乳腺癌髓源性抑制细胞（MDSC）对B细胞功能影响的研究

发布时间：2017-08-26 03:10

  本文关键词：乳腺癌髓源性抑制细胞（MDSC）对B细胞功能影响的研究

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【摘要】：目的:探索小鼠乳腺癌模型中髓源性抑制细胞MDSCs对B细胞功能的影响,阐明MDSCs对B细胞功能调控的具体机制。方法:建立4T1-BALB/C小鼠乳腺癌模型,检测荷瘤小鼠随着时间的延长,小鼠脾脏的变化;用CD19作为B细胞的特异性表型,Gr-1和CD11b作为MDSCs的特异性表型,通过流式细胞技术检测荷瘤小鼠脾中MDSCs和B细胞比例的变化,同样通过流式细胞技术检测荷瘤小鼠和正常小鼠脾和血中B细胞相关表型分子4-1BBL、CD80、CD86、MHCⅡ、CCR6、CD62L、PD-1和PD-L1的表达情况。通过磁珠分选技术,从荷瘤小鼠脾脏细胞中分选出MDSCs,非荷瘤对照组小鼠脾脏中分选出B细胞,将MDSCs和B细胞按照3:1和5:1的比例共孵育,同时设置单独B细胞组做对照。运用流式细胞技术检测MDSCs与B细胞共培养后对B细胞表型4-1BBL、CD80、CD86、MHCⅡ、CCR6、CD62L、PD-1和PD-L1的影响。运用Brdu技术标记共培养的B细胞,检测B细胞的增殖情况。同时收集共培养的上清,运用ELISA技术检测培养上清中B细胞抗体Ig A、Ig M和Ig G的分泌情况。结果:4T1-BALB/C小鼠乳腺癌模型中,小鼠脾脏的大小,重量和细胞数都随着荷瘤时间延长而增加,并且小鼠脾脏中MDSCs的比例随着荷瘤时间延长出现了明显升高的趋势,B细胞的比例则出现明显下降趋势,荷瘤21天达到最低。流式结果显示,与非荷瘤小鼠相比,荷瘤小鼠脾脏中B细胞的表型CD86、MHCⅡ、CCR6、CD62L、PD-1和PD-L1都出现了明显下降趋势,且B细胞表型分子4-1BBL、CD62L、PD-L1和MHCⅡ在荷瘤鼠外周血中表达也明显下降。体外MDSCs和B细胞的共孵实验中,B细胞的表型变化与荷瘤体系中B细胞变化基本一致,说明MDSCs影响B细胞表面分子的表达。MDSCs和B细胞共孵育体系中5:1组与对照组相比,B细胞的增殖明显降低。ELISA结果显示,与MDSCs共培养后,B细胞体系中Ig M分泌浓度出现下降趋势,Ig A和Ig G的浓度则呈升高趋势。结论:肿瘤中的MDSCs可能抑制B细胞的正常免疫功能,诱导B细胞高分泌Ig A和Ig G,低分泌Ig M。
【关键词】：髓源性抑制细胞(MDSCs) B淋巴细胞 免疫球蛋白
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R730.5
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 缩略语/符号说明9-11
• 前言11-14
• 研究现状、成果11-12
• 研究目的、方法12-14
• 1 对象和方法14-23
• 1.1 材料与仪器14-15
• 1.1.1 细胞系14
• 1.1.2 研究对象14
• 1.1.3 研究试剂14-15
• 1.1.4 研究仪器15
• 1.2 试剂配制15-16
• 1.2.1 细胞培养液的配制15-16
• 1.2.2 细胞冻存液的配制16
• 1.2.3 0.5%BSA溶液的配制16
• 1.3 研究方法16-22
• 1.3.1 细胞培养16-18
• 1.3.2 脾细胞提取18-19
• 1.3.3 磁珠分选肿瘤相关MDSCs和B细胞19-20
• 1.3.4 脾细胞表面流式抗体标记20-21
• 1.3.5 肿瘤相关MDSCs与B细胞共孵育21
• 1.3.6 Brdu实验检测B细胞的增殖情况21-22
• 1.3.7 ELISA检测22
• 1.4 统计学方法22-23
• 2 结果23-32
• 2.1 4T1-BALB/C小鼠乳腺癌模型脾中MDSCs和B细胞比例的变化及B细胞表型变化23-28
• 2.1.1 4T1乳腺癌荷瘤小鼠脾脏随时间的变化情况23
• 2.1.2 4T1乳腺癌小鼠脾脏中MDSCs和B细胞的比例随时间的变化情况23-24
• 2.1.3 4T1乳腺癌荷瘤小鼠21天脾脏中MDSCs和B细胞的具体变化情况24-25
• 2.1.4 4T1乳腺癌荷瘤小鼠脾脏中B细胞表型的变化情况25-26
• 2.1.5 4T1乳腺癌荷瘤小鼠外周血中B细胞表型的变化情况26-27
• 2.1.6 4T1乳腺癌荷瘤小鼠外周血中CD19+CD62L-B细胞比例变化情况27-28
• 2.2 肿瘤相关MDSCs与B细胞共孵后B细胞表型及功能出现变化28-32
• 2.2.1 肿瘤相关MDSCs与B细胞共孵后，，B细胞表型变化28-29
• 2.2.2 肿瘤相关MDSCs与B细胞共孵后，B细胞增殖变化29-30
• 2.2.3 肿瘤相关MDSCs与B细胞共孵体系中B细胞抗体分泌情况30-32
• 3 讨论32-39
• 3.1 4T1-BALB/C动物模型32-33
• 3.2 B细胞的表面分子及功能特点33-36
• 3.3 Breg细胞的表面分子及功能特点36
• 3.4 在免疫系统中MDSCs对B细胞功能的影响36-37
• 3.5 在肿瘤中MDSCs对B细胞功能的影响37-38
• 3.6 结语38-39
• 结论39-40
• 参考文献40-48
• 发表论文和参加科研情况说明48-49
• 综述 肿瘤中MDSCs在免疫抑制机制方面的研究进展49-64
• 综述参考文献56-64
• 致谢64-65
• 个人简历65

本文编号：739276