人参炔醇对胰腺癌干细胞分化及侵袭转移作用的基础研究

发布时间：2017-09-15 00:22

  本文关键词：人参炔醇对胰腺癌干细胞分化及侵袭转移作用的基础研究

  更多相关文章： 胰腺癌 人参炔醇 胰腺癌干细胞 迁移与侵袭 分化

【摘要】：研究目的近年来,随着在胰腺癌中证实有肿瘤干细胞(CSC)的存在,对胰腺癌复发、侵袭转移形成产生了新的认识和研究方向。中药干预胰腺癌干细胞的研究也越来越多。本研究通过体外探讨人参炔醇(PNN Panaxynol)对胰腺癌干细胞增殖活性的作用,并进一步探讨其对胰腺癌干细胞侵袭转移能力及干性的影响,从而为人参炔醇干预治疗胰腺癌进一步提供有效的理论依据及实验基础。研究方法本研究通过以肿瘤干细胞表面标记分子CD133为筛选标记,从胰腺癌细胞系Panc-1细胞中分离出CD133阳性细胞,在体外通过检测细胞周期及干性相关蛋白Oct4、CD133的表达进一步进行鉴定。然后用人参炔醇干预胰腺癌干细胞,CCK-8实验筛选出最佳作用浓度及时间；进而探讨其对胰腺癌干细胞侵袭转移及体外分化的作用。(1)无血清培养法培养和富集胰腺癌细胞系Panc-1干细胞。采用流式细胞术检测培养的胰腺癌Panc-1细胞的表面标记分子CD133表达情况。(2)采用流式细胞分选术分选及鉴定胰腺癌干细胞；将分选出的细胞培养于无血清的培养基中,适时传代。(3) Western-Blot检测分选出的CD1334+细胞内干性相关蛋白Oct4及CD133的表达情况。(4)流式细胞周期实验观察分选出的CD133+细胞的周期分布情况。(5)采用CCK-8实验观察胰腺癌干细胞经人参炔醇干预后其增殖活性的影响,筛选其最佳作用浓度及时间。(6) Transwell侵袭及迁移实验观察胰腺癌干细胞经人参炔醇干预后其迁移及侵袭能力的影响。(7) Western-Blot检测胰腺癌干细胞经人参炔醇干预后其增殖相关蛋白PCNA及迁移相关蛋白E-Cadherin、N-Cadherin及Vimentin表达的变化。(8)采用流式细胞术检测胰腺癌干细胞经人参炔醇干预后其干细胞表面标记分子CD133的变化。(9) Western-Blot检测胰腺癌干细胞经人参炔醇干预后其干性相关蛋白Oct4及CD133表达的变化。研究结果(1)无血清培养法培养一段时间后,细胞呈球生长,流式细胞术结果表明无血清培养法能够有效的富集CD133表型的胰腺癌细胞。(2)流式细胞分选术分选出的CD133+细胞纯度98%。(3) Western-Blot检测分选出的CD133+细胞内干性相关蛋白Oct4及CD133表达明显高于对照组。(4)流式细胞周期试验显示CD133+细胞大多处于细胞周期静止期(G0/G1期)。(5)CCK-8实验显示人参炔醇可以抑制胰腺癌干细胞的增殖活性并且呈浓度依赖性,且以人参炔醇浓度为80μg/mL作用48h后作用最明显。(6) Transwell实验结果显示人参炔醇可以有效抑制胰腺癌干细胞的迁移及侵袭能力并且呈浓度依赖性,且以其浓度为80μg/mL作用48h后作用最明显。(7) Western-Blot结果显示胰腺癌干细胞经人参炔醇干预后其增殖相关蛋白PCNA表达下调,迁移相关蛋白E-Cadherin表达上调及N-Cadherin、 Vimentin表达下调。(8)流式细胞检测结果显示胰腺癌干细胞经人参炔醇干预后CD133表达减少。(9)Western-Blot结果显示胰腺癌干细胞经人参炔醇干预后其干性相关蛋白Oct4及CD133表达下调。结论(1)本研究使用干细胞表面标记分子CD133成功分选和鉴定胰腺癌干细胞,分选出的CD133+细胞具有明显的干细胞特性。(2)本研究主要在体外证实人参炔醇能够有效的抑制胰腺癌干细胞的迁移及侵袭能力,此作用主要与抑制了胰腺癌干细胞的增殖活性及上皮-间质细胞转化(EMT)有关。(3)本研究主要在体外证实人参炔醇可促进胰腺癌干细胞体外分化、抑制其干性。而这一作用可能与人参炔醇抑制了胰腺癌干细胞EMT过程相关。为胰腺癌的临床治疗提供了有效的实验依据。
【关键词】：胰腺癌 人参炔醇 胰腺癌干细胞 迁移与侵袭 分化
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.9
【目录】：

