hTERT调控Gli1的表达对胃癌侵袭迁移的影响及其分子机制研究

发布时间：2017-09-14 15:23

  本文关键词：hTERT调控Gli1的表达对胃癌侵袭迁移的影响及其分子机制研究

  更多相关文章： Hedgehog通路 Gli1 人端粒酶逆转录酶 胃癌 转移

【摘要】：研究背景胃癌是全世界范围内恶性肿瘤导致死亡的原因之一。2012年Global Cancer Statistic的最新统计数据显示,胃癌每年的预计的新发病例男性约为631300例,女性约为320300例,而胃癌每年预计的死亡病例男性约为469000例,女性约为254100例[1,2]。尽管现代的诊疗技术对胃癌的诊断,治疗和预后有一定的提高,但由于胃癌的转移发生率较高,因此胃癌的预后仍然很差,5年生存率在所有癌症中仍然较低[3]。进化保守的Hedgehog信号通路在早期胚胎的发育,成年组织稳态的维持以及损损伤修复中都发挥着十分关键的作用[4-8]。Hedgehog信号通路的异常与多种肿瘤的发生相关,这其中包括成神经管细胞瘤,横纹肌肉瘤,黑色素瘤,基底细胞癌,乳腺癌,肺癌,肝癌,前列腺癌,胰腺癌与胃癌[9,10]。Gli1是Hedgehog信号通路中重要的转录因子,能够调控Hh通路下游重要的靶基因[11-15]。本课题研究小组前期研究发现,胃癌组织中Gli1显著高表达,并且与淋巴结的转移和远端转移成正相关,但其具体的细胞学机制并不清楚。另外还发现人端粒酶逆转录酶(Human telomerase reverse transcriptase,h TERT)在胃癌组织中也高表达,更重要的是,我们发现发现h TERT与Gli1在胃癌组织中的表达两者之间存在明显的正相关,但两者之间具体的调控关系并不清楚。目的本课题旨在探究Hedghog信号通路重要的转录因子Gli1在胃癌中发生发展中的作用机制,观察hTERT对Gli1表达调控的影响,并进一步探讨h TERT促进胃癌细胞侵袭转移的分子机制,为基于h TERT的胃癌治疗提供理论依据。方法1.构建siRNA干扰胃癌细胞株SGC-7901细胞Gli的表达,q RT-PCR和western blot检测Gli1 m RNA和蛋白的表达水平。划痕实验和Transwell实验检测共转染hTERT与siRNA后SGC-7901细胞的侵袭迁移能力。2.在胃癌细胞株SGC-7901中过表达h TERT,检测h TERT和Gli1的mRNA和蛋白表达水平。构建含有Gli1启动子序列的荧光素酶报告基因载体。共转染h TERT载体和PGL3-basic-Gli1荧光素酶报告基因载体,检测转染后SGC-7901细胞的相对荧光素酶活性。结果1.转染si RNA-Gli降低了Gli mRNA和蛋白表达水平。2.转染si RNA-Gli显著降低了过表达hTERT胃癌细胞株SGC-7901细胞在划痕实验中的迁移速度。3.转染si RNA-Gli显著降低了过表达hTERT胃癌细胞株SGC-7901细胞在Transwell实验中的穿膜数目。4.过表达hTERT上调了胃癌细胞株SGC-7901细胞中hTERT和Gli1的mRNA和蛋白表达水平。5.过表达h TERT增强Gli1启动子荧光素酶的相对活性。结论1.hTERT可通过促进Gli1的表达并进而促进胃癌细胞的侵袭与迁移。2.hTERT能够正向调控Gli1的表达,其调控方式是直接靶向作用于Gli1的启动子区域。
【关键词】：Hedgehog通路 Gli1 人端粒酶逆转录酶 胃癌 转移
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 缩略词表4-6
• Abstract6-8
• 摘要8-10
• 第一章 前言10-12
• 第二章 hTERT调控Gli1对胃癌细胞侵袭迁移的影响12-23
• 2.1 引言12
• 2.2 材料和方法12-18
• 2.3 实验结果18-22
• 2.4 讨论22-23
• 第三章 hTERT在胃癌中调控Gli1的分子机制研究23-39
• 3.1 引言23
• 3.2 材料与方法23-34
• 3.3 实验结果34-37
• 3.4 讨论37-39
• 全文总结39-40
• 参考文献40-45
• 文献综述 Hedgehog-Gli信号通路与胃癌的研究进展45-55
• 参考文献50-55
• 附件55-56
• 攻读硕士期间发表的论文56-57
• 致谢57

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本文编号：850780