HIF-1及AhR信号通路在A549细胞中相互作用的研究

发布时间：2017-08-24 16:05

  本文关键词：HIF-1及AhR信号通路在A549细胞中相互作用的研究

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【摘要】：目的:研究缺氧条件下,HIF-1与AhR信号通路在A549细胞中的相互作用。方法:(1)采用实时荧光定量PCR法筛选CoCl2作用A549细胞的最佳浓度及时间;(2)采用MTT法筛选B(a)P作用A549细胞的最适浓度范围及时间;(3)A549细胞按1×106个/瓶接种培养瓶中,37℃、5%CO2培养箱中培养24h(细胞基本贴壁)后,加CoCl2及B(a)P溶液,培养一定时间后收集细胞。采用实时荧光定量PCR、Western bolt法检测细胞VEGF、CAⅨ、CYP1A1和CYP1B1 mRNA及蛋白的表达情况,采用免疫沉淀法检测HIF-1α、AhR与HIF-1β/ARNT的结合能力。结果:(1)通过实时荧光定量PCR法检测HIF-1αmRNA的表达情况,筛选出CoCl2作用A549细胞的最佳浓度及时间为300μM作用24h;(2)通过MTT法检测B(a)P对A549细胞增值作用的影响,筛选出B(a)P作用A549细胞的最适浓度范围为0~8μM及时间为24h;(3)300μM CoCl2处理A549细胞后,加入不同浓度B(a)P作用24h,VEGF、CAⅨ、CYP1A1和CYP1B1 mRNA的表达量与对照组相比明显增加,当B(a)P浓度为8μM时,各基因mRNA的表达量约为对照组的5、7、7、12倍,差异具有统计学意义(P0.01);VEGF、CAⅨ、CYP1A1和CYP1B1蛋白的表达量与对照组相比明显增加,当B(a)P浓度为8μM时,各基因蛋白的表达量约为对照组的4、5、11、8倍,差异具有统计学意义(P0.01);AhR蛋白与HIF-1β/ARNT的结合能力与对照组相比明显降低,当B(a)P浓度为8μM时,AhR蛋白的结合量约为对照组的32%,差异具有统计学意义(P0.01),而HIF-1α蛋白与HIF-1β/ARNT的结合能力与对照组相比明显增加,当B(a)P浓度为8μM时,HIF-1α蛋白的结合量约为对照组的3倍,差异具有统计学意义(P0.01)。结论:缺氧条件下,B(a)P能上调HIF-1信号通路下游基因VEGF、CAⅨmRNA及蛋白的表达,增强HIF-1α蛋白与HIF-1β/ARNT的结合能力,并呈剂量依赖性;B(a)P能上调AhR信号通路下游基因CYP1A1、CYP1B1 mRNA及蛋白的表达,但AhR蛋白与HIF-1β/ARNT的结合能力受HIF-1α信号通路的抑制,并呈剂量依赖性。
【关键词】：缺氧诱导因子-1 芳香烃受体 AhR核易位体蛋白 苯并(a)芘 A549细胞
【学位授予单位】：内蒙古医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 中文摘要5-6
• 英文摘要6-8
• 前言8-9
• 1 实验材料9-13
• 1.1 实验细胞9
• 1.2 主要仪器9
• 1.3 主要试剂9-10
• 1.4 主要溶液及其配制10-13
• 2 实验方法13-18
• 2.1 A549细胞的培养及传代13
• 2.2 细胞乏氧微环境的建立13-15
• 2.3 实验用B(a)P浓度的选择15
• 2.4 药物处理A549细胞15
• 2.5 实时荧光定量PCR法检测VEGF、CAⅨ、CYP1A1和CYP1B1 mRNA表达15
• 2.6 Western blot法检测VEGF、CAⅨ、CYP1A1和CYP1B1的蛋白表达15-17
• 2.7 免疫沉淀法检测HIF-1 与AhR信号通路的相互作用17-18
• 2.8 统计学处理18
• 3 实验结果18-25
• 3.1 细胞乏氧微环境的建立18-20
• 3.2 实验用B(a)P浓度的选择20
• 3.3 实时荧光定量PCR法检测VEGF、CAⅨ、CYP1A1和CYP1B1 mRNA表达20-22
• 3.4 Western blot法检测VEGF、CAⅨ、CYP1A1和CYP1B1的蛋白表达22-24
• 3.5 免疫沉淀法检测HIF-1 与AhR信号通路的相互作用24-25
• 4 讨论25-27
• 5 结论27-28
• 参考文献28-31
• 文献综述31-47
• 参考文献41-47
• 缩略语表47-49
• 攻读学位期间发表文章情况49-50
• 个人简历50-51
• 致谢51

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

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4 Zhao-ji LIU;Gregg L.SEMENZA;Hua-feng ZHANG;;低氧诱导因子与乳腺癌转移(英文)[J];Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology);2015年01期

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本文编号：732212