RBM10抑制人肺腺癌细胞生长及其相关机制的实验研究

发布时间：2017-08-22 12:32

  本文关键词：RBM10抑制人肺腺癌细胞生长及其相关机制的实验研究

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【摘要】：目的:RBM是新近发现的结构功能相似的RNA结合基序蛋白家族,可能与m RNA的剪接、翻译和稳定性有关。RBM10与RBM5是RBM的重要成员,目前研究表明,RBM10与RBM5结构相似,具有高度同源性,是潜在的肿瘤抑制基因。现有证据表明RBM5是肺腺癌的抑癌基因,可以抑制肺腺癌细胞的生长增殖。然而,RBM10是否抑制肺腺癌细胞的生长增殖尚未可知。为了研究RBM10在肺腺癌发病机制中的作用,我们搜集了41例原发肺腺癌患者的肺癌组织及癌旁正常肺组织标本(取自同一患者),采用RT-PCR和Western blot方法分别观察RBM10在肺腺癌组织中m RNA及蛋白的表达情况,同时分析其表达水平与肺腺癌患者临床病理特点的相关性。同时通过体外实验进一步观察重组慢病毒感染肺腺癌A549及H1299细胞株,观察稳定RBM10过表达对肺腺癌细胞增殖和细胞周期的影响,目的为明确RBM10在肺腺癌发病中作用的分子机制,为探寻肺癌治疗新靶点及分子靶向治疗奠定基础。研究方法:1.采用半定量RT-PCR及Western blot方法分别检测41例人肺腺癌组织RBM10 m RNA及蛋白的表达情况,统计分析RBM10的蛋白表达水平和临床病理特点(包括性别、年龄、吸烟史、淋巴结转移、肺癌TMN分期)的相关性。2.将重组慢病毒同时感染两种肺腺癌A549及H1299细胞株,获得稳定RBM10过表达细胞株。3.采用细胞增殖实验(MTT)检测稳定RBM10过表达对A549及H1299细胞株增殖的影响。4.采用细胞克隆实验检测稳定RBM10过表达对A549及H1299细胞株克隆形成能力的影响。5.通过流式细胞仪检测稳定RBM10过表达对A549和H1299细胞生长周期的影响。结果:(1)与癌旁组织相比,RBM10 m RNA和蛋白在肺腺癌组织中表达水平显著降低,甚至缺失,差异具有统计学意义(P0.05)。RBM10蛋白在人肺腺癌组织中表达水平与患者年龄、性别、吸烟史及淋巴结转移等临床病理指标无相关性;而与TNM分期呈负相关(P0.05)。(2)成功构建了稳定RBM10过表达的A549和H1299细胞株。(3)MTT结果表明稳定RBM10过表达显著抑制A549和H1299细胞株增殖。(4)细胞克隆实验表明稳定RBM10过表达显著抑制A549和H1299细胞株克隆形成能力。(5)细胞周期实验表明稳定RBM10过表达可使A549细胞周期阻滞于G0/G1期,而H1299细胞周期阻滞于S期。结论:(1)RBM10在人肺腺癌癌组织中表达下调,与肺腺癌组织的TNM分期呈负相关,提示RBM10缺失可能参与肺腺癌的发生、发展等过程。(2)利用稳定RBM10过表达的体外A549和H1299细胞株模型,发现稳定RBM10过表达抑制肺腺癌细胞生长,使肺腺癌细胞的克隆形成能力减弱,细胞周期阻滞。提示RBM10表达上调抑制肺腺癌生长。
【关键词】：RBM10 肺腺癌 A549细胞 H1299细胞 MTT 克隆形成 细胞周期
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 英文缩写词表11-12
• 第1章 绪论12-16
• 1.1 RBM12-13
• 1.2 RBM10基因的结构特点及与其他RBM同源基因的联系13-14
• 1.2.1 RBM10基因的结构特点13
• 1.2.2 RBM10与其他RBM同源基因的联系13-14
• 1.3 RBM10与疾病及肿瘤的关系14-16
• 第2章 实验研究与方法16-24
• 2.1 RBM10在肺腺癌组织中的表达16-21
• 2.1.1 主要仪器16-17
• 2.1.2 主要试剂17
• 2.1.3 样本来源17-18
• 2.1.4 RBM10引物设计与合成18
• 2.1.5 RT-PCR18-19
• 2.1.6 Western Blot19-20
• 2.1.7 统计学方法20-21
• 2.2 稳定RBM10过表达基因对肺腺癌细胞系生长的作用及机制21-24
• 2.2.1 主要仪器21
• 2.2.2 主要试剂21
• 2.2.3 慢病毒感染A549及H1299细胞株21-22
• 2.2.4 MTT实验22
• 2.2.5 细胞克隆实验22
• 2.2.6 流式细胞术检测细胞的周期22-23
• 2.2.7 统计学方法23-24
• 第3章 实验结果24-30
• 3.1 RBM10在肺腺癌组织中的表达24-26
• 3.2 稳定RBM10过表达对肺腺癌细胞系生长的抑制作用及机制研究26-30
• 3.2.1 用GFP检测A549及H1299细胞株的感染效率（100×）26
• 3.2.2 稳定RBM10过表达抑制A549及H1299细胞株的增殖26-27
• 3.2.3 稳定RBM10过表达抑制A549及H1299细胞株的克隆形成27-28
• 3.2.4 稳定RBM10过表达诱导A549细胞G0/G1期细胞周期阻滞，，H1299细胞S期细胞周期阻滞28-30
• 第4章 讨论30-33
• 第5章 结论33-34
• 参考文献34-38
• 作者简介及在研究生期间所获得的研究结果38-39
• 致谢39

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 陈万青;张思维;曾红梅;郑荣寿;邹小农;赵平;吴良有;李光琳;赫捷;;中国2010年恶性肿瘤发病与死亡[J];中国肿瘤;2014年01期

2 昌盛;代敏;任建松;陈玉恒;郭兰伟;;中国2008年肺癌发病、死亡和患病情况的估计及预测[J];中华流行病学杂志;2012年04期

3 王孟山,张广宇;癌基因和抑癌基因在肺癌研究中的应用和发展趋势[J];中华结核和呼吸杂志;1998年05期

本文编号：719206