Id1基因对人骨肉瘤细胞MG63恶性逆转向成骨分化的影响及作用机制
本文关键词：Id1基因对人骨肉瘤细胞MG63恶性逆转向成骨分化的影响及作用机制
更多相关文章： 骨肉瘤 分化抑制因子 增殖 迁移 分化 骨肉瘤 分化抑制因子 机制
【摘要】：第一部分Id1基因对人骨肉瘤细胞MG63恶性逆转向成骨分化的影响目的探讨分析分化抑制因子1(Id1)基因在h MSCs、恶性程度不同的骨肉瘤细胞株143b、MG63、TE85以及人成骨细胞h FOB 1.19中的表达情况,并在MG63细胞中研究Id1基因过表达和沉默对细胞增殖、迁移、侵袭以及细胞周期等恶性表型和成骨分化的影响。方法(1)应用RT-PCR技术检测Id1基因在人h MSCs、恶性程度不同的骨肉瘤细胞株143b、MG63、TE85以及人成骨细胞h FOB 1.19中的表达情况;(2)通过重组腺病毒技术调控骨肉瘤细胞MG63中Id1的表达水平,应用RT-PCR和Western Blot技术分别在m RNA和蛋白水平确定调控效果;(3)分别应用CCK8实验、细胞划痕实验和Transwell实验检测调控MG63细胞中Id1表达水平后细胞增殖能力、迁移能力和侵袭能力等恶性表型的变化;(4)通过流式细胞术检测Id1表达水平调控后MG63细胞周期的变化;(5)应用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)读数法检测调控MG63细胞中Id1表达水平后细胞成骨分化早期指标ALP的活力变化。结果(1)Id1在h MSCs中表达较高,在三种恶性程度不同的骨肉瘤细胞株中的表达量较高且表达量与恶性程度呈现正相关,在成骨细胞中表达最低;(2)Ad Id1重组腺病毒可以使MG63细胞中的Id1表达量增高,Adsi Id1重组腺病毒可以使MG63细胞中的Id1表达量降低(P㩳0.05);(3)Id1过表达后,MG63细胞的增殖能力、迁移能力、侵袭能力等恶性表型均增强,Id1表达量下调后则逆转MG63细胞的恶性表型;(4)Id1过表达后,G1期细胞比例降低,Id1表达量下调后,G1期细胞比例增高(P㩳0.05);(5)Id1表达量下调后,正常成骨分化的早期指标碱性磷酸酶(ALP)表达量增高(P㩳0.05);结论Id1基因在具有多向分化潜能的h MSCs中表达较高,在分化成熟的成骨细胞中表达较低,在三种骨肉瘤细胞中的表达量较高且表达量与恶性程度呈正相关;Id1过表达后MG63细胞的增殖能力、迁移能力和侵袭能力等恶性表型均增强,且处于G1期的细胞比例降低,抑制Id1基因表达可以促使骨肉瘤细胞MG63的增殖能力、迁移能力和侵袭能力等恶性表型均减弱,处于G1期的细胞比例增高,正常成骨分化的早期指标碱性磷酸酶(ALP)表达量增高。第二部分Id1基因对人骨肉瘤细胞MG63恶性逆转向成骨分化的作用机制目的探究分化抑制因子1(Id1)基因对人骨肉瘤细胞MG63恶性逆转向成骨分化的作用机制,为骨肉瘤的基因治疗寻找关键靶点,以期通过分子水平干预实现骨肉瘤的分化治疗。方法(1)通过重组腺病毒技术调控骨肉瘤细胞MG63中Id1的表达水平,应用Western Blot技术在蛋白水平确定调控效果;(2)通过Western Blot技术在蛋白水平检测调控Id1基因的表达后相关蛋白表达的变化。