线粒体D环单核苷酸基因多态与恶性纤维组织细胞瘤预后之间的关系研究

发布时间：2017-09-02 07:21

  本文关键词：线粒体D环单核苷酸基因多态与恶性纤维组织细胞瘤预后之间的关系研究

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【摘要】：目的:线粒体单核苷酸基因多态被证实与多种肿瘤的发生发展有重要关系。在之前的研究中,我们证实了线粒体单核苷酸基因多态与恶性纤维组织细胞瘤发病率之间存在统计学相关性,在本实验中,我们将进一步研究和探讨线粒体单核苷酸基因多态与恶性纤维组织细胞瘤临床特征与预后之间的关系,从而为恶性纤维组织细胞瘤患者筛查出不良预后人群并为该肿瘤的治疗提供一种方法。方法:收集2002年到2011年间在河北医科大学第四医院接受治疗的恶性纤维组织细胞瘤患者的血液标本80例,同时收集自100个健康对照组的血液标本。对实验对象进行相关临床信息采集,完善临床资料。对患者进行随访,随访期限为3年。应用GENMED全血线粒体DNA萃取试剂盒提取恶性纤维组织细胞瘤患者及健康人的线粒体DNA,提取后将其置于-20℃恒温冰箱中保存备用。对目的基因进行PCR扩增和序列分析:PCR扩增的上游引物序列是5'-CCCCATGCTTACAAGCAAGT-3'(核苷酸16190-16209)下游引物是5'-GCTTTGAGGAGGT AAGCTAC-3'(核苷酸602-583)。PCR反应体系约50u L(10×Buffer 5 u L,2.5mmol/L Mg Cl2 2u L,10mmol/L d NTP 2u L,10mmol/L引物各2u L,Taq酶3-5u L),血浆DNA提取物6u L作为模板DNA,阳性对照模板和健康组模板为2u L,约2ng。PCR的条件是:95℃下预变性2分钟,然后95℃下变性30s,55℃下退火30s,72℃下延伸1分钟,接着在72℃下延伸5分钟,后三个步骤反复进行35个循环。扩增结束后对PCR产物进行电泳提纯,应用循环测序法对合格的PCR扩增产物进行测通测序。计算其3年生存率,同时分析与患者临床特征的关系。参照基因数据库AC_000021号数据,从已经完成的恶性纤维组织细胞瘤患者线粒体D环区的982bp序列中找出单核苷酸多态性位点,对不同单核苷酸基因多态位点与患者3年生存率的关系进行分析.用Kaplan Meier的统计方法对实验数据进行统计并对数据进行log-rank校正来生成患者的生存曲线。用Cox proportional hazards model对实验数据进行多因素分析。所有的数据处理均用SPSS13.0软件进行统计分析,P0.05被认为是有统计学意义。结果:我们用Kaplan Meier的统计方法对这些患者的临床特点随访数据进行分析,并用log-rank进行校正。这些临床体征包括:性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤位置。年龄、肿瘤大小、有无淋巴结转移与恶性纤维组织细胞瘤患者术后的预后存在统计学相关性,P值分别是0.017,0.001,0.015。在恶性纤维组织细胞瘤组以及对照组的长为982bp的线粒体D环区域我们共发现71个线粒体单核苷酸基因多态位点,其中的28个位点在患者或者对照组中的频率≥5%,可以用来分析患者预后情况。5个线粒体基因单核苷酸基因多态位点与恶性纤维组织细胞瘤预后之间存在统计学相关性,这5个线粒体基因多态位点分别是152,16390,16290,16304,523-524。拥有单核苷酸基因多态位点152C,16390A,16290T的患者被证实术后3年生存时间较拥有152T,16390G,16290C的患者术后生存时间短。恰恰相反,拥有单核苷酸基因多态位点16304C,523和524位点的AC碱基缺失的患者术后3年生存时间较拥有16304T以及523-524AC位点患者生存时间长。相应的,他们的P值分别是0.047,0.016,0.043,0.043,0.029。在对这5个单核苷酸基因多态位点与年龄、肿瘤大小、有无淋巴结转移进行多因素分析后我们证实线粒体单核苷酸基因多态位点16290上的C→T突变、16390位置上的G→A突变以及淋巴结转移状况、肿瘤直径大小是评估恶性纤维组织细胞瘤患者术后生存时间的独立预测因素。结论:线粒体D环区域是一个高度变异的多态性区域,该区域与多种肿瘤的发生发展有着密切的关系。线粒体单核苷酸基因多态与恶性纤维组织细胞瘤患者预后之间存在着统计学相关性。5个线粒体基因单核苷酸基因多态位点与恶性纤维组织细胞瘤预后之间存在统计学相关性,这5个线粒体基因多态位点分别是152,16390,16290,16304,523-524。2个线粒体单核苷酸基因多态位点是评估恶性纤维组织细胞瘤患者预后的独立影响因素,这两个位点是16290,16390。线粒体基因D环区单核苷酸基因多态可以作为预测肿瘤发病率以及肿瘤预后的生物标记物。同时为该肿瘤的早发现、早诊断、早期治疗提供新的理论依据。
【关键词】：线粒体基因 线粒体D环 单核苷酸基因多态 恶性纤维组织细胞瘤 预后
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R730.26
【目录】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-10
• 英文缩写10-11
• 前言11-12
• 材料与方法12-17
• 结果17-21
• 附图21-22
• 附表22-24
• 讨论24-27
• 结论27
• 参考文献27-33
• 综述 线粒体单核苷酸基因多态与肿瘤的发生发展以及预后的研究进展33-45
• 参考文献41-45
• 致谢45-46
• 个人简历46

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