汉防己甲素对HL-60细胞DNA甲基转移酶表达的影响

发布时间：2017-08-30 00:42

  本文关键词：汉防己甲素对HL-60细胞DNA甲基转移酶表达的影响

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【摘要】：目的:汉防己甲素(tetrandrine,Tet)是一种多作用点的抗癌症传统药物,能经由多种作用机理实行抗癌症效应。地西他滨(DAC)是一种被FDA批准的特异性的DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)抑制剂,已在治疗MDS、MDS转AML、老年AML等血液恶性疾病中发挥出较好的疗效。本课题拟研究Tet单用及与DAC联合应用对HL-60细胞DNMT表达的影响,研究汉防己甲素是否能够抑制DNMT及其抑制程度,给汉防己甲素的应用提出新的抗癌症可能机理。方法:1.MTT(四甲基偶氮唑蓝)法检测Tet单药、DAC单药、Tet与DAC联合用药后对HL-60细胞的生长抑制作用;2.流式细胞术检测Tet、DAC单药及联合用药后HL-60细胞的早期凋亡率;3.实时荧光定量PCR检测Tet、DAC单药及联合用药后HL-60细胞DNMT1、DNMT3B基因的表达量;4.蛋白质免疫印迹法检测Tet、DAC单药及联合用药后HL-60细胞DNMT1、DNMT3B蛋白的表达量。结果:1.MTT检测HL-60细胞生长抑制结果显示:随着Tet、DAC药物浓度的增加,Tet、DAC对HL-60细胞的生长抑制作用越来越明显,相比于空白对照组,差异有统计学意义,随着Tet、DAC药物作用时间的增加(0小时、24小时、48小时),Tet、DAC对HL-60细胞的生长抑制作用越来越明显,相比于空白对照组,差异有统计学意义,说明Tet、DAC对HL-60细胞生长抑制作用呈明显的时间-剂量依赖关系;且2umol/L Tet与4umol/L DAC联合作用于HL-60细胞后,增殖抑制率均明显大于2umol/L Tet及4umol/L DAC单药组,抑制作用更强(F=152.956,P=0.005)。2.流式细胞术测定HL-60的早凋率结果:2umol/L Tet作用于HL-60细胞的平均早期凋亡率为(9.2±0.16)%,4umol/L Tet作用于HL-60细胞的平均早期凋亡率为(12.3±0.20)%,说明Tet导致HL-60细胞凋亡有剂量依赖性,相比于空白对照组,差异有统计学意义;2umol/L Tet与4umol/L DAC联合用药后平均早期凋亡率为(17.6±0.87)%,即联合Tet与DAC后的促HL-60细胞早期凋亡效果更强(P0.05)。3.实时荧光定量PCR检测结果显示:经Tet 2 umol/L、4umol/L,DAC 4 umol/L处理HL-60细胞四十八小时后,细胞中DNA甲基转移酶1、DNA甲基转移酶3B的m RNA表达水平明显下调,相比于空白对照组,差异有统计学意义(Tet组F=21676.000,P=0.02),2 umol/L Tet与4 umol/L DAC联合用药组下降幅度明显大于2umol/L Tet及4umol/L DAC单药组,差异有统计学意义(P=0.01)。4.蛋白质免疫印迹法检测结果示:与对照组相比,2 umol/L Tet和4 umol/L DAC单药组分别作用于HL-60细胞48h后,各组细胞中DNA甲基转移酶1、DNA甲基转移酶3B蛋白的表达下调,联合Tet与DAC用药后下调更明显,差别有统计学意义(P均0.05)。结论:1.汉防己甲素可抑制HL-60细胞的生长增殖,与DAC联合后作用更强,提示Tet有增敏DAC的作用;2.Tet可以降低DNMT1、DNMT3B m RNA及蛋白的表达量,与DAC联合后作用更强。
【关键词】：汉防己甲素 HL-60细胞 DNA甲基转移酶 地西他滨
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R733
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 1 材料和方法11-17
• 1.1 材料11
• 1.2 方法11-17
• 2 结果17-22
• 2.1 Tet对HL-60 细胞增殖的影响17-18
• 2.2 Tet对HL-60 早期凋亡的影响18-19
• 2.3 Tet对HL-60 细胞DNMT1、DNMT3B mRNA表达水平的影响19-20
• 2.4 Tet对HL-60 细胞DNMT1、DNMT3B蛋白表达的影响20-22
• 3 讨论22-24
• 4 结论24-25
• 参考文献25-27
• 综述27-36
• 参考文献33-36
• 致谢36-37
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果37-38
• 个人简历38

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

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2 滕若冰;莫发荣;;EGCG对人膀胱移行细胞癌T24细胞生长抑制作用观察及机制探讨[J];山东医药;2008年18期

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本文编号：756350