FBXW7在肾癌细胞凋亡机制中的初步研究

发布时间：2017-08-31 22:01

  本文关键词：FBXW7在肾癌细胞凋亡机制中的初步研究

  更多相关文章： FBXW7 肾细胞癌 周期 凋亡 增殖

【摘要】：研究目的:(1)探究肾癌组织和癌旁组织中FBXW7表达情况。探讨FBXW7在肾癌组织和癌旁组织中有无差异,以及对病人预后的影响。(2)通过CCK8、平板克隆实验,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,检测过表达FBXW7的肾癌细胞系的细胞活力和增殖能力。(3)通过q PCR、Western blot来探究FBXW7和c-myc,c-Jun之间的关系。方法:收集105例来自于中山大学肿瘤医院和暨南大学华侨医院2008年到2012年肾癌和对应的癌旁组织的病理样本,应用免疫组化技术,对样本进行染色,通过样本染色的深浅来判断FBXW7表达量的多少。通过q PCR来检测肾癌细胞系ACHN,A704对照组和实验组FBXW7的m RNA表达量。用Western blot来检测肾癌细胞系ACHN,A704对照组和实验组FBXW7的蛋白表达的量,以及c-myc,c-Jun的蛋白表达的量。通过平板克隆、CCK8等功能实验比较对照组和实验组的细胞克隆数,以及OD值,还有细胞的凋亡和细胞周期的变化来判断高表达FBXW7对肾癌细胞的增殖能力的影响。结果:病理样本免疫组化检测蛋白表达发现,癌组织多呈淡染,癌旁组织多呈深染,通过免疫组化积分比较(P0.0001)这表明癌组织中FBXW7表达远远低于癌旁正常组织。肾透明细胞癌FBXW7低表达组(n=22)和高表达组(n=59)的术后的生存。高表FBXW7组的生存率要明显好于低表达组(log-rank test,P0.001)。通过western和Real-Time q PCR在细胞系中的检测发现,转染FBXW7质粒的ACNH,A704细胞FBXW7 m RNA和蛋白比对照组明显增多,而c-myc,c-Jun蛋白比对照组明显减少。转染入FBXW7质粒的细胞450nm波长的吸光度值明显要低于转染入空质粒的对照组,细胞增殖活力明显变弱(Vector vs Plasmid A704:1.327±0.036vs1.035±0.042 P0.05;ACHN:1.403±0.024vs1.166±0.029 P0.05)。实验组细胞克隆数超过50个的数量明显少于对照组,转入FBXW7质粒的细胞的增殖能力受到了明显的抑制。(Vector vs Plasmid ACHN:567±19 vs 412±21P0.05;A704:279±13 vs144±7 P0.05)。流式细胞仪用PI法检测细胞周期,高表达FBXW7的ACHN,A704 G0/G1期所占的比例要高于对照组(Vector vs Plasmid ACHN 51.93%vs 63.25%P0.05;A704 60.31%vs68.32%P0.05)。高表达FBXW7的ACHN,A704细胞早期和晚期凋亡比对照组多(Vector vs Plasmid ACHN 5.1%vs 8.5%P0.05;A704 14.1%vs20.4%P0.05)结论:(1)FBXW7在癌组织中表达水平低于癌旁组织,高表达FBXW7的肾癌细胞系的活力和增殖能力明显低于对照组。肾透明细胞癌FBXW7低表达组(n=22)和高表达组(n=59)的术后的生存。高表FBXW7组的生存率要明显好于低表达组(log-rank test,P0.001)。结果表明FBXW7可能发挥某种抑癌作用。(2)通过western发现,c-myc,c-Jun的表达量随着FBXW7 的增多而减少。表明FBXW7可能通过减少c-myc,c-Jun来发挥抑癌作用。
【关键词】：FBXW7 肾细胞癌 周期 凋亡 增殖
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.11
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 中英文缩略词表11-13
• 前言13-17
• 材料与方法17-26
• 结果26-32
• 讨论32-38
• 结论38-39
• 参考文献39-42
• 文献综述 过表达FBXW7抑制肾癌细胞的增殖促进凋亡42-52
• 参考文献50-52
• 成果附录52-53
• 致谢53

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