GSK-3β对卵巢癌细胞SKOV3化疗耐药性的影响及其机制研究

发布时间：2017-08-24 17:26

  本文关键词：GSK-3β对卵巢癌细胞SKOV3化疗耐药性的影响及其机制研究

  更多相关文章： 糖原合成酶激酶3β 卵巢癌 顺铂 紫杉醇 耐药性

【摘要】：目的:卵巢癌的化疗耐药性是导致其临床疗效欠佳的重要因素之一,故明确其耐药的分子机制,并且探寻有效逆转卵巢癌耐药的分子靶点以及研制耐药逆转剂成为目前卵巢癌研究的热点和难点。糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase,GSK-3β)是近年来备受关注的肿瘤治疗的分子靶点之一,因此本研究拟探讨糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)对卵巢癌化疗耐药性的影响及其可能的机制,为其成为逆转卵巢癌耐药的分子靶点提供理论依据。方法:首先运用氯化锂(Lithium chloride,LiCl)增加失活性GSK-3β即p-GSK-3β(ser9)的水平,构建高表达p-GSK-3β(ser9)的卵巢癌细胞模型。随后采用MTT法筛选合适的LiCl浓度和作用时间作为后续实验LiCl的预处理,同样用MTT法分别检测顺铂和紫杉醇的半数抑制浓度(IC50)。接着使用流式细胞仪检测LiCl处理前后SKOV3细胞内p-GSK-3β(ser9)的表达量。最后联合免疫荧光技术观察LiCl预处理对卵巢癌细胞SKOV3内p-GSK-3β(ser9)定位情况的影响。结果:依据MTT结果选择LiCl 20 mmol/L处理6 h作为构建高表达p-GSK-3β(ser9)的卵巢癌细胞模型的条件。LiCl预处理后,24、48、72 h SKOV3细胞顺铂的半数抑制浓度从(20.37±0.56)、(7.79±0.72)、(2.8±0.32)μg/ml增加至(27.57±0.81)(t=12.66,P=0.0002)、(12.15±1.00)(t=6.13,P=0.0036)、(5.84±0.64)(t=7.36,P=0.0019)μg/ml,差异均有统计学意义。LiCl 20mmol/L预处理后,24、48、72h SKOV3细胞紫杉醇的半数抑制浓度从(10.11±0.87)、(1.07±0.17)、(0.03±0.01)μg/ml增加至(12.54±0.88)(t=3.4,P=0.02)、(2.22±0.3)(t=5.78,P=0.0045)、(0.093±0.03)(t=3.45,P=0.026)μg/ml,差异均有统计学意义。流式的结果显示,LiCl预处理后SKOV3细胞内p-GSK-3β(ser9)的平均荧光强度由661.67±37.63增加到1191.33±30.37,失活性磷酸化GSK-3β的水平显著升高,差异具有统计学意义。免疫荧光的结果则提示,LiCl预处理后SKOV3细胞内p-GSK-3β(ser9)的水平有所上调,并且细胞核内的上调效应较为明显。结论:LiCl预处理后GSK-3β失活性磷酸化水平的增加极有可能是导致卵巢癌细胞化疗耐药性的增强的原因之一,尤其是细胞核内p-GSK-3β(ser9)水平的上调可能与卵巢癌细胞化疗耐药性的增强密切相关,因此GSK-3β有望成为逆转卵巢癌化疗耐药的分子靶点之一。
【关键词】：糖原合成酶激酶3β 卵巢癌 顺铂 紫杉醇 耐药性
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 英汉缩略词对照表9-10
• 前言10-13
• 参考文献11-13
• 1 材料与方法13-16
• 1.1 实验材料13
• 1.2 主要实验试剂13
• 1.3 主要实验仪器13
• 1.4 实验方法13-16
• 1.4.1 细胞培养13-14
• 1.4.2 MTT检测LiCl对细胞增殖的影响14
• 1.4.3 MTT测定顺铂和紫杉醇的半数抑制浓度（IC50）14
• 1.4.4 流式细胞仪检测磷酸化GSK-3β表达14-15
• 1.4.5 免疫荧光检测GSK-3β定位15
• 1.4.6 统计学方法15-16
• 2 结果16-20
• 2.1 Li Cl对SKOV3细胞增殖活性的影响16
• 2.2 Li Cl对SKOV3细胞顺铂和紫杉醇半数抑制浓度（IC50）的影响16-17
• 2.3 SKOV3细胞内磷酸化GSK-3β表达量17-18
• 2.4 SKOV3细胞内磷酸化GSK-3β的定位18-20
• 3 讨论20-23
• 3.1 卵巢癌耐药的现状及特点20
• 3.2 糖原合酶激酶 3β(GSK-3β)在肿瘤耐药中的作用20-22
• 3.3 GSK-3β对卵巢癌增殖和耐药性的影响及可能机制22-23
• 4 结论23-24
• 4.1 LiCl可以有效构建卵巢癌细胞模型23-24
• 4.2 GSK-3β失活会增强卵巢癌细胞化疗耐药性24
• 4.3 失活性GSK-3β在卵巢癌细胞内定位的改变可能增强卵巢癌细胞耐药性参考文献24
• 参考文献24-27
• 综述27-39
• 参考文献35-39
• 攻读学位期间发表的学术论文目录39-40
• 致谢40

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本文编号：732589