结果(1)Adsi Id1重组腺病毒可以使MG63细胞中的Id1蛋白表达量明显低于RFP处理组和blank组(P㩳0.05);(2)Id1表达量下调后,原癌基因c-myc蛋白表达量明显低于RFP处理组和blank组(P㩳0.05);(3)Id1表达量下调后,侵袭相关的S100A4蛋白和TIMP1蛋白的表达量均明显低于RFP处理组和blank组(P㩳0.05);(4)Id1表达量下调后,细胞周期相关Cyclin D1蛋白和P27蛋白的表达量均明显低于RFP处理组和blank组(P㩳0.05);(5)Id1表达量下调后,抗凋亡相关Survivin和Bcl-2的表达量均明显低于RFP处理组和blank组(P㩳0.05);(6)Id1表达量下调后,内质网应激相关的chop蛋白表达量明显低于RFP处理组和blank组(P㩳0.05),GRP78蛋白表达量明显高于RFP处理组和blank组(P㩳0.05);(7)Id1表达量下调后,ROR2蛋白表达量明显低于RFP处理组和blank组(P㩳0.05)。结论Id1基因表达下调可能通过下调原癌基因c-myc、侵袭相关基因S100A4和TIMP1、周期相关基因Cyclin D1、抗凋亡相关基因Survivin和Bcl-2、内质网应激相关基因chop以及Wnt信号通路相关基因ROR2的表达逆转骨肉瘤的恶性表型并促进其成骨分化。
【关键词】：骨肉瘤 分化抑制因子 增殖 迁移 分化 骨肉瘤 分化抑制因子 机制
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R738
【目录】：
- 英汉缩略语名词对照4-6
- 中文摘要6-11
- 英文摘要11-17
- 前言17-19
- 第一部分 Id1基因对人骨肉瘤细胞MG63恶性逆转并向成骨分化的影响研究19-45
- 1 实验材料和器材19-20
- 2 实验方法20-33
- 3 实验结果33-40
- 4 讨论40-45
- 第二部分 Id1基因沉默促使骨肉瘤的恶性逆转并成骨分化的机制探究45-59
- 1 实验材料和器材45
- 2 实验方法45
- 3 实验结果45-54
- 4 讨论54-59
- 全文总结59-60
- 参考文献60-67
- 文献综述67-76
- 参考文献72-76
- 致谢76-77
- 攻读学位期间发表论文77
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 薛华明;人骨肉瘤细胞在单层及三维培养中的代谢水平变化[J];国外医学.骨科学分册;2004年03期
2 易成腊;李新志;徐卫国;陈安民;;肿瘤转移相关基因1在人骨肉瘤细胞的表达与转移侵袭的关系[J];中华实验外科杂志;2006年04期
3 郑强,范清宇;白细胞介素-2基因转染人骨肉瘤细胞的体外生物学特性[J];第四军医大学学报;1999年02期
4 宝建中,陶文照,肖辉,倪灿荣;裸小鼠人骨肉瘤细胞移植瘤株建立及其特性观察[J];肿瘤;1993年02期
5 刘光,高奉浔,王东,冯素珍;人骨肉瘤细胞浸润转移相关表型的研究[J];第三军医大学学报;1997年06期
6 王洪,杜靖远,罗怀灿,刘国平;人骨肉瘤细胞体外药物敏感性的实验研究[J];同济医科大学学报;1998年02期
7 潘朝晖,范清宇,殷剑宁,蒋维中,张殿中;裸小鼠原位移植筛选高转移性人骨肉瘤细胞系及其生物学特性分析[J];细胞与分子免疫学杂志;2000年03期
8 楼列名;吴兴;顾昕;刘珊林;;锰型超氧化物歧化酶基因转染对人骨肉瘤细胞的诱导凋亡作用[J];上海医学;2007年06期
9 李星星;何焕玲;吴丽美;左国伟;苗静琨;周兰;;人骨形态发生蛋白12对人骨肉瘤细胞的生物学作用[J];生命科学研究;2008年04期
10 吴进;杨彤涛;甘璐;周勇;;电压门控性钾离子通道对人骨肉瘤细胞增殖的影响[J];科学技术与工程;2009年16期
中国重要会议论文全文数据库 前5条
1 辛曾峰;郑强;;藤黄酸抑制人骨肉瘤细胞系侵袭性的体外研究[A];2012年浙江省骨科学术年会论文集[C];2012年
2 宝建中;陶文照;肖辉;倪灿荣;;裸小鼠人骨肉瘤细胞移植模型的建立及其特性观察[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
