铁过载致肺损伤机制及促肺癌作用研究

发布时间：2017-08-26 20:25

  本文关键词：铁过载致肺损伤机制及促肺癌作用研究

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【摘要】：肺癌是目前对世界人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一,也是影响我国居民健康的常见恶性肿瘤。近年来由于我国人口老龄化的不断加剧,当前社会人们不良生活方式和环境污染的持续存在,肺癌的发生率和死亡率呈逐年上升趋势,给当前肺癌的临床治疗增加了很大压力和挑战。临床工作中人们注意到许多肺癌患者体内存在着铁代谢异常的情况,这一发现在相关文献中也被证实。为了给临床肺癌的治疗提供潜在或现实的理论依据,因此本研究着眼于铁过载对肺癌发生发展变化以及其作用机制的探讨。本研究从细胞、组织到动物3个层次进行研究。体外实验采用MTT法检测不同浓度右旋糖酐铁、铁螯合剂去铁胺(DFO)对人肺癌细胞A549增值的影响;DCF-DA检测不同浓度右旋糖酐铁对人肺癌细胞(A549)中ROS水平的影响;划痕实验观察药物对肿瘤细胞迁移能力的影响。体内实验采用小鼠Lewis肺癌皮下移植模型、乌拉坦诱导的小鼠肺癌模型评价右旋糖酐铁导致的铁过载在肺癌发生和发展中的作用。通过监测小鼠瘤重和瘤体积的变化,反应药物对肺癌的影响,小鼠的精神状态、体重、体表温度和自主活动等指标,评价小鼠的生存质量;通过肺部组织的HE染色,评价右旋糖酐铁对肺癌模型小鼠肺组织病理学特征的影响;ELISA试剂盒检测实验小鼠血清铁、活性氧(ROS)、总铁结合力(TIBC)、血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤细胞坏死因子(TNFα)、总抗氧化能力(T-AOC)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、脂质过氧化产物(MDA)等含量的变化。另外,本课题采用免疫印迹Western检测药物对肺腺癌A549细胞相关蛋白HO-1和INOS表达的影响等;通过免疫组化法检测小鼠肺组织中HIF-1α、INOS、HO-1和COX2蛋白的表达,初步探讨右旋糖酐铁与肺癌发生的关系。体外实验结果显示:右旋糖酐铁浓度越高,A549肺癌细胞增殖速度越快,药物对A549细胞的生长的作用具有促进作用;DFO处理的A549肺癌细胞增殖缓慢,凋亡细胞有增加趋势,表明DFO具有抑制A549细胞生长的作用。不同浓度的右旋糖酐铁处理A549细胞后,细胞内ROS水平明显升高,且ROS水平随着右旋糖酐铁浓度的增加而提高。右旋糖酐铁能促进肿瘤细胞的迁移。体内试验结果显示:右旋糖酐铁能促进肿瘤的生长速度,降低小鼠的生存质量,减少小鼠的生存周期;血清中铁、血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤细胞坏死因子(TNFα)、总铁结合力(TIBC)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)脂质过氧化产物(MDA)、ROS含量升高,T-AOC含量降低。蛋白印迹结果显示:和模型组相比,右旋糖酐铁促进HO-1和iNOS蛋白表达。HE病理结果显示右旋糖酐铁明显加剧肺癌模型小鼠肺损伤;免疫组化结果显示:右旋糖酐铁可以上调肺癌小鼠肺组织中HO-1、HIF-1α、COX2、INOS的显色密度。综上所述,右旋糖酐铁造成的铁过载为肿瘤的发生、发展中提供了有利条件,从而加剧了肺癌的病变过程。从另一方面提示我们在肺癌的临床治疗过程中注意铁元素的控制。
【关键词】：肺癌 右旋糖酐铁 铁过载
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R563;R734.2
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• Abbrebiation8-13
• 第一部分 绪论13-17
• 1.1 铁13
• 1.2 铁对肿瘤的作用机制13-14
• 1.3 铁过载的危害14
• 1.4 肺癌14-15
• 1.5 铁过载在肿瘤中的研究进展15
• 1.6 立题意义15-17
• 第二部分 右旋糖酐铁体外对肺癌以及肺损伤研究17-27
• 2.1 前言17
• 2.2 实验材料17-19
• 2.2.1 实验细胞17
• 2.2.2 药品与试剂17-18
• 2.2.3 试剂配制18-19
• 2.2.4 主要仪器设备19
• 2.3 实验细胞的常规操作19-20
• 2.3.1 细胞复苏19
• 2.3.2 细胞传代19-20
• 2.3.3 细胞计数20
• 2.4 实验方法20-22
• 2.4.1 操作步骤20
• 2.4.2 细胞培养20
• 2.4.3 肿瘤细胞增殖能力检测20-21
• 2.4.4 不同铁状态对细胞增殖能力影响21
• 2.4.5 肺癌细胞内ROS含量检测21-22
• 2.4.6 细胞划痕实验22
• 2.4.7 统计学分析22
• 2.5 实验结果22-25
• 2.5.1 MTT法检测不同浓度右旋糖酐铁对A549细胞增殖的影响22
• 2.5.2 右旋糖酐铁对A549细胞体外增殖的影响22-23
• 2.5.3 DFO对A549细胞体外增殖的影响23
• 2.5.4 DCF-DA检测肺癌细胞内ROS生成23-24
• 2.5.5 右旋糖酐铁处理A549细胞后对肺癌细胞迁移能力的影响24-25
• 2.6 体外实验小结25-27
• 第三部分 铁过载体内对肺癌发生中的作用27-41
• 3.1 前言27
• 3.2 实验材料27-29
• 3.2.1 药品与试剂27-28
• 3.2.2 实验动物28
• 3.2.3 试剂配制28-29
• 3.2.4 主要仪器设备29
• 3.3 实验方法29-32
• 3.3.1 药物对Lewis肺癌细胞皮下移植模型小鼠的影响29-30
• 3.3.2 药物对乌拉坦诱导的小鼠肺癌模型的的影响30
• 3.3.3 药物对乌拉坦诱导的小鼠肺癌模型的病理特征影响30-32
• 3.3.4 统计学方法32
• 3.4 实验结果32-39
• 3.4.1 右旋糖酐铁对Lewis肺癌细胞皮下移植小鼠模型的影响32-34
• 3.4.2 右旋糖酐铁对乌拉坦诱导的小鼠肺癌模型的的影响34-38
• 3.4.3 药物对乌拉坦诱导的小鼠肺癌模型的病理特征影响38-39
• 3.5 体内实验小结39-41
• 第四部分 右旋糖酐铁对肺癌作用机制的研究41-53
• 4.1 前言41
• 4.2 实验材料41-43
• 4.2.1 药品与试剂41-42
• 4.2.2 试剂配制42
• 4.2.3 主要仪器设备42-43
• 4.3 实验方法43-47
• 4.3.1 总蛋白的提取43
• 4.3.2 蛋白定量43
• 4.3.3 蛋白样品的制备43-44
• 4.3.4 免疫蛋白印迹（Western blot）44-46
• 4.3.5 肺部组织免疫组化46-47
• 4.3.6 统计学分析47
• 4.4 实验结果47-50
• 4.4.1 免疫蛋白印迹（Western blot）47-48
• 4.4.2 铁过载肺癌转移肺组织免疫组化48-50
• 4.5 实验小结50-53
• 第五部分 讨论53-55
• 第六部分 实验结论55-57
• 参考文献57-63
• 致谢63-64

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本文编号：742809