XPC蛋白缺失对膀胱癌细胞自噬影响的初步研究

发布时间：2017-08-23 04:27

  本文关键词：XPC蛋白缺失对膀胱癌细胞自噬影响的初步研究

  更多相关文章： 自噬 膀胱癌 着色性干皮病C组基因 DNA损伤

【摘要】：背景与目的:着色性干皮病C组基因(xeroderma pigmentosum group C,XPC)蛋白是核苷酸切除修复(nucleotide excision repair,NER)中最早的损伤识别因子,在DNA的损伤应答及维持细胞遗传稳定性方面扮演重要角色。自噬是细胞进化过程中高度保守的一个维持稳态的生命过程,具有降解蛋白质及清除细胞器的能力,在生物体正常发育及应对、处理环境威胁时发挥极为关键的作用。自噬同样参与到DNA损伤应答过程中,并在DNA损伤应答过程中发挥重要作用。在我们早期研究中发现,作为最早的损伤识别因子,XPC还扮演很多其他角色,但其是否参与自噬,尚未见报道。本研究将针对XPC蛋白缺失对膀胱癌细胞自噬的影响进行初步研究,以期为膀胱癌的临床治疗提供更多线索。方法:我们利用课题组已建好的稳定抑制XPC蛋白表达的膀胱癌T24及HEK293细胞模型;使用氯喹(chloroquine,CQ)抑制自噬小体的降解,从而更好的观察自噬小体的积累情况;使用免疫印迹技术观察XPC干扰前后自噬表征蛋白LC3Ⅱ的表达情况;瞬时转染GFP-LC3,使用荧光显微镜观察细胞的荧光聚集情况;CCK-8法观察细胞的增殖情况;免疫印迹技术观察自噬及凋亡相关蛋白的表达。结果:1.干扰XPC后,自噬小体聚集减少,GFP-LC3荧光明显聚集的细胞比例降低;2.使用顺铂诱导细胞自噬发生,发现干扰XPC后,自噬小体聚集减少,GFP-LC3荧光明显聚集的细胞比例降低;3.使用顺铂持续刺激HEK293细胞,干扰XPC后LC3Ⅱ的表达趋势发生改变:HEK293NC细胞对顺铂反应缓慢,为逐渐上升后逐渐下降;而HEK293shXPC细胞对顺铂反应迅速,在迅速达到高峰后逐渐下降;4.使用顺铂持续刺激膀胱癌T24细胞,发现干扰XPC后LC3Ⅱ的表达趋势发生改变:膀胱癌T24NC细胞对顺铂反应缓慢,为逐渐上升;而膀胱癌T24sh XPC细胞对顺铂反应迅速,在迅速达到高峰后逐渐下降。5.干扰XPC后,HEK293细胞对顺铂敏感性增强,DNA损伤应答相关蛋白p-ATM(S1981)、p53表达均上调;膀胱癌T24细胞对顺铂敏感性降低,DNA损伤应答相关蛋白p-ATM(S1981)表达上调、p53表达下调。结论:XPC蛋白缺失后,HEK293细胞及膀胱癌T24细胞的自噬降低,同时在顺铂诱导的DNA损伤下自噬降低,HEK293细胞对顺铂的敏感性增强,而膀胱癌T24细胞对顺铂的敏感性降低;探讨XPC蛋白缺失导致自噬下降造成两种细胞对化疗药物顺铂敏感性结局差异的分子机制,发现p53的诱导状态可能在细胞是否发生凋亡中发挥关键作用。
【关键词】：自噬 膀胱癌 着色性干皮病C组基因 DNA损伤
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.14
【目录】：

• 缩略语表4-5
• 英文摘要5-7
• 中文摘要7-9
• 第一章 前言9-12
• 第二章 XPC蛋白缺失对自噬的影响12-24
• 2.1 材料与方法12-17
• 2.2 结果17-22
• 2.3 讨论22-23
• 2.4 小结23-24
• 第三章 XPC蛋白缺失对顺铂诱导自噬的影响24-34
• 3.1 材料与方法24-28
• 3.2 结果28-32
• 3.3 讨论32-33
• 3.4 小结33-34
• 第四章 XPC蛋白缺失后自噬对凋亡的影响及分子机制34-46
• 4.1 材料与方法34-37
• 4.2 结果37-43
• 4.3 讨论43-45
• 4.4 小结45-46
• 全文总结46-47
• 参考文献47-51
• 文献综述 DNA损伤与自噬51-60
• 参考文献57-60
• 硕士在读期间发表文章60-61
• 致谢61

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本文编号：722966