TROP2、Ki67在宫颈病变组织中的表达及临床研究

发布时间：2017-08-30 10:14

  本文关键词：TROP2、Ki67在宫颈病变组织中的表达及临床研究

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【摘要】：宫颈癌是世界上第三大流行的妇科恶性肿瘤,估计每年有530000妇女发病以及275000妇女死于宫颈癌。滋养层细胞表面抗原2(trophoblast cell-surface antigens 2, TROP2)是一个36 kDa跨膜糖蛋白,是肿瘤相关的钙信号转换器基因家族一员。它最初在人滋养层细胞中发现,在大多数上皮性恶性肿瘤中过量表达而在正常组织中不表达或低表达。大量的证据已经表明TROP2在多种上皮性肿瘤中特异性过表达,可以通过加速细胞周期进程,导致恶性肿瘤的发生和侵袭,而且TROP2的过度表达与肿瘤进展和不良预后密切相关。Ki67(Antigen identified by monoclonal antibody细胞增殖抗原)是一种核抗原,与细胞的增殖相关,是目前检测细胞增殖活性比较准确可靠的标记物。目前国内关于TROP2、Ki67与宫颈病变关系的临床研究鲜有报道,本研究利用免疫组织化学(immunohistochemistry IHC)、实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative polymerase chain reaction RT-qPCR)、及蛋白质印迹(Western blotting)法检测TROP2、Ki67在宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌组织中的表达,探讨其与宫颈病变临床病理的关系及二者的相关性。目的本实验通过检测人滋养细胞表面抗原2(TROP2)、Ki67在宫颈鳞癌(SCC)、宫颈上皮内瘤变(CIN)、正常宫颈上皮组织中的表达,分析其与临床病理因素的关系,同时探讨二者的相关性。方法采用免疫组化SP法检测TROP2、Ki67蛋白在22例正常宫颈、35例CINI、35例CINII、38例CINIII以及65例宫颈鳞癌组织中的表达情况,并结合临床病理因素进行分析；实时荧光定量PCR法检测20例正常宫颈、20例CINI、20例CINII、20例CINIII和20例宫颈鳞癌组织中TROP2、Ki67mRNA的表达情况；蛋白质印迹的方法检测例20例正常宫颈、20例CINI、20例CINII、20例CINIII和20例宫颈鳞癌组织中TROP2蛋白的表达情况。结果1、免疫组化法显示：①TROP2蛋白在宫颈鳞癌及宫颈上皮内瘤变组织中呈阳性表达,主要定位在细胞膜上,且表达水平随着宫颈病变程度的加重而逐渐升高。TROP2在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变和宫颈鳞癌组织中的阳性表达率分别为22.7%、72.4%、95.4%,三者阳性表达呈逐渐上升的趋势,差异有显著性(χ2=73.124, p=0.000); TROP2在CINI、CINII、CINIII组织中阳性表达率分别为52%、71.4%、86.8%,三者阳性表达呈逐渐上升的趋势,差异有显著性(x2=44.078,p=0.000)；同时研究显示TROP2的表达水平与宫颈鳞癌的临床分期、病理分级以及淋巴转移有关(p0.05),而与年龄及肿瘤大小没有明显关联(p0.05)。②Ki67蛋白在宫颈鳞癌及CIN组织中呈阳性表达,主要定位在细胞核上。Ki67蛋白在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变和宫颈鳞癌组织中的阳性表达率分别为9.1%、62.2%、90.9%,三者阳性表达呈逐渐上升的趋势,差异有显著性(χ2=89.000, p=0.000); TROP2在CINI、CINⅡ、CINⅢ组织中阳性表达率分别为36%、62.8%、78.9%,且表达水平随着宫颈病变程度的加重而逐渐升高,差异有显著性(x2=42.254,p=0.000)；同时研究显示Ki67的表达水平与宫颈鳞癌的临床分期、病理分级以及淋巴转移有关(p0.05),而与年龄及肿瘤大小没有明显关联(p0.05)。③在正常正常宫颈、CINⅠ、 CINⅡ、CINⅢ及宫颈鳞癌组织中TROP2和Ki67的表达均呈显著正相关(rs=0.583, p=0.004; rs=0.5554, p=0.004; rs=0.430, p=0.01; rs=0.563, p0.001; rs=0.487, p0.001)。2、实时荧光定量PCR法显示：①以GAPDH mRNA为内参照标准,正常宫颈、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈鳞癌组织中TROP2 mRNA的相对表达水平分别为0.97±0.11、1.09±0.17、1.26±0.14、1.51±0.10、1.93±0.17。TROP2 mRNA在宫颈鳞癌及宫颈上皮内瘤变组织中的表达明显高于其在正常宫颈组织中的表达,与正常组比较CINⅡ、CINⅢ及宫颈鳞癌组差异有统计学意义(p分别为p0.05、p0.01、p0.01),而CINI与正常组比较差异无统计学意义(p0.05)。②以GAPDH mRNA为内参照标准,正常宫颈、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈鳞癌组织中Ki67 mRNA的相对表达水平分别为0.93±0.12、1.16±0.08、1.59±0.12、1.94±0.25、2.32±0.14。