CHL1对乳腺癌增殖及侵袭能力的作用研究

发布时间：2017-09-17 21:34

  本文关键词：CHL1对乳腺癌增殖及侵袭能力的作用研究

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【摘要】：目的:检测乳腺癌组织及乳腺癌细胞系中CHL1基因的表达情况,观察改变CHL1基因表达水平对乳腺癌细胞增殖及侵袭能力的作用。方法:选取2012年山东大学附属省立医院的接受手术治疗的30例原发性乳腺癌患者,所选患者均未接受过化疗和放疗。实时荧光定量聚合酶链反应技术(Real-time PCR)检测乳腺癌组织及乳腺癌细胞系CHL1 m RNA表达水平;Western blotting法检测CHL1蛋白表达水平。以正常人乳腺上皮细胞系MCF10A反转录c DNA为模板,PCR扩增CHL1基因c DNA全长,构建CHL1基因重组质粒pc DNA3.1-CHL1。Lipofectamin TM 2000转染pc DNA3.1-CHL1,在MDA-MB-231细胞中过表达CHL1;Lipofectamin TM 2000转染CHL1-si RNA-1及CHL1-si RNA-2,在MCF-7细胞敲降CHL1表达。MTT法和克隆形成实验检测过表达或敲降CHL1表达对乳腺癌细胞增殖能力的影响;Transwell小室实验检测过表达或敲降CHL1表达对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。构建靶向CHL1的sh RNA慢病毒重组质粒,sh RNA-CHL1慢病毒感染MCF-7细胞株,稳定敲降CHL1表达,免疫缺陷小鼠皮下接种,观察CHL1降表达对乳腺癌细胞免疫缺陷小鼠皮下移植瘤增殖能力的影响。结果:1.与癌旁正常组织相比,乳腺癌组织中CHL1 m RNA及蛋白水平降低,CHL1表达水平与乳腺癌的组织学分级负相关。2.与正常乳腺上皮细胞MCF10A相比,乳腺癌细胞MCF-7,MDA-MB-231,MDA-MB-435,T47D细胞中CHL1 m RNA及蛋白水平降低,其中MDA-MB-231表达最低,MCF-7表达相对较高。3.与对照组相比,过表达CHL1明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖及克隆形成能力,敲降CHL1表达,MCF-7细胞增殖及克隆形成能力明显提高。4.与对照组相比,过表达CHL1明显抑制MDA-MB-231侵袭能力;敲降CHL1表达,MCF-7细胞侵袭能力明显增强(P0.05)。5.与对照组相比,稳定敲降CHL1表达可明显抑制MCF-7免疫缺陷小鼠皮下移植瘤的增殖(P0.05)。结论:乳腺癌组织及细胞中CHL1的表达水平普遍降低,与乳腺癌组织学分级成负相关,CHL1在抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭中发挥重要作用。
【关键词】：CHL1 乳腺癌 增殖 侵袭
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-11
• 前言11-14
• 研究现状、成果11-12
• 研究目的、方法12-14
• 一、对象与方法14-33
• 1.1 材料与仪器14-15
• 1.1.1 细胞系14
• 1.1.2 主要实验试剂14-15
• 1.1.3 主要仪器15
• 1.2 试剂配制15-16
• 1.3 实验方法16-33
• 1.3.1 细胞培养16-18
• 1.3.2 组织标本采集18-19
• 1.3.3 Real-time PCR检测乳腺癌组织及细胞中CHL1 mRNA表达19-21
• 1.3.4 Western blot检测乳腺癌组织及细胞中CHL1蛋白表达21-25
• 1.3.5 脂质体法转染质粒25-28
• 1.3.6 慢病毒法构建稳定敲降CHL1乳腺癌细胞株28-29
• 1.3.7 MTT法检测细胞增殖能力29-30
• 1.3.8 软琼脂克隆形成实验检测细胞克隆形成能力30-31
• 1.3.9 Transwell小室实验检测细胞侵袭能力31
• 1.3.10 免疫缺陷小鼠皮下移植瘤增殖实验31-32
• 1.3.11 统计方法32-33
• 二、结果33-40
• 2.1 CHL1基因在乳腺癌组织及细胞株中低表达33-34
• 2.2 过表达CHL1对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及侵袭能力的影响34-36
• 2.3 敲降CHL1对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及侵袭能力的影响36-37
• 2.4 CHL1降表达对MCF-7 免疫缺陷小鼠皮下移植瘤增殖能力的影响37-40
• 讨论40-44
• 结论44-45
• 参考文献45-49
• 发表论文和参加科研情况说明49-50
• 综述 CHL1基因研究进展50-58
• 综述参考文献54-58
• 致谢58

【共引文献】

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本文编号：871487