GAS2-Calpain2轴维持白血病细胞的生长
本文关键词：GAS2-Calpain2轴维持白血病细胞的生长
更多相关文章： GAS2 Calpain2 GASDN 免疫共沉淀
【摘要】：目的:GAS2(生长抑制特异性蛋白2)调控细胞周期、凋亡和Calpain(钙蛋白激酶)活性。GAS2-Calpain2轴在肿瘤细胞恶性转化中具有双重作用,但关于GAS2-Calpain2轴在白血病细胞中的功能研究还非常有限,本研究旨在初步探讨GAS2-Calpain2轴在白血病细胞生长中的功能及作用机制。方法:(1)利用实时定量PCR(Quantitative Real-time PCR,Q-RT-PCR)和Calpain活性检测等方法检测各类白血病患者骨髓细胞及白血病细胞株中GAS2的m RNA表达及Calpain的活性;(2)Western blot和免疫荧光(Immunofluorescence,IF)技术检测正常骨髓细胞、白血病患者骨髓细胞以及白血病细胞系中GAS2蛋白的表达;(3)利用磷酸钙沉淀法制备慢病毒,转导THP-1和Jurkat细胞,Q-RT-PCR和Western blot等方法检测干扰效率,比较GAS2沉默和对照细胞的增殖、集落生成和Calpain活性的差异;(4)注射对照和GAS2沉默THP1至裸鼠皮下,比较它们生成肿瘤的能力;(5)免疫共沉淀技术检测GAS2与Calpain2在THP-1和Jurkat细胞中的相互作用,并研究Calpain2敲减在GAS2沉默诱导的生长抑制中的作用;(6)比较GAS2沉默和对照慢性髓细胞白血病(CML)患者CD34+细胞集落生成能力的差异。结果:(1)119例不同类型白血病患者骨髓中GAS2较正常骨髓都显著异常高表达;类似地,不同白血病细胞株中GAS2表达均较对照细胞显著增高;Calpain活性在22例急性髓细胞白血病(AML)患者样本中较正常骨髓显著降低;(2)免疫荧光染色显示白血病细胞株CCRF-CEM、SHI-1、Jurkat、THP-1和K562中GAS2蛋白表达均明显高于正常骨髓细胞;(3)使用慢病毒递送含sh NC(包含一段无义的对照sh RNA核苷酸序列)和sh919sh1206(分别以sh GAS2#1和sh GAS2#2表示,分别包含特异性沉默GAS2的sh RNA核苷酸序列)至THP-1和Jurkat细胞,GAS2的m RNA和蛋白表达抑制率均60%;沉默GAS2显著增强THP-1和Jurkat细胞的Calpain的活性并抑制细胞增殖和集落生成能力;(4)GAS2沉默显著抑制THP-1细胞的裸鼠皮下成瘤能力;(5)通过免疫共沉淀证明了在Jurkat和THP-1细胞中GAS2特异性结合Calpain2而非Calpain1,在THP-1细胞中同时沉默GAS2和Calpain2能够逆转单独沉默GAS2诱发的生长抑制;(6)在CML干/祖细胞中沉默GAS2显著抑制它们的集落生成能力。结论:GAS2在多种人类白血病包括慢性髓细胞白血病(CML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓细胞白血病(AML)均异常高表达。沉默GAS2在体内和体外均能显著抑制THP-1和Jurkat的细胞增殖并增强Calpain活性,沉默GAS2也抑制CML患者CD34+细胞的集落生成能力。GAS2特异结合Calpain2而非Calpain1,Calpain2参与GAS2沉默诱发的生长抑制。综上,我们证实GAS2-Calpain2维持白血病细胞的生长。
【关键词】：GAS2 Calpain2 GASDN 免疫共沉淀
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R733.7
【目录】：
- 中文摘要4-6
- Abstract6-10
- 引言10-12
- 材料和方法12-25
- 一、材料12-14
- 1.1 标本及细胞系12
- 1.2 主要试剂12-13
- 1.3 主要仪器13-14
- 二、方法14-25
- 2.1 细胞培养14
- 2.2 细胞总RNA提取14
- 2.3 白血病患者样本收集14-15
- 2.4 荧光定量PCR15-16
- 2.5 蛋白免疫印迹实验（Western blot）16-17
- 2.6 流式细胞术（Flow Cytometric Analysis）17-18
- 2.7 免疫荧光染色（Immunofluorescence Staining）18
- 2.8 免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation）18-19
