法舒地尔抗白血病机制相关研究

发布时间：2017-08-31 13:02

  本文关键词：法舒地尔抗白血病机制相关研究

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【摘要】：实验目的体外研究Rho激酶抑制剂法舒地尔对HL-60细胞增殖、凋亡、分化以及迁移的作用,初步阐明法舒地尔抑制白血病转移的可能作用机制,为临床上将法舒地尔作为抗白血病药物提供更多基础理论。实验材料与实验方法用法舒地尔以不同浓度对HL-60细胞(人急性早幼粒白血病细胞)和患者白血病细胞处理96小时(分时段24、48、72、96小时)用台盼蓝拒染方法计数活细胞数,以此观察法舒地尔对白血病细胞增殖的抑制作用;HL-60细胞为天津血液病医院馈赠;用法舒地尔以不同浓度对HL-60细胞处理48小时,分时段(6h、12h、24h、48h)利用流式细胞仪器测其凋亡率;用法舒地尔以不同浓度对HL-60细胞处理72小时,利用NBT还原实验计算阳性细胞百分比,利用流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD11b、CD13;法舒地尔以不同浓度对HL-60细胞处理72小时后利用RT-PCR检测MMP-2、MMP-9m RNA的表达;利用Transwell小室体外构建肿瘤细胞迁移模型,用法舒地尔以不同浓度在Transwell小室上室对HL-60细胞和患者白血病细胞处理12小时后计数Transwell小室下室细胞数目,以此观察法舒地尔对白血病细胞迁移的影响。实验结果1.利用台盼蓝拒染的方法监测法舒地尔对HL-60细胞增殖的抑制作用:不同浓度的法舒地尔(25、50、75umol/l)在24、48、72、96小时均能抑制HL-60细胞增殖,其抑制增殖的强度具有时间-浓度依赖。2.利用台盼蓝拒染的方法监测法舒地尔对患者白血病细胞的抑制作用:不同浓度的法舒地尔(25、50、75、100umol/l)在24、48、72、96小时均能抑制患者白血病细胞增殖(2例M5、1例慢粒),其抑制增殖的强度具有时间-浓度依赖。3.流式细胞仪检测白血病细胞凋亡率:以不同的浓度的法舒地尔(50、100、150umol/L)处理HL-60细胞6h、12h、24h、48h,Annexin V-7AAD双标后用细胞流式术检测显示法舒地尔在一定时间范围内诱导HL-60细胞凋亡的作用随药物浓度及作用时间的增加而增强,并且呈现明显的时间和剂量依赖性,同一时间对照组与各实验组细胞凋亡率比较有差异,具有统计学意义(P0.05)。4.用法舒地尔各以25umol/l、50umol/l、75umol/l浓度处理HL-60细胞72小时后,收集细胞经NBT染色后在光学显微镜下计数阳性细胞百分比,其结果显示随药物浓度的增大阳性细胞百分比也随之升高;用法舒地尔各以25umol/l、50umol/l、75umol/l浓度处理HL-60细胞72小时,用流式细胞仪检测HL-60细胞表面分化抗原CD11b、CD13的表达率,发现随着药物浓度的增加CD11b的表达率也随之增加,而CD13的表达率随之递减,对照组与实验组各组相比有差异,具有统计学意义(P0.05)。5.利用RT-PCR检测MMP-2、MMP-9m RNA表达:将细胞用法舒地尔以50、100、150umol/l浓度处理HL-60细胞72h,结果显示与对照组相比随着药物浓度的增大,MMP-2、MMP-9m RNA表达量下调。6.利用Transwell小室体外构建肿瘤细胞迁移模型观察法舒地尔对HL-60细胞和患者白血病细胞迁移影响:与对照组相比随着药物浓度的增大,法舒地尔对HL-60细胞和患者白血病细胞迁移的抑制作用逐渐增强。对照组与各实验组对比有差异,具有统计学意义(P0.05)实验结论法舒地尔能抑制白血病细胞增殖并促其凋亡,能促进白血病细胞分化,能够抑制白血病细胞远处转移,揭示了Rho激酶抑制剂法舒地尔在抗白血病方面的作用,为将来临床应用法舒地尔治疗白血病奠定了理论基础。
【关键词】：白血病 法舒地尔 转移 HL-60
【学位授予单位】：延安大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R733.7
【目录】：

• 缩略词中英文对照表3-4
• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一章 绪论10-14
• 第二章 研究背景14-16
• 第三章 实验材料16-18
• 第四章 实验方法及原理18-24
• 第五章 实验结果24-30
• 第六章 讨论30-33
• 第七章 结论与展望33-34
• 参考文献34-41
• 综述41-51
• 参考文献47-51
• 致谢51-52

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本文编号：765724