逆基因NANOGP8的表达与人胃癌SGC-7901细胞生物学特性相关

发布时间：2017-09-05 21:29

  本文关键词：逆基因NANOGP8的表达与人胃癌SGC-7901细胞生物学特性相关

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【摘要】：目的：构建pEGEP-N1-NANOGP8真核表达载体及针对人NANOGP8基因的干扰质粒pshRNA-NANOGP8;探讨重组质粒pEGFP-N1-NANOGP8及pshRNA-NANOGP8对人胃癌细胞SGC-7901的增殖、凋亡、周期、迁移、侵袭的影响,为更深入研究逆基因NANOGP8在胃癌发生发展中的具体作用机制奠定基础。方法：(1)从人卵巢癌细胞SKOV-3中提取总RNA,通过RT-PCR获得NANOGP8基因,将其克隆到pEGFP-N1质粒上,构建pEGFP-NI-NANOGP8真核表达载体,将构建好的重组质粒进行双酶切及测序鉴定；(2)构建针对人NANOGP8基因的干扰质粒pshRNA-NANOGP8及阴性对照质粒pshRNA-negative,将构建好的两个重组质粒进行酶切、测序鉴定；(3)将测序正确的重组质粒在脂质体2000的介导下转染入人胃癌SGC-7901细胞,通过荧光显微镜、逆转录PCR及Western blot法检测其表达情况；通过CCK-8方法检测SGC-7901胃癌细胞增殖情况；利用流式细胞仪分析胃癌细胞周期变化及凋亡情况；TranswellTM实验验证SGC-7901细胞迁移以及侵袭能力的改变情况。结果：(1)通过RT-PCR成功获得NANOGP8基因片段,经酶切、测序验证成功构建出PEGEP-N1-NANOGP8重组质粒； (2)经酶切、测序验证成功构建出pshRNA-NANOGP8及pshRNA-negative重组质粒；(3)重组质粒转染48小时后的胃癌SGC-7901细胞能够通过荧光显微镜观察到荧光蛋白的表达；逆转录PCR及Western blot结果显示PEGEP-N1-NANOGP8转染组高表达NANOGP8,并能检测到NANOGP8-GFP融合蛋白的表达,而pshRNA-NANOGP8转染组NANOGP8低表达；NANOGP8高表达组能促进肿瘤细胞增殖,促使细胞进入S期,迁移侵袭能力明显增强。而低表达组细胞增殖受到明显抑制,细胞大量停留在G0/G1期,细胞的侵袭、迁移能力也同样受到抑制。结论：逆基因NANOGP8的转录表达,与胃癌的增殖、细胞周期、凋亡、迁移、侵袭有密切的关系。
【关键词】：逆基因 NANOGP8 胃癌 增殖 凋亡 侵袭
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-11
• 第一部分 pEGFP-N1-NANOGP8真核表达载体的构建11-22
• 1 材料和方法11-19
• 2 实验结果19-21
• 3 讨论21-22
• 第二部分 NANOGP8短发夹RNA的构建22-28
• 1 材料和方法22-25
• 2 结果25-27
• 3 讨论27-28
• 第三部分 重组质粒pEGFP-NI-NANOGP8及pshRNA-NANOGP8在胃癌细胞SGC-7901中的表达及其对胃癌细胞生物学特性的影响28-42
• 1 材料和方法28-35
• 2 实验结果35-41
• 3 讨论41-42
• 全文总结42-43
• 参考文献43-45
• 文献综述45-53
• 参考文献49-53
• 致谢53-54
• 攻读硕士学位期间发表的论文54

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本文编号：800209