肌醇六磷酸与肌醇合用对肿瘤细胞的增殖抑制作用的研究

发布时间：2017-09-11 19:40

  本文关键词：肌醇六磷酸与肌醇合用对肿瘤细胞的增殖抑制作用的研究

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【摘要】：目的:通过细胞增殖抑制实验和建立裸鼠移植瘤动物模型,观察肌醇六磷酸(IP6)和肌醇(Ins)合用对多种癌细胞增殖的抑制效果及对裸鼠移植瘤生长的抑制作用,探讨IP6与Ins合用能否增强对肿瘤细胞生长的抑制作用。方法:取培养至对数生长期的人肝癌细胞Hep G2、人结肠癌细胞HT-29、人胃癌细胞7901、人乳癌细胞MCF-7和人肺癌细胞A549,接种于96孔板中,分别加入0.5、1.0、2.0、4.0mmol/L的IP6、Ins及IP6+Ins(1:1,V/V)混合液,另设对照组(不加药物)。应用四基偶氮噻唑蓝实验(MTT法)测定不同浓度的IP6和Ins合用作用不同癌细胞48h的抑制率,计算IP6和Ins合用作用于不同癌细胞的半数抑制浓度IC50;根据实验结果选取两种对IP6和Ins合用更为敏感的癌细胞,将IP6和Ins以不同比例(9:1、3:1、1:1、1:3、1:9,V/V)作用于两种癌细胞,计算抑制率。根据细胞实验结果选取对IP6和Ins合用最敏感的癌细胞,培养至对数生长期后,在无菌条件下,于裸鼠右前肢的背部采用皮下注射细胞悬液0.2 ml(含2×106个细胞),建立裸鼠人移植瘤模型。待接种小鼠均出现明显结节,其径长均大于5mm时,按移植瘤体积随机分为4组,每组10只,即IP6组、Ins组、IP6+Ins组、生理盐水组。IP6组、Ins组、IP6+Ins组的药物浓度均为15mmol/kg,IP6和Ins以(1:1,V/V)合用,阴性对照组每日0.1ml/10g生理盐水,药物注射采用腹腔注射。每天称重一次。20天后将所有裸鼠处死,取实验相关的肿瘤、肝、肾、血液等样本。经HE染色后,使用光学显微镜观察肿瘤组织的病理学变化;应用免疫组织化学法测定PCNA、Cyclin D1、CDK4蛋白的表达;应用Rt-PCR法测定Rbm RNA、E2F-1m RNA的表达。结果:不同浓度的IP6与Ins合用对5种癌细胞均能产生显著的抑制作用(F=8.253~15.292,t=6.871~8.537,P0.05)。对Hep G2、HT-29、7901、MCF-7、A549细胞的最高抑制率分别为68.82%、63.63%、37.07%、39.73%、39.26%;不同浓度的IP6和Ins合用没有显著提高对HT-29、7901、MCF-7、A549细胞的抑制作用(F=1.195~2.408,t=0.978~2.133,P0.05),但在4mmol/L时,合用组对Hep G2细胞抑制效果显著高于IP6组和Ins组(t=7.462,P0.05)。IP6和Ins合用作用于5种癌细胞时,Hep G2和HT-29细胞的IC50值最低,但IP6和Ins合用未能显著降低各癌细胞的IC50值。将IP6和Ins以不同比例合用发现,IP6和Ins合用的比例对Hep G2和HT-29细胞的抑制效果没有影响。通过实验前后测量各组裸鼠体重的变化发现,腹腔注射IP6、Ins及两种药物的混合液对裸鼠的体重变化没有影响。裸鼠处死后,无菌剥取肿瘤并对肿瘤进行称重和测量体积,发现各实验组的肿瘤均小于对照组,其中IP6与Ins合用组肿瘤最小,但差异无统计学意义(P0.05)。HE染色后镜下观察发现,各组均出现不同程度的肿瘤形态学特征,如细胞大小不一,形状不规则等。免疫组化结果显示,与对照组比较,各实验组PCNA蛋白的表达呈不同程度的降低,IP6与Ins的合用组表达水平最低,但差异无显著性(P0.05)。与对照组比较,IP6组、Ins组、合用组能显著降低Cyclin D1、CDK4蛋白的表达(P0.05);与IP6组、Ins组比较,合用组能显著降低CDK4蛋白表达水平,对Cyclin D1蛋白表达的抑制无显著增强作用。Rt-PCR结果显示,IP6组、Ins组及合用组的Rb m RNA的表达水平相比对照组明显升高(P0.05),IP6、两者合用对E2F-1 m RNA的表达水平没有影响,Ins组E2F-1 m RNA的表达相比对照组有所下降(P0.05);与IP6组、Ins组比较,合用组对Rb m RNA、E2F-1 m RNA的表达没有影响(P0.05)。结论:IP6和Ins合用对五种癌细胞的增殖均有显著抑制作用,与IP6、Ins单独作用比较,IP6与Ins合用没有显著提高对HT-29、7901、MCF-7、A549癌细胞增殖的抑制效果,但IP6和Ins以4m M合用能够提高对Hep G2细胞的抑制效果。IP6和Ins的混合比例对五种癌细胞的增殖抑制作用没有显著影响。IP6与Ins合用没有显著增强对裸鼠移植瘤的抑制作用,但与对照组比较,IP6与Ins合用能显著下调Cyclin D1和CDK4蛋白的表达、上调Rbm RNA的表达。
【关键词】：肌醇六磷酸 肌醇 癌细胞 裸鼠 合用
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R73-36
【目录】：

• 摘要2-4
• Abstract4-7
• 引言7-8
• 第一章 肌醇六磷酸与肌醇合用对不同癌细胞增殖活性的影响8-15
• 1 材料与方法8-10
• 1.1 实验细胞8
• 1.2 主要试剂8
• 1.3 主要仪器8
• 1.4 IP6、Ins溶液的配制及肿瘤细胞的培养8-9
• 1.5 细胞分组和处理9
• 1.6 MTT 试验检测 IP6、Ins 及两者合用对不同癌细胞的抑制作用9
• 1.7 数据处理9-10
• 2 结果10-14
• 2.1 IP6与Ins合用对多种癌细胞的抑制作用10-12
• 2.2 IP6、Ins及两者合用对不同癌细胞IC50的比较12
• 2.3 IP6和Ins以不同比例合用对Hep G2和HT-29 细胞的抑制作用12-14
• 3 讨论14-15
• 第二章 肌醇六磷酸和肌醇合用对裸鼠人肝癌移植瘤增殖的影响15-30
• 1 材料与方法15-21
• 1.1 材料15-16
• 1.1.1 实验细胞15
• 1.1.2 实验裸鼠15-16
• 1.2 实验方法16
• 1.3 测定指标和方法16-20
• 1.4 统计学处理20-21
• 2 结果21-27
• 2.1 裸鼠的一般状况观察21
• 2.2 IP6、Ins及两者合用对裸鼠人肝癌移植瘤生长的影响21-22
• 2.3 裸鼠人肝癌移植瘤的病理检查22-23
• 2.4 裸鼠人肝癌移植瘤PCNA蛋白的表达23-24
• 2.5 裸鼠人肝癌移植瘤Cyclin D1蛋白的表达24-25
• 2.6 裸鼠人肝癌移植瘤CDK4蛋白的表达25-26
• 2.7 裸鼠移植瘤Rb、E2F-1 m RNA的表达26-27
• 3 讨论27-30
• 结论30-31
• 参考文献31-34
• 综述34-42
• 综述参考文献40-42
• 攻读学位期间的研究成果42-43
• 致谢43-44

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：832690