miR-191在人乳腺癌中的表达及其对乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响

发布时间：2017-08-29 23:36

  本文关键词：miR-191在人乳腺癌中的表达及其对乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响

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【摘要】：背景:mi RNAs是一种分子量较小,无法编码蛋白的内源性RNA,通过与其靶基因m RNA上的碱基互补结合,降解靶基因m RNA或阻碍靶基因m RNA的翻译过程,来发挥其转录后调控的作用。作为mi RNAs家族中的一员,mi R-191涉及许多肿瘤的发生、发展及转移等过程,但有关其在乳腺癌方面的表达以及对乳腺癌的生物学行为的影响的研究目前尚未有过多的报告。激素受体状态是指雌激素受体及孕激素受体的表达状态,其在乳腺癌中的表达状态会影响乳腺癌的预后及治疗等方面。PLCD1是已经明确的一种抑癌基因,对癌细胞的生长和侵袭都有抑制作用,其表达缺失或下调会促进癌细胞增殖及转移等过程,而许多研究都发现PLCD1可能为mi R-191的靶点基因,其表达可能受到mi R-191表达的影响。为明确mi R-191在人乳腺癌细胞及正常乳腺上皮细胞之间的表达状态及其对乳腺癌细胞生物行为的影响,我们选取了激素受体状态不同的乳腺癌细胞株及正常上皮乳腺癌细胞株,检测其表达是否有差异,筛选出高表达的细胞株,并利用瞬时转染手段干扰其mi R-191的表达,进一步研究mi R-191对乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响及对其可能的靶基因PLCD1表达的影响。[目的]检测mi R-191在人乳腺癌和正常乳腺上皮细胞之间的表达水平差异,探究其对乳腺癌细胞的增殖、侵袭影响,研究其对靶基因PLCD1表达的影响。初步分析mi R-191在乳腺癌中表达情况及其在乳腺癌中的作用,为乳腺癌的诊断提供可能的肿瘤标记物,为其治疗提供可能的靶点。[方法]1)选取人乳腺癌细胞[MDA-MB-231株(雌激素受体阴性,ER-)、MCF-7(雌激素受体阳性,ER+)]和正常乳腺上皮细胞株(HBL-100),用real-time PCR法检测三种细胞株中mi R-191表达水平的差异2)利用Lipofectamine2000将mi R-191inhibitor瞬时转染至人乳腺癌MCF-7细胞株中,并用real-time PCR检测转染效果和mi R-191的表达情况;3}利用CCK-8法检测转染mi R-191inhibitor后MCF-7细胞的增殖能力;流式细胞术检测转染mi R-191inhibitor后MCF-7细胞的细胞周期变化;Transwell法检测转染mi R-191inhibitor后MCF-7的侵袭能力。4)Real-time PCR和Western blot法检转染mi R-191 inhibitor及mi mics后各组细胞PLCD1的m RNA和蛋白的表达。[结果]1)mi R-191在乳腺癌细胞(MCF-7,MDA-MB-231)中的表达水平明显高于正常乳腺上皮细胞(HBL-100)[P0.01],并且在ER(+)的乳腺癌细胞(MCF-7)中表达水平高于ER(-)乳腺癌细胞(MDA-MB-231)[P0.01];2)转染mi R-191 inhibitor后,与空白对照组相比,mi R-191表达水平明显下调,表明成功沉默mi R-191的表达;3)转染mi R-191 inhibitor后,MCF-7细胞增殖能力(0.65±0.04)较阴性对照组(1.18±0.05)明显受到抑制(F=122.238,P0.01),侵袭能力(56.67±2.58)较阴性对照组(82.5±5.79)减弱(F=18.734,P0.01),G0/G1期的细胞比例(73.39±1.10)%较阴性对照组(69.28±2.11)%增加(F=61.060,P0.01),S期细胞比例(20.9±1.17)%较阴性对照组(25.48±1.19)%减少(F=46.937,P0.01)。4)Real-time PCR及western blot检测结果示:PLCD1在m RNA及蛋白水平表达随mi R-191表达上调而下降,随mi R-191表达下调而升高。[结论]mi R-191在人乳腺癌细胞中的表达高于正常上皮细胞,且在ER(+)乳腺癌细胞中高表达高于ER(-)乳腺癌细胞;转染mi R-191抑制体后,MCF-7细胞增殖、侵袭能力明显受到抑制,说明mi R-191对人乳腺癌细胞的增殖、侵袭有促进作用,其机制可能与mi R-191对PLCD1m RNA的降解有关。
【关键词】：乳腺癌 MCF-7 mi R-191 增殖 侵袭
【学位授予单位】：广东药学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 中文摘要4-6
• abstract6-10
• 前言10-13
• 第一部分、miR-191 在人乳腺癌中的表达水平差异13-21
• 一、实验材料及试剂13-14
• 二、实验方法14-17
• 三、实验结果17-19
• 四、讨论19-21
• 第二部分、miR-191 对人乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响21-29
• 一、实验材料及试剂21-22
• 二、实验方法22-23
• 三、实验结果23-27
• 四、讨论27-29
• 第三部分、Real-time PCR和western blot检测转染miR-191inhibitor及mimics后PLCD1mRNA及蛋白表达29-40
• 一、实验材料及试剂29-31
• 二、实验方法31-35
• 三、实验结果35-38
• 四、讨论38-40
• 全文总结、不足与展望40-41
• 参考文献41-47
• 综述47-53
• 参考文献50-53
• 符号说明53-54
• 攻读学位期间发表论文54-55
• 致谢55

【参考文献】

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1 冷弘;臧文巧;王涛;王媛媛;马晶;赵国强;;miR-451对食管癌EC9706细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响[J];世界华人消化杂志;2012年15期

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本文编号：756069