TTF1-NP诱导裸鼠肝癌移植瘤细胞凋亡的内质网应激作用机制

发布时间：2017-08-19 18:33

  本文关键词：TTF1-NP诱导裸鼠肝癌移植瘤细胞凋亡的内质网应激作用机制

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【摘要】：目的 探讨中药珍珠梅黄酮纳米粒(5,2',4'-trihydroxy-6,7,5'-trimethoxy flavone nanoparticle, TTF1-NP)对人肝癌HepG-2细胞裸鼠移植瘤的凋亡作用及其内质网应激作用机制。方法 建立人肝癌HepG-2细胞裸鼠移植瘤模型,将裸鼠分为模型组、TTF1-NP低剂量给药组、TTF1-NP中剂量给药组、TTF1-NP高剂量给药组和阿霉素组,给药组裸鼠分别按照5 μmol·kg-1、10 μmol·kg-1和20 μmol·kg-1的剂量尾静脉注射TTF1-NP,给药10天后处死裸鼠并计算其肿瘤生长抑制率；采用HE染色观察肿瘤细胞的形态学变化；利用TUNEL原位细胞凋亡检测法检测肿瘤细胞的凋亡情况；采用免疫组织化学法检测内质网应激关键蛋白GRP78、p-JNK和Caspase12的表达；利用Western blot进一步检测GRP78、p-JNK、 Caspase12和CHOP的表达。结果1.裸鼠常规指标检测结果显示：随着TTF1-NP给药浓度的增加,裸鼠重量逐渐下降,肿瘤体积逐渐减小,肿瘤重量明显下降,计算肿瘤生长抑制率结果表明,5μnol·kg-1、10 μmol·kg-1、20μmol·kg-1 TTF1-NP给药组和阿霉素组对肿瘤细胞均有抑制作用,其肿瘤生长抑制率分别为51.2%、54.2%、61.8%和65.9%；2.HE染色结果显示：光镜下观察,模型组裸鼠移植瘤细胞完整,细胞排列紧密,细胞核规则,细胞数目较多。随着给药浓度的增加,肿瘤细胞数目逐渐减少,形态改变,细胞核固缩、碎裂,核深染并伴有炎症细胞浸润；3. TUNEL原位细胞凋亡检测结果显示：模型组裸鼠移植瘤细胞的细胞核被苏木素染成蓝紫色,细胞结构完整,凋亡的阳性表达区域极少见。随着给药浓度的增加,凋亡的棕色阳性表达区域逐渐增大,其中20 μmol·kg-1 TTF1-NP给药组细胞凋亡的阳性表达区域超过阿霉素组,细胞凋亡指数高达24%；4.免疫组织化学检测结果显示：随着TTF1-NP给药浓度的增加,内质网应激关键蛋白GRP78、p-JNK和Caspase12的棕色阳性表达区域明显增大,其中20 pmol·kg-1 TTF1-NP给药组伴有明显的炎症细胞侵润；5. Western blot检测结果显示：与模型组相比,随着TTF1-NP给药浓度的增加,GRP78、p-JNK、Caspase12和CHOP的蛋白表达量明显升高,与免疫组织化学检测结果相一致。结论TTF1-NP可以诱导裸鼠肝癌移植瘤细胞凋亡,内质网应激途径是其主要作用机制之一。
【关键词】：珍珠梅 裸鼠 内质网应激 细胞凋亡
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 中英文缩略语9-12
• 第一章 引言12-18
• 第二章 材料18-20
• 2.1 实验仪器18-19
• 2.2 实验试剂19-20
• 2.3 实验动物20
• 第三章 方法20-26
• 3.1 细胞及培养20
• 3.2 裸鼠移植瘤模型建立20
• 3.3 肿瘤生长抑制率20-21
• 3.4 肝癌细胞形态学检测21
• 3.5 肝癌细胞凋亡检测21-22
• 3.6 免疫组织化学染色检测GRP78、Caspase12和p-JNK蛋白的表达22-24
• 3.7 Western blot检测GRP78、p-JNK、Caspase12和CHOP的表达24-26
• 3.7.1 提取裸鼠移植瘤全蛋白24
• 3.7.2 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量24-25
• 3.7.3 Western blot检测GRP78、p-JNK、Caspase12等的表达25-26
• 3.8 数据处理及分析26
• 第四章 结果26-33
• 4.1 TTF1-NP对裸鼠移植瘤细胞的抑制作用26-28
• 4.2 TTF1-NP对肝癌细胞形态学改变的影响28
• 4.3 TTF1-NP对裸鼠肝癌移植瘤细胞凋亡的影响28-29
• 4.4 免疫组织化学检测GRP78、Caspase12和p-JNK的表达29-31
• 4.5 Western blot检测GRP78、p-JNK、Caspase12和CHOP表达31-33
• 第五章 讨论33-36
• 第六章 结论36-37
• 参考文献37-44
• 致谢44

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1 刘荣荣;TTF1-NP诱导裸鼠肝癌移植瘤细胞凋亡的内质网应激作用机制[D];延边大学;2016年

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本文编号：702302