BRD4在预测非小细胞性肺癌预后中的作用及其机制研究

发布时间：2017-08-30 10:00

  本文关键词：BRD4在预测非小细胞性肺癌预后中的作用及其机制研究

  更多相关文章： BRD4 非小细胞性肺癌 增殖 凋亡 侵袭 预后

【摘要】：BRD4是布罗莫结构蛋白BET家族中的一员。跟其他的BET家族成员一样,BRD4也包含两个可识别乙酰赖氨酸残基的布罗莫结构域。BRD4是BET家族中研究得最彻底的一员,研究发现BRD4通过其布罗莫结构域在很多生物学进程中扮演重要角色。尤为重要的是,研究发现BRD4的激活表达跟黑色素瘤、肝癌、多发性骨髓瘤、Burkitt’s淋巴瘤、急性髓性白血病及乳腺癌的生存预后及转移密切相关。另外,BRD4的异位融合产物BRD4-NUT跟半数以上侵袭性肿瘤相关。我们前期的实验也发现BRD4与非小细胞性肺癌的侵袭转移能力关系密切,因此,BRD4可作为非小细胞性肺癌的一个潜在预后指标。本实验检测了BRD4蛋白在非小细胞性肺癌及对应癌旁组织中的表达水平,并且利用组织微阵列分析技术,验证了BRD4蛋白表达水平与非小细胞性肺癌临床病理参数的关系及其预后诊断价值。此外,通过小干扰技术抑制非小细胞肺癌细胞系中BRD4的蛋白表达后,我们发现其与非小细胞性肺癌的增殖、侵袭迁移和凋亡密切相关。因此,我们得出结论,BRD4具有潜在预后预测价值并可作为靶向治疗的新靶点,为非小细胞性肺癌的诊治带来新的曙光。第一部分BRD4在非小细胞性肺癌中高表达目的:探究BRD4蛋白在非小细胞性肺癌及对应癌旁组织中的表达情况,初步分析其在非小细胞性肺癌发生发展中扮演的角色。方法:qRT-PCR、Western Blot及免疫组化方法检测BRD4蛋白在非小细胞性肺癌患者癌与对应癌旁组织中的表达情况。结果:上述各方法的结果一致显示BRD4在非小细胞性肺癌患者癌组织中的表达量高于其在对应癌旁组织中的表达量,两者间有显著性差异(P0.05)。结论:BRD4在非小细胞性肺癌患者癌组织中表达升高,可能在肿瘤发生发展过程中发挥重要作用。第二部分BRD4的预后诊断价值目的:探究BRD4与非小细胞性肺癌临床参数的关系及其预后诊断价值。方法:免疫组化方法检测208例非小细胞性肺癌患者癌与对应癌旁组织中BRD4蛋白的表达情况,用SPSS19.0软件统计分析BRD4与肺癌患者临床参数及预后的关系。结果:研究结果显示BRD4蛋白高表达与非小细胞性肺癌患者中的肺鳞癌、淋巴结转移、TNM分期及肿瘤分化程度等密切相关(P0.05),且BRD4高表达组术后总体生存期明显比BRD4低表达组短(P0.05);单因素及多因素分析结果显示BRD4蛋白表达是非小细胞性肺癌患者独立的预后预测因子。结论:BRD4与非小细胞性肺癌的病理类型、TNM分期、淋巴转移及肿瘤分化程度密切相关,具有预测预后的诊断价值。第三部分BRD4对非小细胞性肺癌细胞生物学行为的影响目的:研究BRD4蛋白表达水平的改变对非小细胞性肺癌细胞增殖、侵袭转移能力及凋亡的影响。方法:应用小干扰技术下调BRD4蛋白在非小细胞性肺癌细胞株A549与95-D中的表达,经Western Blot、流式细胞术验证干扰效率后,应用细胞划痕试验检测细胞迁移能力变化,Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力变化,CCK-8及BrdU免疫荧光检测细胞增殖能力变化,流式细胞术检测细胞凋亡变化。结果:vshRNA干扰后A549、95-D细胞株BRD4蛋白表达明显下调,且BRD4表达下调伴随着非小细胞性肺癌细胞增殖、侵袭迁移能力明显减弱,且凋亡率增加(P0.05)。结论:BRD4具有促进非小细胞性肺癌细胞增殖、侵袭迁移的能力,且能抑制肿瘤细胞凋亡。
【关键词】：BRD4 非小细胞性肺癌 增殖 凋亡 侵袭 预后