• 摘要5-7
• abstract7-14
• 第一章 绪论14-20
• 1. 胰腺癌14
• 2. 胰腺癌干细胞14-18
• 2.1 肿瘤干细胞的背景14-15
• 2.2 胰腺癌干细胞的发现15-16
• 2.3 肿瘤干细胞的分选16-17
• 2.4 肿瘤干细胞的鉴定17
• 2.5 胰腺癌干细胞与转移17-18
• 2.6 胰腺癌干细胞相关的信号通路及意义18
• 3. 人参炔醇18-20
• 3.1 人参炔醇的来源18-19
• 3.2 人参炔醇的药理作用19-20
• 第二章 胰腺癌干细胞体外培养分离与鉴定20-33
• 2.1 材料与方法20-22
• 2.1.1 细胞株来源20
• 2.1.2 主要实验仪器和试剂20-21
• 2.1.3 主要试剂制备21-22
• 2.2 实验操作步骤22-27
• 2.2.1 胰腺癌细胞系Panc-1细胞培养22
• 2.2.2 无血清培养法培养和富集胰腺癌干细胞22-23
• 2.2.3 流式细胞仪分选胰腺癌干细胞23-24
• 2.2.4 Western-Blot检测CD133~+细胞Oct4及CD133蛋白的表达24-26
• 2.2.5 流式细胞周期实验步骤26
• 2.2.6 统计学分析26-27
• 2.3 结果27-30
• 2.3.1 无血清培养法培养及富集胰腺癌干细胞27
• 2.3.2 流式细胞术检测结果27-28
• 2.3.3 流式细胞仪分选结果28-29
• 2.3.4 Western-Blot检测结果29
• 2.3.5 流式细胞周期实验结果29-30
• 2.4 讨论30-33
• 第三章 人参炔醇对胰腺癌干细胞增殖及侵袭转移作用研究33-45
• 3.1 材料与方法33-34
• 3.1.1 主要实验仪器和试剂33-34
• 3.1.2 主要试剂制备34
• 3.2 实验操作步骤34-37
• 3.2.1 CCK-8实验观察人参炔醇对胰腺癌干细胞的增殖能力的影响35
• 3.2.2 Transwell迁移实验观察人参炔醇对胰腺癌干细胞迁移的影响35-36
• 3.2.3 Transwell侵袭实验观察人参炔醇对胰腺癌干细胞侵袭的影响36
• 3.2.4 Western Blot检测人参炔醇对胰腺癌干细胞增殖及转移作用36-37
• 3.2.5 统计学分析37
• 3.3 实验结果37-42
• 3.3.1 CCK-8实验结果37-38
• 3.3.2 Transwell迁移实验结果38-39
• 3.3.3 Transwell侵袭实验结果39-40
• 3.3.4 Western Blot检测结果40-42
• 3.4 讨论42-45
• 第四章 人参炔醇对胰腺癌干细胞分化的作用研究45-50
• 4.1 材料与方法45-46
• 4.1.1 主要实验仪器和试剂45-46
• 4.1.2 主要试剂制备(参照3.1.2)46
• 4.2 实验操作步骤46
• 4.2.1 流式检测人参炔醇对胰腺癌干细胞表面标记分子CD133的影响46
• 4.2.2 Western-Blot检测人参炔醇对胰腺癌干细胞Oct4及CD133表达的影响46
• 4.2.3 统计学分析46
• 4.3 实验结果46-48
• 4.3.1 流式细胞术检测结果47
• 4.3.2 Western Blot检测结果47-48
• 4.4 讨论48-50
• 第五章 结论与展望50-51
• (一) 结论50
• (二) 展望50-51
• 参考文献51-58
• 致谢58-59
• 攻读硕士学位期间公开发表的论文59

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王泽剑,陈红专,薛庆生,陆阳;人参炔醇对大鼠原代培养的神经细胞过氧化氢损伤的影响[J];中草药;2005年01期

2 王泽剑,陈红专,陆阳;人参炔醇对神经细胞的营养和保护作用[J];中国药学杂志;2005年14期

3 王泽剑;聂宝明;殷明;陆阳;;人参炔醇对氧应激诱导大鼠海马神经细胞凋亡的影响[J];中国药学杂志;2007年13期

4 段贤春;汪永忠;周安;居靖;夏伦祝;;三七中人参炔醇的提取、分离和鉴定[J];安徽中医学院学报;2008年02期

5 段贤春;夏伦祝;汪永忠;程卉;章俊如;;人参炔醇对氧糖剥夺神经细胞损伤的保护作用[J];中国实验方剂学杂志;2011年16期

6 江娟;李杰;胥秀英;杨宇清;胡杨;;超临界CO_2萃取人参须根中人参炔醇的工艺研究[J];中国药业;2013年03期

7 王泽剑,陆阳,陈红专;人参炔醇对大鼠脑片不同类型损伤的影响[J];上海第二医科大学学报;2003年06期

8 严忠红;杨若林;钮因尧;陆阳;;含人参炔醇的胡萝卜提取物的制备工艺研究[J];上海交通大学学报(医学版);2012年01期

9 戎立保;;三七中人参炔醇的提取、分离和鉴定方法分析[J];内蒙古中医药;2014年26期

10 耿魁魁;段贤春;刘圣;沈爱宗;夏伦祝;;高效液相色谱法测定大鼠生物样品中人参炔醇的方法学考察[J];中药药理与临床;2012年02期

中国重要会议论文全文数据库 前2条

1 韩燕全;段贤春;李毛全;夏伦祝;;防风SFE-CO2萃取物中人参炔醇的分离、纯化及结构鉴定[A];中国成人医药教育论坛[2010（3）][C];2010年

2 蒋丽萍;陆阳;聂宝明;陈红专;;ERK1/2和CREB通路介导人参炔醇对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用[A];第九届全国心血管药理学术会议论文集[C];2007年

中国硕士学位论文全文数据库 前6条

1 黄文斯;人参炔醇抑制胰腺癌干细胞的增殖及自我更新[D];江苏大学;2016年

2 王颖;人参炔醇对胰腺癌干细胞分化及侵袭转移作用的基础研究[D];江苏大学;2016年

3 卢慧敏;人参炔醇对血清刺激大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响[D];江西医学院;2004年

4 李杰;人参须根中人参炔醇的结构确证及对肺癌细胞株A549的诱导分化作用研究[D];重庆理工大学;2011年

5 夏勇;人参炔醇对PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移的抑制作用[D];江西医学院;2005年

6 宋华;4-三异丙基硅基-1,3-丁二炔和新型靶向性树枝状非病毒基因载体的合成研究[D];泸州医学院;2013年

，

本文编号：853218