急性早幼粒细胞白血病临床及遗传学因素研究

发布时间：2017-09-01 00:15

  本文关键词：急性早幼粒细胞白血病临床及遗传学因素研究

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【摘要】：目的1.系统分析2003年1月至2015年1月在苏大附属第一医院就诊的1208例初治急性早幼粒细胞白血病(APL)患者的临床实验室特征及相关基因的突变情况,总结本中心APL患者的临床特点。2.对有完整临床资料的470例初治急性早幼粒细胞白血病患者,探讨附加染色体异常对APL临床预后的影响3.运用FISH和RT-PCR等技术寻找STAT5B-RARα阳性的APL患者,总结其临床预后特征,并克隆STAT5B-RARα融合基因,采用体内外实验研究STAT5B-RARα融合基因的生物学功能及致白血病机制。方法1.选取2003年1月至2015年1月在苏大附一院就诊的1208例初治APL患者,收集基本临床资料及实验室MICM资料,分析这些APL患者的核型特点、融合基因类型,伴随突变等临床特点及相关基因突变对临床预后的影响,总结我中心APL患者基本特征。2.对临床资料完整的470例初治APL患者,根据染色体核型将其分为单纯t(15;17)组、伴附加染色体异常组等,利用SPSS 21.0软件,采用Kaplan-Meier法、卡方检验和秩和检验统计方法分析比较各组的实验室及临床特征,根据附加染色体的结构及数量异常将进一步分组,分析各组附加染色体异常与单纯t(15;17)组临床预后的差别。3.采用FISH和RT-PCR等技术发现STAT5B-RARα阳性的APL患者,总结其临床实验室特征。拟通过RT-PCR技术克隆STAT5B-RARα融合基因,以LV5慢病毒为载体,携带STAT5B-RARα在U937细胞中表达,采用CCK-8法绘制细胞生长曲线、集落生成实验等检测STAT5B-RARα对U937细胞增殖能力的影响。结果1、本中心1208例初治APL患者的临床及遗传学特征1208例初诊APL患者中男性633例,女性575例,男女之比:1.10:1,中位年龄39岁(4-78岁)。APL患者主要集中于30-49岁。依据细胞及分子遗传学特征,将1208例初诊的APL患者分别为1175例典型APL患者,17例RARα变异型APL患者,和16例染色体及融合基因均阴性,但骨髓形态,白血病免疫分型及临床特征均支持该诊断的APL患者。17例RARα变异型APL患者,男性患者比例显著高于典型APL患者(P=0.005)。染阴融阴组(P=0.002)及变异型组患者(P=0.005)初诊白细胞均明显高于典型组APL患者。染阴融阴组(P=P=0.041)及RARα变异型APL患者(P0.001)的高危组所占比例均明显高于典型APL患者。对核型资料完整的1142例APL患者进行核型分析,发现816例APL患者有单纯t(15;17),占71.45%;208例患者伴附加染色体异常,占18.21%;78例APL患者为正常核型。17例RARα重排变异的APL患者,比例为1.49%。另外,有15例APL患者有包含15/17号染色体在内的3条或3条以上的染色体复杂易位。+8染色体是最常见的附加染色体异常,共有47例,比例为22.60%;9q-,7q-,+21所占比例较高,分别有15例,12例,11例,比例分别为7.21%,5.77%,5.29%。对APL患者突变分析发现,FLT3-ITD突变率最高,达32.67%。71例APL患者进行突变分析,其中46例检测到基因突变,比例为64.79%,包括32例患者有一种突变,比例为69.57%;11例患者有2种突变,比例为23.91%;3例患者检测到3种突变,比例为6.52%。本研究分析突变对APL患者临床预后影响时发现,相比于FLT3-ITD突变阴性患者,FLT3-ITD突变阳性患者的初诊白细胞计数(P0.001),PML-RARα融合基因S型比例(P0.05),及高危组患者比例(P0.001),均显著增高,5年总体生存明显降低(P=0.014);5年无复发生存率在两组之间无明显差异(P=0.055)。