Ad-ING4-P53联合顺铂对下咽癌FADU抑瘤增效作用的体内研究

发布时间：2017-09-14 12:21

  本文关键词：Ad-ING4-P53联合顺铂对下咽癌FADU抑瘤增效作用的体内研究

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【摘要】：目的下咽癌在耳鼻喉头颈外科中,是较为常见的恶性肿瘤,约占0.8%-1.5%,因肿瘤细胞的分化水平不高,因而多以中、低分化鳞状细胞癌为主,由于肿瘤生长位置较深,不容易被发现,初始表现不规范,约有50%病人第一次就诊时就已经有颈部淋巴结的转移。当今,下咽癌的治疗主要是以手术加术后放化疗为首选,但是下咽癌具有显著的耐药性和转移特性,因此目前对下咽癌的预后很差。纵然最近几年来对下咽癌的治疗方法一直在改进,其5年生存率依旧较低。我们的实验通过检测腺病毒(Ad)携带生长抑制因子4(ING4)和抑癌基因P53的双基因共表达(Ad-ING4-P53)联合顺铂(Cisplatin,DDP)对人下咽癌FADU细胞株移植瘤发生发展和凋亡的作用,初步研究Ad-ING4-P53对下咽癌细胞DDP化疗敏感性的影响及其作用机制,探讨Ad-ING4-P53作为潜在加强对于抗肿瘤化疗药物敏感性的基因治疗载体的可行性。方法:培养QBI-293A细胞,进行重组基因的转染,扩增。在细胞培养瓶内培养下咽癌FADU细胞,建立裸鼠人下咽癌FADU细胞系移植瘤模型。肿瘤长出后达到一定体积时,任意5只分一组,分别给予干预,每次干预之前测量肿瘤体积,处死动物后取出完整肿瘤组织并测其重量,最后按照肿瘤重量通过公式计算抑瘤率,观察Ad-ING4-P53、DDP对裸鼠人下咽癌FADU细胞移植瘤的抑瘤作用;应用RT-PCR法检测裸鼠移植瘤组织内ING4、P53、Bax、Bcl-2的基因表达情况;用HE染色观察肿瘤细胞生长和凋亡情况以及药物对肝肾细胞的毒性作用;通过TUNEL法观察移植瘤细胞中早期凋亡的情况;应用免疫组化检测ING4、P53以及凋亡相关基因Bax、Bcl-2在肿瘤组织细胞中的表达情况。结果:通过用重组基因感染QBI-293A细胞,重组基因成功转染进入细胞,进行扩增。体内瘤体生长曲线显示:Ad-ING4-P53+DDP对裸鼠人下咽癌FADU细胞移植瘤具有非常显著的抑制肿瘤发生发展的作用,并且优于单独DDP化疗和单独Ad-ING4-P53治疗(P0.05),并且两者具有抑瘤增效的协同作用(Q=1.19)。RT-PCR和免疫组化结果显示:Ad-ING4-P53联合DDP能显著上调裸鼠人下咽癌细胞FADU移植瘤内ING4、P53、Bax并下调Bcl-2的表达,且较单独DDP组和单独Ad-ING4-P53组作用更加显著(P0.05)。HE染色和TUNEL结果显示:Ad-ING4-P53联合DDP对裸鼠人下咽癌FADU移植瘤具有明显的促凋亡作用,且较单独组更加明显(P0.05)。HE染色结果显示:Ad-GFP组、单独Ad-ING4-P53组和Ad-ING4-P53联合DDP组对裸鼠肝脏有明显毒性作用,对肾脏无明显毒性作用。结论:1.Ad-ING4-P53能增强顺铂对下咽癌FADU细胞移植瘤的杀伤作用。2.Ad-ING4-P53联合顺铂能诱导下咽癌FADU细胞移植瘤细胞的凋亡。凋亡可能与启动关键凋亡蛋白Bax并抑制Bcl-2有关。3.Ad-GFP组、Ad-ING4-P53组和Ad-ING4-P53组联合顺铂组对裸鼠肝脏有明显毒性作用,对肾脏无明显毒性作用。
【关键词】：下咽癌 基因治疗 化疗增敏
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.63
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-12
• 材料和方法12-23
• 1 材料与仪器12-14
• 2 实验方法14-22
• 3 统计学方法22-23
• 结果23-31
• 讨论31-35
• 结论35-36
• 参考文献36-41
• 附录41-53
• 附录A 中英文对照41-42
• 附录B 溶液配制42-44
• 附录C 致谢44-45
• 附录D 已发表论文45-46
• 附录E 综述46-53
• 参考文献49-53

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本文编号：849987