体外多胺微环境对人结肠癌细胞HCT116迁移的影响

发布时间：2017-08-22 02:04

  本文关键词：体外多胺微环境对人结肠癌细胞HCT116迁移的影响

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【摘要】：实验目的:多胺是一种长链脂肪族类化合物,天然多胺主要包括腐胺(putrescine,Put)、精胺(spermine,Spm)和精脒(spermidine,Spd)。多胺广泛存在于自然界,是大多数生命器官所必需的。生理性多胺在肿瘤组织中的含量相对于正常组织而言是显著增高的,并且与肿瘤的发生、发展及转移密切相关。本实验通过模拟人体高、正常(中)和低三种不同多胺微环境对结肠癌细胞生长和转移能力及相关分子机制的研究。实验方法:选取人结肠癌细胞HCT116作为研究对象,采用基因转染技术将Akt1基因转染到HCT116细胞中。将外源性多胺按高多胺浓度(腐胺0.8 nmol/m L、精脒10.0 nmol/m L、精胺5.0 nmol/m L);正常多胺浓度(腐胺0.08 nmol/m L、精脒1.0 nmol/m L、精胺0.5nmol/m L);低多胺浓度(腐胺0.008 nmol/m L、精脒0.1 nmol/m L、精胺0.05 nmol/m L)三组分别加入HCT116细胞和HCT116-Akt1细胞中,分别培养15天和30天。每种细胞另设阴性对照。应用克隆形成实验来检测不同多胺浓度对两种不同细胞增殖能力的影响;应用Transwell迁移实验(未铺胶)来检测不同多胺浓度对两种不同细胞迁移能力的影响;运用细胞划痕实验来检测不同多胺浓度对两种不同细胞伤口愈合能力的影响;采用蛋白免疫印迹实验(Western blot)检测Akt1、AKT、鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)、金属蛋白酶(MMP2)、整合素(Integrinα6)、精脒/精胺乙酰转移酶(spermidine/spermine N1-acetyltransferase,SSAT)等多种蛋白在不同浓度的多胺微环境下发生的变化。实验结果:HCT116及HCT116-Akt1细胞在不同多胺微环境下显示了不同的增殖和迁移能力,且随着多胺浓度的升高其增殖和迁移能力逐渐增强,并呈时间、剂量依赖性。HCT116-Akt1细胞在相同多胺浓度的情况下其增殖和迁移能力比HCT116细胞显著增强。蛋白免疫印迹实验结果表明多胺是通过影响Akt1、鸟氨酸脱羧酶(ODC)、精脒/精胺乙酰转移酶(SSAT)、整合素(Integrinα6)等蛋白促进肿瘤细胞的增殖及转移。实验结论:高多胺微环境能够促进HCT116细胞和HCT116-Akt1细胞增殖和转移,且HCT116-Akt1细胞的增殖和转移能力显著强于HCT116细胞,提示Akt1在多胺促进肿瘤转移过程中具有重要的作用。
【关键词】：结肠癌 多胺 Akt1 细胞运动 增殖
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.35
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 第1章 文献综述10-24
• 1 引言10
• 2 多胺的研究现状10-17
• 2.1 概述10-11
• 2.2 细胞多胺代谢途径11-12
• 2.3 多胺的生物学功能12-14
• 2.4 多胺与肿瘤14-17
• 3 PI3K/Akt信号传导通路的研究进展17-24
• 3.1 PI3K/Akt结构特点17-18
• 3.2 PI3K/Akt通路的激活18-19
• 3.3 Akt的活化与肿瘤的关系19
• 3.4 Akt介导肿瘤发生的机制19-20
• 3.5 Akt的激活与肿瘤的转移20-21
• 3.6 PI3K/Akt信号传导通路在结肠癌发生发展中的研究21-24
• 第2章 实验试剂、材料和仪器24-32
• 1 主要试剂及材料24-26
• 1.1 肿瘤细胞株24
• 1.2 细胞培养试剂24
• 1.3 磷酸盐缓冲溶液主要试剂24
• 1.4 蛋白免疫印迹主要试剂24-26
• 1.5 其他主要试剂及材料26
• 2 主要溶液的配制26-30
• 2.1 细胞培养试剂26-27
• 2.2 蛋白免疫印迹试剂27-30
• 2.3 其他试剂的配制30
• 3 实验仪器30-32
• 第3章 实验方法与步骤32-40
• 1 细胞培养32-33
• 1.1 细胞复苏32
• 1.2 细胞株传代培养32
• 1.3 多胺微环境下细胞的培养32-33
• 2 蛋白免疫印迹实验33-36
• 2.1 HCT116细胞株中Akt1高表达的验证33-35
• 2.2 HCT116和HCT116-Akt1细胞株中迁移蛋白的检测35-36
• 3 细胞迁移实验36-37
• 3.1 细胞划痕实验36-37
• 3.2 Transwell实验37
• 4 细胞单克隆形成实验37-38
• 5 统计学分析38-40
• 第4章 实验结果40-52
• 1 Akt1高表达HCT116细胞株的验证40
• 2 体外多胺微环境对细胞运动能力的影响40-44
• 2.1 划痕实验40-43
• 2.2 Transwell小室迁移实验43-44
• 3 体外多胺微环境对细胞克隆形成能力的影响44-48
• 4 体外多胺微环境对有关转移蛋白的影响48-50
• 5 小结50-52
• 讨论52-54
• 参考文献54-60
• 附录60-62
• 致谢62-63

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本文编号：716406