FBW7、MCL1在肺腺癌紫杉醇耐药性中的表达差异及作用

发布时间：2017-08-21 03:23

  本文关键词：FBW7、MCL1在肺腺癌紫杉醇耐药性中的表达差异及作用

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【摘要】：背景肺癌是严重危害人类健康的恶性肿瘤之一,也是目前全世界发病率和死亡率最高的癌症之一。据国家卫生部公布的《全国第三次死因调查》报告[1],肺癌已替代肝癌成为我国恶性肿瘤死亡原因第一位(约占全部恶性肿瘤致死的22.7%)。目前治疗肺癌的手段仍以手术、化疗和放疗为主。肺癌包括了非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)和小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)两大类,而占肺癌80%的非小细胞肺癌的患者中[2],有65%-80%的NSCLC患者确诊时已属局部晚期或发生远处转移,错失手术机会,因此放、化疗是晚期NSCLC患者的主要治疗手段。其中紫杉醇类药物不仅可与铂类药物联用作为一线治疗,更值得关注的是,多西紫杉醇被认为是非小细胞肺癌二线治疗的金标准。然而耐药的产生极大地限制了其临床疗效。因此,要想进一步改善患者的生存期和生活质量,一方面,需要提高紫杉醇类药物的敏感性,探索其药物效应预测因子,实现个体化治疗,最大限度地避免耐药;另一方面,不断探索新的治疗靶点亦是NSCLC治疗的主要方向。紫杉醇(paclitaxel,PTX)是从植物红豆杉的叶子中提取到的碱性物质,研究表明PTX有很好的抗肿瘤药理活性,但是PTX耐药的产生限制了其临床应用。髓细胞白血病基因-1(myeloid cell leukemia-1,MCL1)是Bcl-2家族的一个新成员,在凋亡调控中具有重要作用[3],F-盒和含蛋白7的WD重复结构域(F-box and WD repeat domain-containing protein7,FBW7)是一种肿瘤抑制蛋白,其基因突变或表达降低可造成多种肿瘤的发生[4],本文通过检测肺癌细胞A549及A549/T中FBW7和MCL1的蛋白质水平和m RNA水平与紫杉醇类药物敏感性的关系,探讨FBW7和MCL1作为紫杉醇类药物效应预测因子的潜在价值,为临床个体化治疗提供指引。目的观察PTX作用于人肺腺癌A549细胞和A549/T细胞后,对细胞增殖的影响,以及MCL1和FBW7蛋白和m RNA的表达水平,来研究PTX抑制肺癌增殖以及耐药的相关机制。方法1、PTX对细胞增殖的影响:不同浓度的PTX作用于人肺腺癌A549和A549/T两种细胞于不同的时间,应用MTT法检测细胞的增殖抑制率。2、PTX对A549及A549/T两种细胞中MCL1、FBW7m RNA表达的影响:不同浓度PTX作用A549及A549/T两种细胞后,通过实时荧光PCR(Quantitative real-time PCR,q PCR)来检测A549及A549/T两种细胞中MCL1、FBW7的m RNA表达。3、比较A549及A549/T细胞中MCL1、FBW7蛋白表达情况:通过采用MCL1、FBW7抗体进行细胞免疫组化技术,检测A549及A549/T两种细胞中MCL1、FBW7蛋白表达。4、PTX对A549及A549/T两种细胞中MCL1、FBW7蛋白表达的影响:不同浓度的PTX作用于A549及A549/T两种细胞后,应用蛋白质印迹法检测MCL1、FBW7蛋白的表达。结果1、PTX对细胞增殖的影响:不同时间、不同浓度PTX作用A549及A549/T两种细胞后,能抑制细胞的增殖,且呈时间-浓度依赖性(P0.05),但是耐药细胞A549/T的药物浓度明显高于不耐药细胞A549的。2、PTX对A549及A549/T两种细胞中MCL1、FBW7m RNA表达的影响:不同浓度PTX作用A549及A549/T两种细胞后,q PCR显示A549MCL1m RNA表达下调,FBW7m RNA表达上调,而耐药细胞对此浓度无明显变化。3、比较A549及A549/T细胞中MCL1、FBW7蛋白表达情况:应用细胞免疫组化技术,检测出A549细胞中MCL1蛋白的表达低于及A549/T细胞的,而A549细胞中FBW7蛋白的表达高于A549/T。4、PTX对A549及A549/T两种细胞中MCL1、FBW7蛋白表达的影响:不同浓度的PTX作用于A549及A549/T两种细胞后,western显示A549细胞中MCL1蛋白表达下调,FBW7蛋白表达上调,耐药细胞对此浓度无明显变化。结论1、PTX能抑制人肺腺癌A549及A549/T细胞的增殖,但对于A549/T细胞所需要的紫杉醇浓度显著高于A549细胞的。2、不同浓度PTX作用于A549细胞后,FBW7表达上调,而MCL1表达下调,但相同的浓度作用于A49/T细胞后FBW7及MCL1的表达无明显变化。3、在耐紫杉醇的细胞中FBW7表达下降而Mcl-1高表达,这提示与紫杉醇的耐药可能有关,但具体机制有待进一步研究。
【关键词】：紫杉醇 肺癌 耐药性 MCL1 FBW7
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 中文摘要4-8
• ABSTRACT8-13
• 1 前言13-16
• 2 材料与方法16-31
• 2.1 实验材料16-18
• 2.2 实验方法18-31
• 3 实验结果31-35
• 3.1 A549 及A549/T细胞对紫杉醇的体外敏感性不同31-32
• 3.2 PTX对A549 及A549/T两种细胞中MCL1、FBW7MRNA表达的影响32-33
• 3.3 比较A549 及A549/T细胞中MCL1、FBW7 蛋白表达情况33
• 3.4 PTX调节MCL1、FBW7 蛋白的表达33-35
• 4 讨论35-38
• 5 结论38-39
• 参考文献39-43
• 综述 紫杉醇耐药的研究进展43-55
• 参考文献50-55
• 主要缩略词表55-56
• 攻读学位期间发表的学术论文56-57
• 致谢57-58

【引证文献】

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 王洁;;晚期非小细胞肺癌化疗进展[A];中华医学会第五届全国胸部肿瘤及内窥镜学术会议论文汇编[C];2011年

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本文编号：710551