HDAC1-siRNA干扰质粒对膀胱癌RT112细胞凋亡的影响

发布时间：2017-08-24 10:22

  本文关键词：HDAC1-siRNA干扰质粒对膀胱癌RT112细胞凋亡的影响

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【摘要】：目的：观察组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）siRNA对膀胱癌RT112细胞HDAC1基因、PTEN基因及凋亡相关基因Bax、Bcl-2的影响和对其凋亡影响，并对其可能机制进行初步的讨论。 方法：体外培养人类膀胱癌RT112细胞，实验分4组，空白对照、HDAC1-control组、HDAC1-siRNA组和SAHA处理组。设计了2条HDAC1-siRNA序列和1条无关序列，构建HDAC1-siRNA重组质粒，分别转染RT112细胞，选取转染效率最高的HDAC1-siRNA-2序列进行后面的实验。流式细胞术检测各组细胞凋亡率变化，四组处理的细胞分别提取mRNA和蛋白质，采用Real-time PCR技术检测HDAC1、Bax、Bcl-2基因mRNA水平，采用Westernblot技术检测HDAC1、PTEN、Bax、Bcl-2蛋白的表达水平。 结果：（1）与对照组相比，HDAC1-siRNA和SAHA组在mRNA水平上，HDAC1表达下降，Bcl-2下调，Bax没有显著差异；在蛋白水平上，HDAC1下调，Bcl-2下调，PTEN上调，Bax没有显著差异；（2）流式细胞术分析HDAC1-siRNA和SAHA在不同程度上促进RT112细胞凋亡。 结论：1、构建的HDAC1-siRNA重组质粒可以在体外干扰RT112细胞HDAC1mRNA和蛋白的表达。 2、HDAC1-siRNA重组质粒可以诱导RT112细胞的凋亡，可能与上调组蛋白乙酰化的水平，促抑癌基因PTEN表达和下调Bcl-2/Bax的比值有关。
【关键词】：HDAC1-siRNA PTEN SAHA 膀胱癌 细胞凋亡
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.14
【目录】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-6
• Abstract6-10
• 英文缩写词表10-11
• 第1章 文献综述11-18
• 1.1 膀胱癌概述11-12
• 1.2 组蛋白去乙酰化酶12-16
• 1.2.1 HDACs 组成和研究进展12-13
• 1.2.2 HDAC 的生物学效应13
• 1.2.3 经典 HDAC 家族与癌症13-14
• 1.2.4 HDAC 抑制剂及在癌症治疗中的应用14-16
• 1.3 细胞凋亡与 Bcl-2 家族16
• 1.4 PTEN 简述16-17
• 1.5 RNAi 干扰17-18
• 第2章 材料和方法18-39
• 2.1 实验材料18-26
• 2.1.1 细胞株18
• 2.1.2 主要仪器及试剂18-21
• 2.1.3 主要试剂配制21-26
• 2.2 实验方法26-39
• 2.2.1 siRNA 重组质粒的转化、提取与鉴定26-29
• 2.2.2 RT112 细胞培养29-30
• 2.2.3 重组质粒转染细胞30-31
• 2.2.4 提取细胞总 RNA31-32
• 2.2.5 RT-PCR 检测 HDAC1-siRNA 干扰效果32-34
• 2.2.6 Real-time PCR 检测 siRNA 干扰 RT112 细胞 HDAC1、Bax、Bcl-2 基因 mRNA 的表达情况34-35
• 2.2.7 Western blot 检测 HDAC1、Bax、Bcl-2、PTEN、GAPDH 蛋白的表达35-37
• 2.2.8 流式细胞术检测 HDAC1-siRNA 对 RT112 细胞凋亡的影响37-38
• 2.2.9 统计学计算38-39
• 第3章 实验结果39-47
• 3.1 重组质粒的酶切与测序鉴定39-40
• 3.1.1 重组质粒的酶切39-40
• 3.1.2 重组质粒的测序鉴定40
• 3.2 倒置荧光显微镜观察 HDAC1-siRNA 转染 RT112 细胞40-41
• 3.3 RT-PCR 结果41-42
• 3.4 Real-time PCR 检测 mRNA 表达结果42-44
• 3.5 Western Blot 检测蛋白表达结果44-45
• 3.6 流式细胞术检测 HDAC1-siRNA 对 RT112 细胞凋亡结果45-47
• 第4章 结论47-48
• 第5章 讨论48-50
• 参考文献50-54
• 作者简介54-55
• 致谢55

【参考文献】

中国博士学位论文全文数据库 前2条

1 潘丽娜;肿瘤抑制基因PTEN的表观遗传调控及其抗肿瘤机制研究[D];东北师范大学;2009年

2 孙阳;组蛋白去乙酰化酶抑制剂抑制膀胱尿路上皮癌作用机制的研究[D];复旦大学;2012年

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本文编号：730755