3 杨彤涛;张勇;李存孝;黄立军;周勇;范清宇;马保安;;反义RNA抑制Survivin在人骨肉瘤细胞系MG63中表达的实验研究[A];全国骨科临床研究新进展研讨会暨学习班论文集[C];2006年
4 何焕玲;左国伟;赖天霞;王嫣;陈小菊;李星星;苗静琨;谭启华;寇小琴;周兰;;骨形态发生蛋白-2和-6对人骨肉瘤细胞U2OS作用的研究[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年
5 熊文化;庞清江;杨长春;袁欣华;陈晓牛;;PIN1反义基因转染抑制人骨肉瘤细胞的增殖[A];2006年浙江省骨科学术会议暨浙江省脊柱脊髓学术会议论文汇编[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 郑强;白细胞介素-2真核表达载体的构建及其在人骨肉瘤细胞系内的表达的实验研究[D];第四军医大学;1998年
2 曹东;pcDNA3.1/his-Noggin真核表达载体抑制人骨肉瘤细胞增殖性的实验研究[D];第二军医大学;2008年
3 张海英;SATB1在维持人骨肉瘤细胞生物学行为中的作用及其分子机制的研究[D];吉林大学;2013年
4 李丁;姜黄素对人骨肉瘤细胞放射增敏作用的实验研究[D];中南大学;2012年
5 刘艳武;紫檀芪通过抑制JAK2/STAT3信号通路抗人骨肉瘤细胞活性研究[D];第四军医大学;2013年
6 崔俊成;核仁素反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞MG-63抑制作用的实验研究[D];中南大学;2012年
7 李存孝;CD147在人骨肉瘤细胞中的表达及其反义RNA对骨肉瘤侵袭和转移的影响[D];第四军医大学;2005年
8 仲苓芝;H0-1在维持人骨肉瘤细胞对三氧化二砷抗性中的作用及分子机制研究[D];吉林大学;2014年
9 曲珊珊;HMGA2在维持人骨肉瘤细胞恶性表型中的关键作用及分子机制研究[D];吉林大学;2010年
10 高志学;人骨肉瘤细胞多药耐药机制及其逆转剂的研究[D];吉林大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘力;IGF-1R抑制剂PPP对人骨肉瘤细胞U-2OS的影响及其机制的研究[D];暨南大学;2015年
2 何凯元;过表达CADM1对人骨肉瘤细胞U-2 OS的影响及其与ERK5信号通路的关系[D];暨南大学;2015年
3 燕明;极低频电磁场对人骨肉瘤细胞的体外生物效应研究[D];第四军医大学;2015年
4 孟子钧;吴茱萸碱抑制人骨肉瘤细胞143B增殖与PI3K/Akt信号关系的研究[D];重庆医科大学;2015年
5 张汝益;miR-30a通过下调Runx2抑制人骨肉瘤细胞的迁移，侵袭和增殖[D];重庆医科大学;2015年
6 姚娟;NOV的差异表达对人骨肉瘤细胞系增殖、凋亡和迁移的影响及机制研究[D];重庆医科大学;2016年
7 仇超;Id1基因对人骨肉瘤细胞MG63恶性逆转向成骨分化的影响及作用机制[D];重庆医科大学;2016年
8 吴进;人骨肉瘤细胞与电压门控性钾离子通道关系的研究[D];第四军医大学;2009年
9 李天强;免疫球蛋白重链结合蛋白在人骨肉瘤细胞中的表达及临床意义[D];山东中医药大学;2010年
10 周峰;二甲双胍联合阿霉素对人骨肉瘤细胞抑制作用的实验研究[D];中南大学;2014年
，本文编号：874494
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zlx/874494.html
