口腔鳞癌中上皮—间充质转化现象的初探

发布时间：2017-08-30 17:37

  本文关键词：口腔鳞癌中上皮—间充质转化现象的初探

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【摘要】：目的运用免疫组织化学方法分析在口腔鳞状细胞癌组织中E-钙黏蛋白、波形蛋白、β-联蛋白及转化生长因子β1的表达情况,并结合运用免疫荧光和Transwell小室实验检测体外培养的SCC-9和Tca8113两种口腔鳞癌细胞中上述四种标记物的表达与其侵袭性的相关性,探讨口腔鳞状细胞癌中上皮-间充质转化现象的基本表现,为进一步探究上皮-间充质转化现象及研究口腔鳞状细胞癌预防提供理论基础。方法(1)组织学实验:收集89例口腔鳞状细胞癌组织石蜡标本及20例正常口腔黏膜标本,将89例口腔鳞癌分为I级(25例)、II级(34例)、III级(30例),分别进行E-钙黏蛋白、波形蛋白、β-联蛋白及转化生长因子β1四种蛋白的免疫组化染色。用半定量法评价免疫组化结果,统计分析各项指标与口腔鳞状细胞癌分化程度之间的关系,以及各项指标间的相关性;(2)细胞学实验:①体外培养SCC-9及Tca8113口腔鳞癌细胞,制作细胞爬片,进行上述四种蛋白的免疫荧光染色,在荧光显微镜下每张爬片随机选择5个视野拍照。计算每张照片的平均荧光强度,统计分析两种细胞间各蛋白表达的差异;②体外饥饿培养SCC-9及Tca8113口腔鳞癌细胞12小时后种于Transwell上室内,在下室加入10%胎牛血清培养液。培养36小时后用结晶紫染色,计算细胞穿过小室膜底部的数目。结果(1)组织学实验结果:①每组数据经S-W检验,P0.05,显示数据不服从正态分布,则用中位数加减四分位数间距(M±QR)表示。E-钙黏蛋白在正常黏膜中评分中位数为9.00,OSCC组中评分分别为9.00、6.00和6.00,正常组与OSCC组比较差异有统计学意义(Z=-4.211,P=0.000),评分与分化程度有关(P=0.000);波形蛋白在正常组织中评分为0.00,在OSCC I、II、III级组中评分分别为0.00、0.00和4.00,正常组与OSCC组差异有统计学意义(Z=-3.675,P=0.000),评分与分化程度有关(P=0.000);β-联蛋白在正常组织中评分为9.00,在OSCC I、II、III级组中评分分别为3.00、4.00和3.00,正常组与OSCC组差异有统计学意义(Z=-6.300,P=0.000),评分与分化程度有关(P=0.017);TGF-β1在正常组织中评分为2.00,在OSCC I、II、III级组中评分分别为3.00、4.00和6.00,正常组与OSCC组差异有统计学意义(Z=-3.329,P=0.000),评分与分化程度有关(P=0.000);②四个指标相关关系:E-钙黏蛋白与β-联蛋白之间存在显著正相关(r=0.327,P=0.002),与波形蛋白间存在显著负相关(r=-0.386,P=0.001),与转化生长因子-β1间存在显著负相关性(r=-0.304,P=0.004);波形蛋白与转化生长因子-β1间存在显著正相关(r=0.401,P=0.000);(2)细胞学实验结果:①体外培养癌细胞进行免疫荧光实验中,SCC-9中E-钙黏蛋白未观察到阳性荧光表达,波形蛋白、β-联蛋白和转换生长因子-β1平均荧光强度均数分别为0.0531、0.0570和0.0575;Tca8113中E-钙黏蛋白、波形蛋白、β-联蛋白和转换生长因子-β1平均荧光强度均数分别为0.00145、0.0421、0.0500和0.0499;E-钙黏蛋白在SCC-9及Tca8113中的表达水平差异无统计学意义(t=-1.395,P=0.176);波形蛋白在SCC-9及Tca8113中的表达水平差异有统计学意义(t=3.125,P=0.003);β-联蛋白在SCC-9及Tca8113中的表达水平差异有统计学意义(t=2.581,P=0.014);转换生长因子-β1在SCC-9及Tca8113中的表达水平差异有统计学意义(t=2.495,P=0.016);②癌细胞Transwell小室侵袭实验中,SCC-9及Tca8113穿过基质胶进入小室底的细胞均数分别为57.93和42.47,其差异有统计学意义(t=3.309,P=0.003)。结论(1)E-钙黏蛋白和β-联蛋白在口腔鳞癌细胞中表达下调,波形蛋白表达上调,转化生长因子-β1总体表达有上调趋势,提示在口腔肿瘤的发生和发展中出现了上皮-间充质转化现象;(2)口腔鳞癌细胞膜上,β-联蛋白与E钙黏蛋白之间表达有显著的正相关性,与波形蛋白之间有负相关趋势;转化生长因子-β1与E-钙黏蛋白之间有显著的负相关性,与波形蛋白之间有显著正相关性,提示β-联蛋白和转化生长因子-β1在口腔鳞癌的EMT进程中发挥着重要的作用。(3)与Tca8113细胞相比,SCC-9中波形蛋白、转化生长因子-β1和胞核及胞浆中β-联蛋白的荧光表达增加,E-钙黏蛋白表达减少,结合Transwell小室侵袭实验SCC-9穿过基质胶的细胞数较多的结果,提示与Tca8113细胞相比,SCC-9细胞的间质表型更强,为进一步研究口腔癌细胞中上皮-间充质转化的现象提供了良好的细胞模型。
【关键词】：口腔鳞状细胞癌 上皮-间充质转化 免疫组织化学 免疫荧光 Transwell侵袭实验
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.8
【目录】：

• 中文摘要3-6
• 英文摘要6-10
• 前言10-20
• 1. E-cadherin的研究现状10-12
• 2. Vimentin的研究现状12-14
• 3. β-catenin的研究现状14-17
• 4. TGF-β1 的研究现状17-19
• 5. 本研究的目的及意义19-20
• 实验材料及方法20-31
• 1. 组织学实验20-24
• 2. 细胞学实验24-27
• 3. 结果分析27-28
• 4. 统计学处理28-29
• 5. 实验流程图29-31
• 实验结果31-37
• 1 石蜡切片免疫组化结果31-34
• 2 癌细胞免疫荧光结果34-36
• 3 癌细胞Transwell小室侵袭实验结果36-37
• 讨论37-44
• 结论44-45
• 参考文献45-53
• 附录一53-55
• 附录二55-66
• 在校期间发表的文章66-67
• 致谢67

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本文编号：760700