另外,FLT3-TKD,TET2,WT1,NRAS突变对APL患者的临床预后则无明显影响。2、附加染色体异常对APL患者临床特征及预后的影响附加染色体异常组比单纯t(15;17)组男性患者明显增多(50.4%vs.66.7%,P=0.004),两组患者在年龄,初诊白细胞,血红蛋白,血小板计数,融合基因类型,及总体生存时间及无复发时间无明显差别。从附加染色体结构异常分析,+8组,9q-组,,-7/7q-组,+21组,分别与典型t(15;17)组比较,总体生存率及无复发生存率均无明显差异;从附加染色体数量异常分析,伴1种附加染色体异常,2种附加染色体异常,=3种附加染色体异常组,分别与典型t(15;17)组比较,总体生存率及无复发生存率也无明显差异。3、STAT5B-RARα融合基因的克隆及初步功能研究结果运用FISH和RT-PCR等技术检测到6例STAT5B-RARα阳性的APL患者,该组患者对维甲酸/亚砷酸治疗不敏感,预后不佳。以STAT5B-RARα阳性的APL患者c DNA为模板,利用PCR技术扩增出STAT5B-RARα融合基因,构建慢病毒载体质粒LV5-GFP-STAT5B-RARα,采用磷酸钙沉淀法转染U937细胞系,成功建立了稳转细胞株。体外实验结果显示,STAT5B-RARα能够在一定程度上促进U937细胞的增殖。结论1.本中心1208例APL患者主要集中于中青年,男女发病率基本相等。依据遗传学特征,分为1175例典型APL患者,17例RARα变异型APL患者,和16例染色体及融合基因均阴性,但骨髓形态,白血病免疫分型及临床特征均支持该诊断的APL患者。RARα变异型APL患者中,男性患者比例显著高于典型APL患者。染阴融阴组及变异型组患者初诊白细胞均明显高于典型组APL患者。染阴融阴组及RARα变异型APL患者的高危组所占比例均明显高于典型APL患者。APL患者核型分析发现,71.45%的APL患者有单纯t(15;17);18.21%的患者有附加染色体异常。在附加染色体中,其中+8比例为22.60%染色体是最常见的附加染色体异常,其次9q-,7q-,+21也较常见,比例分别为7.21%,5.77%,5.29%。APL患者突变分析发现,FLT3-ITD突变率最高,达32.67%,在APL患者中是预后不良的因素。WT1,FLT3-TKD突变率较高,分别为14.46%,11.11%。FLT3-TKD,TET2,WT1,NRAS突变对APL患者的临床预后则无明显影响。2.伴附加染色体异常对急性早幼粒细胞白血病患者的临床特征及预后无明显影响。3.我们成功构建STAT5B-RARα融合基因慢病毒载体,建立U937稳转细胞株。体外实验结果表明,STAT5B-RARα在一定程度上能够促进U937细胞的增殖。我们将在建立STAT5B-RARα稳转细胞株的基础上,进一步对其致病机制进行深入研究。
【关键词】：急性早幼粒细胞白血病 附加染色体 STAT5B-RARα融合基因
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R733.71
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 引言11-15
• 参考文献12-15
• 第一部分 回顾性分析单中心1208例APL患者的临床及实验室特征15-28
• 病例与方法15-16
• 结果16-25
• 讨论25-27
• 参考文献27-28
• 第二部分 附加染色体异常对APL患者的临床特征及预后的影响28-36
• 病例资料28
• 材料和方法28-30
• 结果30-34
• 讨论34
• 参考文献34-36
• 第三部分 STAT5B-RARα融合基因的克隆及初步功能研究36-52
• 实验方法36-45
• 结果45-49
• 讨论49-50
• 参考文献50-52
• 结论52-53
• 综述53-66
• 参考文献59-66
• 攻读学位期间公开发表的论文66-67
• 中英文缩略词汇表67-68
• 致谢68-69

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本文编号：768769