槲皮素对多发性骨髓瘤的抗肿瘤效应

发布时间：2017-08-30 02:30

  本文关键词：槲皮素对多发性骨髓瘤的抗肿瘤效应

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【摘要】：槲皮素(quercetin, Que)是广泛存在于大自然的黄酮类的天然药物之一。新近研究发现槲皮素能够降低乳腺癌、结肠癌、鼻咽癌、卵巢癌、骨肉瘤等多种肿瘤的发生。基础研究也发现,槲皮素对于上述实体肿瘤具有抑制作用。然而,槲皮素在多发性骨髓瘤(multiple myeloma, MM)中的研究却较少有报道。研究目的：1、研究槲皮素对MM细胞株NCI-H929增殖、凋亡和周期的影响。2、研究槲皮素对细胞凋亡、周期通路、ERK和AKT信号通路相关蛋白的影响。研究方法：1、不同浓度(0、50、100、200umol/L)的槲皮素作用于MM细胞株NCI-H9290、24、48、72h后,MTT法分别检测不同浓度Quercetin对NCI-H929细胞增殖的影响。2、不同浓度的槲皮素处理MM细胞株NCI-H929细胞24h后,经AnnexinV-FITC/PI染色,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。3、不同浓度的槲皮素处理MM细胞株NCI-H929细胞24h后,经PI单染,采用流式细胞术检测各组细胞周期的变化。4、应用、Western Blot方法检测不同浓度槲皮素处理MM细胞株24h后细胞增殖、凋亡和细胞周期中具有重要调节作用的信号通路相关蛋白的变化。结果：1、0、50、 100、200umol/L浓度的槲皮素分别作用于H929细胞24、48和72h后可以抑制H929细胞的增殖,且增殖活性随药物剂量的增加及时间的延长而显著下降(P0.001)。2、不同浓度(0、100、200umol/L)的Que作用于H929细胞24h后可促进细胞凋亡,且各组细胞凋亡率随浓度的增加而显著增加,分别为10.77±1.90%、46.23±7.03%和74.96±2.57%(P0.001)。3、0、100、200umol/L的Que处理H929细胞24h后,导致MM细胞周期阻滞于G2/M期。随着Que浓度的增加,H929细胞的G0/G1期细胞比率逐渐降低,S期比率相对升高,G2/M期细胞比率则随浓度的增加而升高,分别为9.10士5.21%,20.08+4.91%和31.81±5.25%(P0.05)。4、不同浓度Que处理H929细胞24h后,促进凋亡相关蛋白Caspase-3、 Caspase-8 和 Caspase-9活性的升高,PARP蛋白的裂解,并下调Bcl-2蛋白表达水平。5、不同浓度Que处理H929细胞24h后,可促进细胞周期相关蛋白P53、P21、P27上调以及CDK4蛋白表达的下调。6、不同浓度Que处理H929细胞24h后,可抑制p-ERK、p-AKT蛋白表达水平。结论：1、Que在体外可以抑制MM细胞NCI-H929的细胞增殖和促进细胞凋亡。2、Que通过上调P53、P2、P27及下调CDK4蛋白的表达诱导MM细胞周期阻滞于G2/M期,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。3、Que能通过上调caspase-3、8、9,促进PARP蛋白裂解及下调Bcl-2蛋白的表达来促进细胞凋亡。4、Que下调p-ERK、p-AKT蛋白表达抑制细胞生长和增殖。
【关键词】：槲皮素 多发性骨髓瘤 细胞凋亡 细胞周期
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R733.3
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文缩略词表9-10
• 第1章 前言10-12
• 第2章 材料与方法12-20
• 2.1 材料12-13
• 2.1.1 细胞系12
• 2.1.2 实验药物及配制方法12
• 2.1.3 主要试剂及耗材12-13
• 2.1.4 实验主要仪器设备13
• 2.1.5 实验主要材料13
• 2.2 实验方法13-16
• 2.2.1 细胞培养13-14
• 2.2.2 MTT法检测细胞存活率14-15
• 2.2.3 Annexin V/PI双染试剂盒检测细胞凋亡15-16
• 2.2.4 碘化丙啶(propidium iodide,PI)单染检测细胞周期16
• 2.3 Western Blot法检测目的蛋白表达16-19
• 2.3.1 主要试剂和溶液配置16-17
• 2.3.2 细胞总蛋白提取17
• 2.3.3 蛋白定量及标本配置17-18
• 2.3.4 SDS-PAGE凝胶配置18
• 2.3.5 电泳、转膜18-19
• 2.3.6 抗体标记及检测19
• 2.4 统计学分析19-20
• 第3章 实验结果20-25
• 3.1 骨髓瘤细胞生长增殖抑制实验20-21
• 3.2 槲皮素诱导骨髓瘤细胞凋亡21
• 3.3 槲皮素诱导MM细胞G2/M期阻滞21-22
• 3.4 槲皮素通过影响凋亡相关因子诱导MM细胞凋亡22-23
• 3.5 槲皮素对细胞周期相关分子表达的影响23-24
• 3.6 槲皮素抑制AKT和ERK磷酸化24-25
• 第4章 讨论25-29
• 4.1 槲皮素与肿瘤细胞增殖及凋亡25-26
• 4.2 槲皮素与肿瘤细胞周期26-27
• 4.3 槲皮素与MAPK/ERK和PI3K/Akt信号通路27-29
• 第5章 结论与展望29-30
• 致谢30-31
• 参考文献31-34
• 攻读学位期间的研究成果34-35
• 综述35-41
• 参考文献40-41

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本文编号：756786