DAB2IP在前列腺癌中的表达及其对前列腺癌PC3细胞生物学特性影响的研究

发布时间：2017-09-16 20:09

  本文关键词：DAB2IP在前列腺癌中的表达及其对前列腺癌PC3细胞生物学特性影响的研究

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【摘要】：研究背景:DAB2IP目前被认为是一种新型的候选抑癌基因,同时也是Ras-GAP家族成员,其在各系统肿瘤中发现表达广泛缺失,并通过PI3K-Akt等信号通路介导肿瘤细胞增殖、凋亡和转移。多西紫杉醇是前列腺癌一线化疗药物,单独用药疗效亟待提高,本课题拟将DAB2IP与多西紫杉醇结合进行研究,通过构建DAB2IP过表达载体,建立稳定表达DAB2IP的前列腺癌细胞系,探讨其对前列腺癌PC3细胞生物学特性的影响并初步探讨其机制,旨在为前列腺癌的治疗提供新的思路和作用靶点。第一部分DAB2IP在前列腺癌中的表达及其临床意义目的探讨DAB2IP在前列腺癌中的表达及临床意义。方法随机挑选43例已行术后病理诊断前列腺癌的患者,术前所有患者均未行内分泌治疗及放、化疗。从病理科标本库中取出对应患者的组织蜡块,切取每例蜡块标本的癌组织作为实验组,随机切取肿瘤附近正常组织作为对照组。运用免疫组织化学方法检测DAB2IP蛋白的表达情况。结果光镜下观察到DAB2IP蛋白在细胞内的定位主要位于细胞质内,呈棕黄色。在前列腺癌细胞中,位于腺上皮细胞,染色较淡。前列腺癌组织DAB2IP蛋白表达阳性率为25.6%;在癌旁正常前列腺组织中,位于腺上皮细胞,染色较深,前列腺癌附近正常组织中表达阳性率为83.7%。肿瘤组织和正常组织相比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论DAB2IP蛋白在前列腺癌组织较癌旁正常前列腺组织中表达水平明显下调。第二部分DAB2IP慢病毒表达载体构建及稳定转染PC3细胞系的建立目的建立稳定过表达DAB2IP的PC3细胞系,为探讨DAB2IP在体外实验中对前列腺癌细胞的影响提供模型。方法构建DAB2IP慢病毒表达载体,继而转入293FT细胞中行慢病毒包装,利用获得的慢病毒毒液感染人前列腺癌PC3细胞,经过抗性筛选后获目的细胞,提取细胞总蛋白后采用Western Blot法进行载体验证。结果DAB2IP蛋白表达在转染组细胞中明显高于对照组细胞(P0.05)。结论成功构建DAB2IP慢病毒表达载体,并建立稳定转染DAB2IP的前列腺癌PC3细胞系,为体外研究DAB2IP对前列腺癌细胞的增殖、迁移等影响构建模型。第三部分DAB2IP对前列腺癌PC3细胞增殖及迁移能力影响的研究目的探讨DAB2IP对前列腺癌PC3细胞增殖、迁移能力的影响。方法将转染组与对照组PC3细胞按加入多西紫杉醇浓度(10-5、10-6、10-7、10-8 mol/L)各分为四组,每组以不加药组作为空白对照,多西紫杉醇分别作用24h、48h后,运用MTS法检测PC3细胞的增殖活性;将转染组与对照组PC3细胞以多西紫杉醇(10-6 mol/L)作用24h,48h,不加药组作为空白对照,采用划痕试验检测细胞的迁移。结果MTS结果显示:培养24h后,分别检测两组细胞的吸光度(即OD值),转染组前列腺癌PC3细胞OD值为2.06±0.12,对照组前列腺癌PC3细胞OD值为2.44±0.15,二者相比,转染组细胞OD值明显低于空质粒组,差异具有统计学意义(P0.05);多西紫杉醇(浓度10-5mol/L)作用24h后,转染组前列腺癌PC3细胞的增殖抑制率为(32.4±3.0)%,对照组前列腺癌PC3细胞的增殖抑制率为(29.5±4.7)%,二者相比,转染组细胞增殖抑制率明显高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。多西紫杉醇其他浓度(10-6、10-7、10-8 mol/L)作用,转染组细胞增殖抑制率明显高于对照组,差异均具有统计学意义(P0.05);DAB2IP转染后可提高多西紫杉醇对PC3细胞的增殖抑制作用(P0.05),当多西紫杉醇浓度为10-6 mol/L及以上时该抑制作用更为明显(P0.05)。细胞划痕试验结果显示:细胞划痕24h后,转染组细胞迁移率(21.40±3.09)%明显低于对照组(47.31±4.18)%,差异具有统计学意义(P0.05);换用含多西紫杉醇(10-6mol/L)培养液后,转染组细胞迁移率(19.12±1.12)%仍明显低于对照组(25.49±1.96)%,差异具有统计学意义(P0.05)。结论DAB2IP基因转染后可以有效抑制前列腺癌PC3细胞的增殖,提高多西紫杉醇对PC3细胞的化疗作用;DAB2IP基因转染后前列腺癌PC3细胞迁移能力下降。进一步研究DAB2IP对前列腺癌增殖和迁移的分子机制对改善前列腺癌的治疗具有指导意义。
【关键词】：前列腺癌 DAB2IP PC3细胞 慢病毒表达载体
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.25
【目录】：

• 中文摘要3-6
• ABSTRACT6-10
• 前言10-13
• 第一部分 DAB2IP在前列腺癌中的表达及其临床意义13-19
• 实验材料13-14
• 实验方法14-16
• 实验结果16-17
• 讨论17-18
• 结论18-19
• 第二部分DAB2IP慢病毒表达载体构建及稳定转染PC3细胞系的建立19-30
• 实验材料19-22
• 实验方法22-25
• 实验结果25-26
• 讨论26-29
• 结论29-30
• 第三部分DAB2IP对前列腺癌PC3细胞增殖及迁移能力影响的研究30-45
• 实验材料30-32
• 实验方法32-34
• 实验结果34-42
• 讨论42-44
• 结论44-45
• 参考文献45-50
• 中英文缩略词对照表50-51
• 攻读期间取得成果51-52
• 致谢52

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本文编号：865144