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-11
• 英文缩略词11-12
• 第一章 前言12-14
• 第二章 BRD4在非小细胞性肺癌组织中高表达14-24
• 2.1 材料与方法14-19
• 2.1.1 材料14-15
• 2.1.1.1 组织标本14
• 2.1.1.2 试剂14-15
• 2.1.1.3 仪器15
• 2.1.2 方法15-19
• 2.1.2.1 组织RNA的提取（Trizol法）15-16
• 2.1.2.2 cDNA的合成（逆转录法）16
• 2.1.2.3 实时荧光定量PCR16-17
• 2.1.2.4 组织蛋白的提取17
• 2.1.2.5 蛋白免疫印迹17-18
• 2.1.2.6 免疫组织化学18-19
• 2.1.2.7 免疫组化结果判定19
• 2.2 结果19-20
• 2.2.1 qRT-PCR、Western Blot检测BRD4在肺癌及其对应癌旁中的表达19-20
• 2.2.2 免疫组化法检测BRD4在非小细胞性肺癌及其对应癌旁中的表达20
• 2.3 讨论20-21
• 2.4 结论21-22
• 2.5 参考文献22-24
• 第三章 BRD4的预后诊断价值24-31
• 3.1 材料与方法24-25
• 3.1.1 材料24
• 3.1.1.1 组织标本24
• 3.1.1.2 试剂24
• 3.1.1.3 仪器24
• 3.1.2 方法24-25
• 3.1.2.1 组织芯片制作24
• 3.1.2.2 免疫组织化学24
• 3.1.2.3 数据统计分析24-25
• 3.2 结果25-29
• 3.2.1 组织芯片技术进一步研究BRD4在肺癌及其癌旁中的表达25
• 3.2.2 本实验中非小细胞性肺癌患者的临床病理参数25-26
• 3.2.3 统计分析BRD4与各临床病理参数的关系26-27
• 3.2.4 BRD4高表达与非小细胞性肺癌的差预后成正相关27-28
• 3.2.5 非小细胞性肺癌亚型分析进一步明确BRD4与肺癌患者预后的关系28-29
• 3.3 讨论29-30
• 3.4 结论30
• 3.5 参考文献30-31
• 第四章 BRD4对非小细胞性肺癌细胞生物学行为的影响31-43
• 4.1 材料与方法31-35
• 4.1.1 材料31-32
• 4.1.1.1 细胞株31
• 4.1.1.2 细胞培养材料31
• 4.1.1.3 试剂31
• 4.1.1.4 仪器31-32
• 4.1.2 方法32-35
• 4.1.2.1 细胞培养32
• 4.1.2.2 细胞总RNA提取32
• 4.1.2.3 cDNA的合成32
• 4.1.2.4 荧光定量PCR32-33
• 4.1.2.5 细胞蛋白提取33
• 4.1.2.6 蛋白免疫印迹33
• 4.1.2.7 小干扰试验33
• 4.1.2.8 干扰效果鉴定33-34
• 4.1.2.9 细胞划痕实验34
• 4.1.2.10 Transwell小室侵袭实验34
• 4.1.2.11 流式细胞凋亡检测34-35
• 4.1.2.12 肿瘤细胞增殖能力检测35
• 4.1.2.13 数据统计分析35
• 4.2 结果35-40
• 4.2.1 非小细胞性肺癌细胞系中BRD4的表达情况35-36
• 4.2.2 BRD4干扰效果检测36-37
• 4.2.3 BRD4对肿瘤细胞迁移能力的影响37-38
• 4.2.4 BRD4对肿瘤细胞侵袭能力的影响38-39
• 4.2.5 BRD4对肿瘤细胞凋亡的影响39
• 4.2.6 BRD4对细胞增殖能力的影响39-40
• 4.3 讨论40-41
• 4.4 结论41
• 4.5 参考文献41-43
• 致谢43-44
• 攻读学位期间的研究成果44-45
• 综述45-54
• 参考文献51-54

