MicroRNA-205靶向调控FRAT1抑制胶质母细胞瘤恶性转化进程的研究

发布时间：2017-08-28 02:03

  本文关键词：MicroRNA-205靶向调控FRAT1抑制胶质母细胞瘤恶性转化进程的研究

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【摘要】：【目的】探讨miR-205在胶质母细胞瘤恶性转化过程中的生物学功能和分子机制,为胶质母细胞瘤的临床诊断、治疗和预后评估提供新的生物学标志物和新的分子治疗靶点。【方法】第一部分:1、通过实时荧光定量PCR检测4种胶质瘤细胞株(U251、A172、U-118和U-87)和正常胶质细胞株HEB中miR-205的表达水平。2、miR-205模拟物瞬时转染入U-87细胞,实时荧光定量PCR检测转染后细胞中miR-205的表达水平。3、MTT法检测过表达miR-205的U-87细胞增殖能力的改变。4、流式细胞术检测过表达mi R-205的U-87细胞凋亡水平的改变。5、划痕实验检测过表达miR-205的U-87细胞迁移能力的改变。6、Transwell实验检测过表达miR-205的U-87细胞侵袭能力的改变。第二部分:1、采用microRNA靶基因预测软件预测胶质母细胞瘤中miR-205的候选靶基因。2、采用实时荧光定量PCR和Western Blot法检测转染不同浓度miR-205模拟物后U-87细胞中候选靶基因FRAT1 mRNA和蛋白水平表达情况。3、采用荧光素酶双报告基因系统检测miR-205对候选靶基因FRAT1的3’UTR区的调控作用,最终确定miR-205的直接靶基因。第三部分:1、构建胶质母细胞瘤移植动物模型,检测miR-205对胶质母细胞瘤生长的影响。2、采用免疫组织化学染色技术检测肿瘤增殖因子Ki67蛋白、肿瘤侵袭因子Vimentin蛋白和靶基因FRAT1的表达水平。3、采用TUNEL细胞凋亡实验检测移植瘤细胞凋亡水平的改变。【结果】第一部分:1、miR-205在4种胶质瘤细胞株中的表达水平明显低于正常胶质细胞株,其中在U-87细胞株中的表达水平最低。2、miR-205模拟物能够显著提升U-87细胞中miR-205的表达水平,转染后细胞增殖能力减弱、凋亡水平上升、细胞的迁移和侵袭能力下降。第二部分:1、通过microRNA靶基因预测软件确认mi R-205的候选靶基为FRAT1。2、随着miR-205模拟物转染浓度的升高,候选靶基因FRAT1 mRNA和蛋白水平逐渐发生下降。3、miR-205能够抑制野生型荧光素酶活性,但对突变型荧光素酶活性没有影响。第三部分:1、miR-205能够抑制胶质母细胞移植瘤的生长。2、miR-205激动剂处理组移植瘤中Ki67、Vimentin和靶基因FRAT1蛋白表达低于对照组,但肿瘤凋亡水平高于对照组。【结论】在胶质母细胞瘤的发展过程中,miR-205表达发生减少,导致下游靶基因FRAT1表达水平上升,胶质母细胞瘤获得更强的恶性表型,肿瘤增殖能力增强、凋亡水平降低、迁移和侵袭能力提升,最终促使胶质母细胞瘤的演进和恶性转化。本研究阐明了胶质母细胞瘤恶性转化的分子机制,为肿瘤的分子靶向治疗提供了理论基础。
【关键词】：micro RNA 胶质母细胞瘤 mi R-205 FRAT1 演进
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.41
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-14
• 参考文献11-14
• 第一部分 miR-205调控胶质母细胞瘤生物学行为的研究14-29
• 引言14
• 1 材料与方法14-21
• 1.1 材料14-17
• 1.2 方法17-21
• 2 结果21-25
• 2.1 miR-205在胶质瘤细胞株中低表达21
• 2.2 miR-205 mimic上调U-87细胞中mi R-205的表达水平21-22
• 2.3 miR-205 mimic抑制U-87细胞的增殖22-23
• 2.4 miR-205 mimic促进U-87细胞的凋亡23-24
• 2.5 miR-205 mimic抑制U-87细胞的迁移能力24
• 2.6 miR-205 mimic抑制U-87细胞的侵袭能力24-25
• 3 讨论25-27
• 参考文献27-29
• 第二部分 胶质母细胞瘤中miR-205靶基因预测及验证29-41
• 引言29-30
• 1 材料与方法30-35
• 1.1 材料30-32
• 1.2 方法32-35
• 2 结果35-37
• 2.1 生物信息学预测FRAT1为miR-205的候选靶基因35-36
• 2.2 转染不同浓度梯度miR-205 mimic后候选靶基因FRAT1的表达情况36-37
• 2.3 荧光素酶双报告基因系统证实FRAT1为miR-205的直接靶基因37
• 3 讨论37-38
• 参考文献38-41
• 第三部分 miR-205调控胶质母细胞瘤生物学行为的体内实验验证41-52
• 引言41
• 1 材料与方法41-46
• 1.1 材料41-42
• 1.2 方法42-46
• 2 结果46-49
• 2.1 miR-205对胶质母细胞瘤生长的影响46-47
• 2.2 miR-205对胶质母细胞移植瘤生物学行为的影响47-49
• 3 讨论49-50
• 参考文献50-52
• 结论52-53
• 综述 microRNA与胶质母细胞瘤53-61
• 参考文献57-61
• 缩略词表61-62
• 发表和待发表的论文62-63
• 致谢63-64

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本文编号：746846