CINⅡ、CINⅢ及宫颈鳞癌组织中TROP2、Ki67 mRNA的相对表达水平明显高于正常组,两者比较,差异有统计学意义(p0.01,p0.01,p0.001),而CINI与正常组比较差异无统计学意义(p0.05)。3、蛋白质印迹法显示：TROP2的灰度随着宫颈组织病变程度的加重逐渐加深,正常宫颈、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈鳞癌组织中TROP2蛋白的相对表达水平分别为1.0±0.03、1.15±0.12、1.47±0.11、1.79±0.12、2.06±0.11。CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈鳞癌组中TROP2蛋白的相对表达水平明显高于正常组,两者比较,差异有统计学意义(p分别为p0.01,p0.001,p0.001)。结论1、TRoP2的过表达与宫颈鳞癌的发生发展紧密相关,而且TROP2的过量表达与宫颈鳞癌的临床分期,病理分级及淋巴转移紧密相关,而与年龄及肿瘤大小没有明显关联,TRoP2有可能成为宫颈疾病筛查、早期诊断、宫颈鳞癌治疗的重要指标和新靶点。2、Ki67的过表达与宫颈鳞癌发生发展密切相关,且Ki67的过量表达与宫颈鳞癌的临床分期、病理分级及有无淋巴转移有关,而与年龄及肿瘤大小没有明显关联,Ki67对于进一步了解宫颈鳞癌生物学行为和判断预后有很重要的临床应用价值。3、在正常宫颈、CINI、CINII、CINIII及宫颈鳞癌组织中TROP2和Ki67的表达均呈显著正相关,同时检测ITROP2和Ki67有助于宫颈鳞癌的恶性程度的判断和预测预后。
【关键词】：TROP2 Ki67 宫颈病变 宫颈上皮内瘤变 宫颈鳞癌 实时荧光定量PCR 蛋白质印迹
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 中文摘要2-5
• ABSTRACT5-10
• 符号说明10-11
• 第一部分 前言11-12
• 第二部分 材料和方法12-21
• 1 研究对象12
• 2 主要仪器设备12-13
• 3 主要试剂配制13-14
• 4 主要试剂14-15
• 5 方法15-20
• 5.1 免疫组织化学法15-16
• 5.1.1 实验步骤15-16
• 5.1.2 结果判断16
• 5.2 荧光定量PCR检测TROP2、KI67 mRNA的表达16-18
• 5.2.1 实验标本的收集16-17
• 5.2.2 总RNA的提取(Trizol法)17
• 5.2.3 RNA浓度及质量检验17
• 5.2.4 逆转录17-18
• 5.2.5 引物的获取18
• 5.2.6 实时荧光定量PCR反应18
• 5.3 Western blot法18-20
• 6 统计学处理20-21
• 第三部分 结果21-30
• 1 免疫组化法21-27
• 1.1 TROP2蛋白在宫颈病变组织中的表达21-24
• 1.1.1 TROP2在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌中的表达21-23
• 1.1.2 TROP2在宫颈上皮内瘤样变中的表达23
• 1.1.3 ROP2的表达和宫颈鳞癌的临床病理特征之间的关系23-24
• 1.2 Ki67蛋白在宫颈病变组织中的表达24-27
• 1.2.1 Ki67在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌中的表达26
• 1.2.2 Ki67在宫颈上皮内瘤样变中的表达26-27
• 1.2.3 Ki67表达和宫颈鳞癌的临床病理特征之间的关系27
• 1.3 TROP2和Ki67在宫颈组织中表达的相关性27
• 2 实时荧光定量RT-PCR法检测TROP2、KI67mRNA在宫颈组织中的表达27-28
• 3 蛋白印迹法检测宫颈病变组织中TROP2蛋白的表达28-30
• 第四部分 讨论30-39
• 1 TROP2与宫颈鳞癌30-35
• 1.1 TROP2概述30-31
• 1.2 TROP2与恶性肿瘤的相关性31-32
• 1.3 TROP2在宫颈鳞癌组织中的表达及意义32-35
• 1.3.1 TROP2的过表达与宫颈鳞癌的发生发展密切相关32-33
• 1.3.2 TROP2的过表达与宫颈鳞癌的临床分期、病理分级、淋巴转移有关33
• 1.3.3 TROP2有潜力成为宫颈鳞癌治疗的新靶点33-35
• 1.3.3.1 TROP2的调控机制33-34
• 1.3.3.2 TROP2特定的单克隆抗体(hRS7)34-35
• 2 Ki67在宫颈鳞癌35-37
• 2.1 Ki67概述35
• 2.2 Ki67与宫颈鳞癌的关系35-37
• 2.2.1 Ki67的过表达与宫颈鳞癌的发生发展密切相关35-36
• 2.2.2 Ki67的过量表达与宫颈鳞癌的临床分期、病理分级、淋巴转移有关36-37
• 3 TROP2和Ki67在宫颈鳞癌中表达的相关性及意义37
• 4 结论37
• 5 TROP2、Ki67在宫颈病变组织中研究的不足及展望37-39
• 参考文献39-43
• 综述43-51
• 参考文献48-51
• 致谢51-52
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文52-53

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本文编号：758695