- 2.9 GAS2 慢病毒表达载体的构建19-22
- 2.10 制备慢病毒22-23
- 2.11 细胞增殖和集落生成实验23
- 2.12 Calpain活性的检测23
- 2.13 裸鼠的皮下成瘤23-24
- 2.14 以Ps为载体递送mi RNA24
- 2.15 细胞凋亡检测24
- 2.16 统计学分析24-25
- 结果25-36
- 1、GAS2 在白血病细胞系株中的表达25-26
- 2、GAS2 在多种白血病细胞株中的蛋白表达26
- 3、GAS2 为沉默抑制THP-1 和Jurkat细胞的生长26-28
- 4、过表达GAS2 能恢复由GAS2 沉默造成的生长抑制28-29
- 5、沉默 GAS2 造成的 THP-1 细胞增殖抑制与细胞凋亡相关29
- 6、沉默GAS2 显著抑制THP-1 细胞的裸鼠皮下成瘤能力29-30
- 7、沉默GAS2 抑制CML患者CD34+细胞的集落生成30-31
- 8、GAS2 与Calpain2 存在内源性相互结合31-32
- 9、Calpain2 是沉默GAS2 抑制细胞生长所必需的32-34
- 10、GAS2 在不同白血病患者及正常骨髓标本中的表达34-36
- 讨论36-38
- 参考文献38-41
- 综述 Calpain与肿瘤细胞41-53
- 参考文献46-53
- 攻读学位期间公开发表的论文53-54
- 主要试剂配制54-55
- 中英文缩略词汇表55-56
- 致谢56-58
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 纪立农,陈陵霞,韩学尧,祝方;Calpain10基因多态性与中国人2型糖尿病遗传易感性的相关性研究[J];中国糖尿病杂志;2002年01期
2 苏燕;熊国梅;彭姝彬;;Calpain10基因多态性与2型糖尿病的相关性研究[J];现代生物医学进展;2006年11期
3 唐亚平;戴芳;杨宏宝;;2型糖尿病与calpain 10基因的研究[J];检验医学与临床;2007年10期
4 冯彤;王华;;实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑CalpainⅠ表达及其临床意义[J];中国医学文摘(儿科学);2008年02期
5 褚志华;张君;袁红玲;田世坤;徐文静;陆环;李爱琴;谢建新;;Calpain 10基因与新疆维吾尔族2型糖尿病遗传易感性研究[J];石河子大学学报(自然科学版);2009年03期
6 许军峰;郭琳;;Calpain在脑缺血细胞凋亡机制的研究进展[J];中国老年学杂志;2011年04期
7 张茂昒;许冰莹;邱俊;龚鹤琴;李云涛;杨昭;鄢志梅;马景孚;;Calpain10基因多态性与昆明地区人群2型糖尿病相关性研究[J];中国慢性病预防与控制;2005年06期
8 邱俊;张茂昒;;昆明地区人群Calpain10基因SNP44变异与2型糖尿病遗传易感性的关联研究[J];昆明医学院学报;2006年02期
9 陈小盼;宋钦华;陈志斌;王转锁;;海南黎族2型糖尿病患者Calpain-10基因多态性的实验研究[J];临床荟萃;2006年14期
10 王东;陈军建;俞力;邓梅香;王莹;陈霞;;Calpain-10基因SNP43单核苷酸多态性与2型糖尿病的相关性研究[J];山东医药;2008年25期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 姜立群;温绍君;王红月;陈兰英;;应用酵母双杂交系统筛选心脏文库中与calpain相作用的蛋白质[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
2 李明辉;王兴冈;谢烨卿;虞勇;陈瑞珍;;Calpain在柯萨奇B3病毒引起的心肌纤维化发生过程中的作用[A];第十三次全国心血管病学术会议论文集[C];2011年
3 徐超;;Calpain:缺血性脑损伤保护作用的一个靶点[A];中国药理学会第十届全国神经学术会议暨浙江省药理学会2002年年会论文摘要集[C];2002年
4 徐超;;Calpain活性抑制与脑缺血大脑的保护[A];第八届全国生化药理学术讨论会暨第七届Servier奖颁奖大会会议摘要集[C];2003年
5 Fei Liu;Nana Jin;Xiaomin Yin;Wei Qian;Jianhua Shi;Jianlan Gu;Caoyi Chen;;Truncation and activation of GSK-3 by calpain I:a molecular mechanism links to tau hyperphosphorylation[A];2013年全国老年性痴呆与相关疾病学术会议论文汇编[C];2013年