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 胡华成,任少华;非小细胞性肺癌的治疗近况[J];实用内科杂志;1991年01期

2 Eckart Laack,Dieter Kurt Hossfeld,廖永德;非小细胞性肺癌的治疗[J];The Chinese-German Journal of Clinical Oncology;2000年06期

3 王艳;靶向治疗——非小细胞性肺癌的新疗法[J];中华医学信息导报;2005年03期

4 何伟凤;;中西医结合治疗晚期非小细胞性肺癌30例临床观察[J];中医药导报;2011年06期

5 Halmes EC ,王风展 ,包兴才;非小细胞性肺癌的辅助治疗[J];国外医学(肿瘤学分册);1993年02期

6 刘江,王颖,孙黎飞,李勇;P~(53)蛋白表达与非小细胞性肺癌的临床关系[J];前卫医药杂志;1997年01期

7 李育强,张红梅;老君仙灵芝口服液配合化疗治疗中晚期非小细胞性肺癌56例临床研究[J];中国肿瘤生物治疗杂志;1997年03期

8 李育强,程建渊,李宝华;老君仙灵芝口服液配合化疗治疗中晚期非小细胞性肺癌56例[J];山东医药;1998年03期

9 张石峰;崔建华;彭勇;吴琼辉;黎亚芳;;中西医结合治疗中晚期非小细胞性肺癌临床疗效观察[J];亚太传统医药;2013年10期

10 罗平 ,谭丽娟;非小细胞性肺癌患者血清硫酸粘多糖片段的检测及其临床意义[J];广西医学;2003年03期

中国重要会议论文全文数据库 前5条

1 毛伟敏;;老年及高龄非小细胞性肺癌治疗中的问题与对策[A];浙江省中西医结合学会肿瘤专业委员会第六次学术年会暨省级继续教育学习班资料汇编[C];2005年

2 关金芳;王大庆;邓新娜;;晚期非小细胞性肺癌治疗新进展(英文)[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年

3 于保法;关长江;马振禄;张敬泉;杨光明;;缓释库疗法加放疗治疗晚期非小细胞性肺癌回顾性分析[A];2007第六届全国放射肿瘤学学术年会论文集[C];2007年

4 牛立志;郭子倩;周强;徐克成;;不能手术切除非小细胞性肺癌的多疗法序贯治疗——85例前瞻性研究[A];中国中西医结合学会第十五次全国消化系统疾病学术研讨会论文汇编[C];2003年

5 牛立志;何卫兵;郭子倩;张述平;刘超英;贺轶松;左建生;徐克成;;经皮冷消融治疗局部进展型非小细胞性肺癌[A];中国中西医结合学会第十六次全国消化系统疾病学术研讨会论文汇编[C];2004年

中国重要报纸全文数据库 前2条

1 本报记者 杨博;欧盟七年来首次批准抗胰腺癌新药[N];中国证券报;2014年

2 袁松范;Aventis公司上半年销售增长21%[N];医药经济报;2000年

中国硕士学位论文全文数据库 前4条

1 廖云飞;BRD4在预测非小细胞性肺癌预后中的作用及其机制研究[D];南昌大学;2016年

2 夏文进;人类XRCC3-241单核苷酸多态性与肺癌的易感性研究[D];浙江大学;2008年

3 张毅敏;非小细胞性肺癌ERCC1的表达与生存的关系研究[D];浙江大学;2008年

4 廖琴;磁共振扩散加权成像及ADC值测量对非小细胞性肺癌肺门纵隔淋巴结的鉴别诊断价值[D];南昌大学;2011年

，

本文编号：758620