Nras突变引起小鼠白血病的研究

发布时间：2017-08-23 12:25

  本文关键词：Nras突变引起小鼠白血病的研究

  更多相关文章： Nras基因突变小鼠 端粒酶敲除小鼠 G-CSF 白血病 辐照 骨髓移植

【摘要】：Nras基因突变引起人类白血病,但是具体机制不清楚。造血系统特异的Nras基因突变条件敲入小鼠在六个月时发生白血病。研究发现,Nras信号通路对粒细胞和单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)高度敏感。GM-CSF与G-CSF都可以促进外周血中性粒细胞生存增殖。G-CSF能促进干细胞增殖,但G-CSF介导的干细胞增殖是否可以促进白血病的发生是未知的。我们把G-CSF试剂注射到移植Nras基因突变小鼠体内,观察G-CSF是否可以促进Nras基因突变条件敲入小鼠迅速发生白血病。结果显示注射G-CSF没有明显地促进Nras突变引起的白血病作用。有证据表明在年老的造血微环境可以促进干细胞的增殖,但是衰老的微环境是否能快速诱发白血病的发生是未知的。第二代端粒酶敲除小鼠(G2Terc-/-)端粒缩短,引起的造血干细胞微环境的衰老。为研究造血干细胞微环境衰老对Nras突变引起白血病的作用。我们把Nras基因突变小鼠的骨髓细胞移植到致死剂量照射的G2Terc-/-小鼠体内。但是G2Terc-/-小鼠很快死亡,分析没有发现白血病的表型出现。可能是因为G2Terc-/-小鼠为早衰模型,对致死剂量辐射(160kv,4m A--0.2Gy/min,40min)非常敏感,最终导致G2Terc-/-小鼠获得白血病前死亡。通过上述实验,得出结论G-CSF试剂注射Nras基因突变小鼠体内并没有促发白血病。由于G2Terc-/-小鼠对致死剂量照射敏感,因此无法确定衰老微环境是否促发Nras突变引起的白血病。
【关键词】：Nras基因突变小鼠 端粒酶敲除小鼠 G-CSF 白血病 辐照 骨髓移植
【学位授予单位】：杭州师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R733.7
【目录】：

• 致谢7-8
• 摘要8-9
• Abstract9-10
• 1.引论10-18
• 2. 材料与方法18-37
• 2.1 实验动物、试剂及相关仪器18-20
• 2.1.1 实验动物18
• 2.1.2 试剂18-19
• 2.1.3 主要实验仪器19-20
• 2.2 实验方法20-37
• 2.2.1 G2 Terc-/-基因敲除小鼠的建立及PCR方法鉴定G2 Terc-/-和Nras/Vav-icre小鼠基因型20-25
• 2.2.1.1 G2Terc-/-基因敲除小鼠的建立20-22
• 2.2.1.2 盐析法提DNA方法22
• 2.2.1.3 G2基因敲除小鼠及Nras/Vav-icre小鼠PCR方法鉴定小鼠基因型22-25
• 2.2.2 小鼠骨髓细胞的分离，，脾脏和胸腺，淋巴结的称重25-27
• 2.2.2.1 实验准备25
• 2.2.2.2 小鼠骨髓细胞的分离25-26
• 2.2.2.3 脾脏和胸腺，淋巴结组织的称重26-27
• 2.2.3 外周血检测27-28
• 2.2.4 Giemsa染色方法28
• 2.2.5 受体小鼠辐照28-29
• 2.2.6 骨髓细胞冻存与复苏29-30
• 2.2.7 流式细胞仪分析骨髓造血干/祖细胞比例30-32
• 2.2.8 全骨髓移植32
• 2.2.9 磁珠法富集造血干细胞及进一步染色分选32-33
• 2.2.10 G-CSF促进骨髓干细胞体外克隆形成实验33
• 2.2.11 G-CSF腹腔注射实验33-34
• 2.2.12 流式细胞仪分析小鼠骨髓细胞中淋系细胞和髓系细胞34-35
• 2.2.13 流式细胞仪检测外周血中各系细胞数量和比例35
• 2.2.14 Nras骨髓细胞移植到WT受体小鼠制备实验35-37
• 3.结果分析37-55
• 3.1 PCR鉴定基因型37-38
• 3.2 Nras基因突变小鼠6个月时发生白血病的重复实验38-42
• 3.2.1 体重及其器官的称重38-39
• 3.2.2 白细胞数目检测39-40
• 3.2.3 Giemsa染色40
• 3.2.4 骨髓干细胞流式分析图40-41
• 3.2.5 骨髓B.M细胞流式分析41-42
• 3.3 辐照剂量的测定实验42-43
• 3.4 G-CSF药效测试的体外实验43-44
• 3.5 G-CSF药效测试的体内实验44-45
• 3.6 Nras-WT小鼠注射G-CSF实验45-46
• 3.7 NRAS基因突变小鼠细胞移植到G2小鼠体内46-55
• 3.7.1 体重及其器官的称重47-48
• 3.7.2 血球计数分析48-49
• 3.7.3 骨髓干细胞流式分析49
• 3.7.4 骨髓T,B,M细胞流式分析49-52
• 3.7.5 骨髓细胞MPP.GMP.MEP.CLP流式分析52-55
• 4.讨论55-57
• 5. 结论与展望57-59
• 参考文献59-64

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