6 吴金兰;万福生;;Calpain与心血管疾病的关系[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2010年学术交流会论文集[C];2010年
7 虞勇;;Calpain在CVB3感染大鼠心肌细胞凋亡中的作用[A];中华医学会心血管病学分会第十次全国心血管病学术会议汇编[C];2008年
8 孙会;秦贵信;姜海龙;张庆华;高磊;;宰前短期高钙日粮对猪肌钙含量和μ-calpain活性及其mRNA表达量的影响[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
9 张仁利;黄达娜;高世同;耿艺介;吴少庭;胡章立;张顺祥;程锦泉;;疫苗候选分子Calpain抗日本血吸虫感染的保护性免疫机制[A];全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集[C];2006年
10 余冰;唐仁勇;陈代文;;镁离子对大鼠L6成肌细胞μ-Calpain基因表达及Nebulin降解的影响[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十次学术研讨会论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 程晓刚;Calpain inhibitor I对创伤应激相关功能调控的实验研究[D];第三军医大学;2004年
2 贾宝成;风湿性心脏病心房颤动的电生理机制及Calpain Ⅰ的作用机制研究[D];第二军医大学;2004年
3 张勇;α-酮基酰胺类Calpain抑制剂的设计、合成与活性研究[D];沈阳药科大学;2008年
4 姜立群;人calpain1大亚基相作用的蛋白质筛选及其在Angll诱导心肌细胞肥大模型中功能的初步探索[D];中国协和医科大学;2003年
5 王宇卉;Caspase-3与calpain在缺血性脑损伤中的作用及治疗干预的实验研究[D];第二军医大学;2002年
6 陈莉娜;新生鼠实验性缺氧缺血性脑损伤后μ-Calpain的活性变化及其抑制剂的脑保护作用研究[D];四川大学;2006年
7 张云云;实验性糖尿病性多发性神经病CGT、calpainⅡ的表达及人神经生长因子的干预作用[D];复旦大学;2003年
8 崔巍;游离脂肪酸通过Ca~(2+)/calpain-2途径诱导β细胞内质网应激和凋亡的机制研究[D];第四军医大学;2013年
9 刘德杰;Calpains对机械通气肺损伤早期炎性反应的作用及机制研究[D];山东大学;2013年
10 唐仁勇;μ-Calpain、Calpastatin与猪肉嫩度的关系及其基因表达的营养调控研究[D];四川农业大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙丽丽;GAS2-Calpain2轴维持白血病细胞的生长[D];苏州大学;2015年
2 王东;Calpain-10基因43位点单核苷酸多态与2型糖尿病的相关性研究[D];江苏大学;2008年
3 李明辉;Calpain在急性病毒性心肌炎发病中的作用研究[D];复旦大学;2010年
4 冯彤;实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑皮质Calpain表达的研究[D];中国医科大学;2008年
5 张双;Calpain介导小鼠心肌缺血/再灌注氧化应激诱导的细胞凋亡机制研究[D];川北医学院;2014年
6 张晓纲;哮喘豚鼠心肌组织calpain表达的研究[D];中国医科大学;2007年
7 冯烨;氧化应激中calpain对GSK-3β的片段化在其活性调节中的作用及机制[D];华中科技大学;2012年
8 任虎;UK114和calpain-5调节肿瘤细胞增殖的研究[D];山西农业大学;2014年
9 李蓉;Calpain-10基因多态性与PCOS患者遗传易感性的相关性研究[D];四川大学;2005年
10 李庆伟;m-Calpain在慢性阻塞性肺疾病大鼠骨骼肌中表达的研究[D];郑州大学;2014年
，本文编号：768342
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zlx/768342.html
