A549组细胞的VEGF及MMP-2m RNA与内参的比值均小于L-(+)-MTX/A549细胞及亲本细胞组VEGF及MMP-2m RNA与内参的比值,差异有统计学意义(P0.05),L-(+)-MTX/A549和亲本细胞组之间VEGF及MMP-2m RNA与内参的比值的比值则无统计学意义(P0.05)。说明D-(-)-MTX/A549细胞中VEGF、MMP-2的表达量均大于L-(+)-MTX/A549细胞及亲本细胞。(4)经Western blot检测D-(-)-MTX/A549细胞表达VEGF及MMP-2蛋白量明显高于L-(+)-MTX/A549及亲本细胞,差异有统计学意义(P0.05)。L-(+)-MTX/A549细胞表达VEGF及MMP-2量较亲本细胞稍减少,但无明显统计学差异(P0.05)。结论:(1)建立不同MTX对映体的耐药细胞株,分别为L-(+)-MTX/A549及D-(-)-MTX/A549,两组耐药细胞株之间存在手性差异是本研究中的关键,为进一步探讨氨甲蝶呤(MTX)对映体耐药人非小细胞肺癌A549细胞的侵袭能力的相关研究工作奠定了坚实的基础;(2)MTX对映体耐药细胞中VEGF及MMP-2表达水平与肿瘤的侵袭性相关,D-(-)-M TX/A549细胞呈VEGF及MMP-2m RNA及蛋白高表达,与L-(+)-MTX/A549及亲本细胞之间存在差异。MTX对映体耐药后导致肿瘤的侵袭性发生改变,相对无药理作用的D-(-)-MTX能增强耐药细胞的侵袭转移能力。(3)VEGF及MMP-2在MTX对映体耐药细胞的表达与耐药细胞侵袭力能力的差异可能存在关联,为临床进一步研究VEGF及MMP-2在MTX对映体耐药细胞转移侵袭中的作用机制提供科学基础,为临床更加合理应用MTX对映体药物提供依据。
【关键词】：氨甲蝶呤 对映体 基质金属蛋白酶-2 血管内皮生长因子 肿瘤侵袭
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-14
• 第一部分 耐药细胞株建立14-25
• 研究材料与方法14-20
• 1 实验设备和仪器14-15
• 2 实验药物和试剂15-16
• 3 实验方法和步骤16-20
• 结果20-22
• 讨论22-25
• 第二部分MTX对映体耐药A549细胞中VEGF、MMP-2 的表达及其与侵袭能力差异的研究25-39
• 研究材料与方法25-34
• 1 实验设备和仪器25
• 2 实验药物和试剂25-27
• 3 实验方法及步骤27-34
• 结果34-37
• 讨论37-39
• 结论39-40
• 参考文献40-44
• 综述44-57
• 参考文献52-57
• 作者简介及读研期间主要科研成果57-58
• 致谢58

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本文编号：697805