miR-192和miR-204转录后水平调控HOTTIP影响肝细胞癌的生长

发布时间：2017-08-28 02:09

  本文关键词：miR-192和miR-204转录后水平调控HOTTIP影响肝细胞癌的生长

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【摘要】：肝细胞癌是世界上死亡率最高的癌症之一,长链非编码RNA HOTTIP是肝细胞癌的一个重要的原癌基因。然而,由HOTTIP的异常表达对HOTTIP在转录后水平和下游分子事件的调控作用仍未曾研究过。首先我们预测了靶向HOTTIP的miRNA,通过实时定量PCR确定了miR-192和miR-204可以在肝细胞癌细胞系HepG2口SMMC7721中抑制HOTTIP的表达。niR-192和miR-204在许多癌症中都发挥着抑癌作用,在目前的研究中,我们确定了在肝细胞癌中miR-192和miR-204可通过AG02介导的RNA干涉途径抑制HOTTIP的表达。通过双荧光素酶报告基因实验进一步确定miR-192和miR-204与H OTTIP之间的作用。同样,在肝细胞癌组织中也发现这两种miR-192和miR-204与HOTTIP存在负相关的关系。有趣的是,这三种非编码RNA的异常调节与肝细胞癌病人的总生存时间有关。此外,miR-192、miR-204或HOTTIP siRNA转录后可以沉默HOTTIP进而抑制肝细胞癌细胞的生长。内源性抑制miR-192和miR-204可使HOTTIP表达上调,促进细胞生长。通过转录组测序我们确定了除靶基因HOXA13外的19个基因,如谷氨酰胺基因,为miR-192/-204-HOTTIP的下游靶基因。谷氨酰胺是癌细胞的一个重要的标志物,我们检测到miR-192/204-HOTTIP可抑制谷氨酰胺的表达中断肝细胞癌的谷氨酰胺代谢,阻碍细胞生长。实验结果表明miR-192/-204-HOTTIP轴可能是肝细胞癌发生发展中的一条重要的分子通路。肝细胞癌临床标本的数据表明,miR-192, miR-204和HOTTIP与肝细胞癌的预后相关,且具有潜在治疗的作用。
【关键词】：HOTTIP miR-192 miR-204 肝细胞癌 GLS 谷氨酰胺代谢
【学位授予单位】：北京化工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 符号说明7-12
• 第一章 前言12-24
• 1.1 miRNA的研究进展12-17
• 1.1.1 miRNA概述12-13
• 1.1.2 miRNA的生物发生13-14
• 1.1.3 miRNA的调控14-15
• 1.1.4 miRNA与靶基因的分子机制15
• 1.1.5 miRNA与肿瘤15-16
• 1.1.6 miR-192和miR-204在肿瘤中的研究进展16-17
• 1.2 lncRNA的研究进展17-21
• 1.2.1 lncRNA概述17
• 1.2.2 lncRNA的生物学功能及其分子机制17-19
• 1.2.3 lncRNA与肿瘤19-21
• 1.2.4 HOTTIP简介及其在肿瘤中的研究进展21
• 1.3 GLS简介及其在肿瘤中的研究进展21-23
• 1.4 立题背景与研究意义23-24
• 第二章 实验方法24-40
• 2.1 实验材料24-30
• 2.1.1 细胞系24-25
• 2.1.2 实验试剂25-26
• 2.1.3 实验仪器26-27
• 2.1.4 实验所需溶液27-28
• 2.1.5 引物和mimics28-30
• 2.2 实验方法30-40
• 2.2.1 细胞培养30
• 2.2.2 瞬时转染30-31
• 2.2.3 提取RNA31-32
• 2.2.4 实时定量PCR检测miRNA的转染效率(polyA加尾法)32-33
• 2.2.5 实时定量PCR检测mRNA的表达33-34
• 2.2.6 双荧光素酶报告基因实验34-35
• 2.2.7 细胞增殖实验35
• 2.2.8 流式细胞术35-36
• 2.2.9 克隆形成实验36-37
• 2.2.10 划痕实验37
• 2.2.11 亚细胞分离定位HOTTIP37-38
• 2.2.12 基因表达谱38
• 2.2.13 患者与组织分析38
• 2.2.14 裸鼠移植瘤模型实验38-39
• 2.2.15 数据分析39-40
• 第三章 实验结果40-62
• 3.1 生物信息学分析预测靶向HOTTIP的miRNA40-41
• 3.2 确定靶向HOTTIP的miRNA41-43
• 3.3 miR-192与miR-204在转录后水平调控HOTTIP43-45
• 3.4 miR-192与miR-204抑制肝细胞癌细胞增殖45-50
• 3.5 miR-192与miR-204可影响多个HOTTIP下游基因50-55
• 3.6 在肝癌组织中miR-192、miR-204与HOTTIP负相关55-58
• 3.7 在体内miR-192、miR-204可抑制肝细胞癌的生长58-62
• 第四章 结论62-64
• 参考文献64-68
• 致谢68-70
• 研究成果及发表的学术论文70-72
• 作者和导师简介72-73
• 附件73-74

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前7条

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4 林梦洁;陈志强;尹凌帝;孙倩;刘博巽;孙明;德伟;刘志军;;长链非编码RNA HOTAIR对非小细胞肺癌迁移和侵袭能力的影响[J];临床肿瘤学杂志;2014年08期

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6 许馨;李美红;王t，

本文编号：746881