索拉非尼联合5-氮杂-2’-脱氧胞苷调控肝癌细胞株DNMT3B基因表达的研究

发布时间：2017-09-02 03:01

  本文关键词：索拉非尼联合5-氮杂-2’-脱氧胞苷调控肝癌细胞株DNMT3B基因表达的研究

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【摘要】：目的:(1)研究索拉非尼联合5-氮杂-2’-脱氧胞苷对人肝癌细胞株的作用效果及其调控DNMT3B基因表达可能分子机制;(2)探讨索拉非尼调控mi R-143、mi R-145对肝癌细胞作用效果及可能分子机制。方法:(1)以人肝癌细胞株BEL-7404、SMMC-7721为研究对象,单药及联合用药后,采用噻唑蓝比色法、创伤愈合实验、Transwell和流式细胞术方法分别检测对人肝癌细胞株增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响;(2)采用蛋白印迹技术检测肝癌细胞株中DNMT3B、p-Akt-Ser473和ERK蛋白表达情况;(3)采用实时荧光定量PCR技术检测肝癌细胞株中DNMT3B基因m RNA表达情况;(4)以人肝癌细胞株BEL-7404和永生化肝细胞L02为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术检测肝癌细胞株BEL-7404和永生化肝细胞L02 mi R-143、mi R-145表达情况,检测索拉非尼作用BEL-7404细胞后mi R-143、mi R-145表达变化;(5)通过脂质体瞬时转染mi RNAmimics到BEL-7404细胞后,检测细胞生物学性状变化情况,研究相应的mi R-143、mi R-145在肝癌的作用机制。并通过蛋白质印迹技术检测DNMT3B蛋白表达情况。结果:(1)索拉非尼联合5-氮杂-2’-脱氧胞苷作用肝癌细胞后能够明显的抑制细胞增殖并呈剂量依赖关系,其联用起到协同作用;能够有抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力;能促进癌细胞的凋亡。(2)单药及联合用药能减少DNMT3B和p-Akt-Ser473蛋白表达,对ERK蛋白表达无影响。(3)单药及联合用药后能够下调癌细胞DNMT3B基因m RNA表达。(4)肝癌BEL-7404细胞与永生化肝L02相比较,mi R-143、mi R-145;索拉非尼作用肝癌细胞后mi R-143和mi R-145表达升高。(5)转染mi RNA mimics到肝癌细胞后能抑制细胞增殖和侵袭能力,促进凋亡,索拉非尼通过上调mi R-143和mi R-145的表达从而下调DNMT3B蛋白表达进而,并通过此途径发挥抗肿瘤作用。结论:1.索拉非尼联用5-Aza-CdR能起到协同抗肿瘤作用,并可能通过抑制PI3K/Akt信号通路来减少DNMT3B的表达。2.mi R-143和mi R-145在肝癌中发挥类似抑癌基因的作用3.索拉非尼通过上调肝癌BEL-7404细胞中mi R-143和mi R-145的表达进而下调靶蛋白DNMT3B的表达进而发挥抗肿瘤作用。
【关键词】：索拉非尼 5-氮杂-2’-脱氧胞苷 DNMT3B 肝癌 miR-143 miR-145
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-12
• 材料与仪器12-15
• 试验方法15-28
• 实验结果28-41
• 讨论41-45
• 结论45-46
• 参考文献46-52
• 致谢52-53
• 附录A：主要英文缩略词53-54
• 附录B：常用试剂配制54-56
• 附录C：个人简介56-57
• 附录D：综述57-68
• 参考文献64-68

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 李刚;付成;;蛋白激酶C在肾细胞癌多药耐药中的作用[J];肿瘤基础与临床;2009年02期

2 李倩玉;王一;王涛;吴孟超;;9种耐药相关蛋白在肝癌中的表达及其临床意义[J];中华实验外科杂志;2006年03期

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本文编号：775958