启膈化裁方调控食管癌前病变小鼠分化相关基因NDRG1表达的实验研究

发布时间：2017-09-22 14:50

  本文关键词：启膈化裁方调控食管癌前病变小鼠分化相关基因NDRG1表达的实验研究

  更多相关文章： 食管癌前病变 NDRG1 c-myc 启膈化裁方 4NQO

【摘要】：目的:利用化学致癌剂4-硝基喹啉-1-氧化物(4-nitro-quinoline-1-oxide,4NQO)诱导C57BL/6小鼠食管癌前病变动物模型,观察启膈化裁方对食管癌前病变小鼠分化相关基因NDRG1及c-myc表达的影响,探讨启膈化裁方逆转食管癌前病变的部分作用机制,为临床应用提供实验依据。方法:选取SPF级4周龄C57BL/6小鼠130只,雌雄各65只,体重18±2g。随机分为5组(1)正常对照组20只:常规饲养;(2)模型组30只:饮用4NQO水(浓度为100μg/ml)14周,25ml/100g体重/天,造模成功后改饮用水灌胃;(3)阳性对照组20只:饮用4NQO水14周后,改用全反式维甲酸灌胃;(4)预防组30只:饮用4NQO水同时,灌服启膈化裁方溶液(含免煎颗粒240mg/ml),14周后只灌服启膈化裁方溶液;(5)治疗组30只:饮用4NQO水14周后,采用启膈化裁方溶液灌胃。每组小鼠每周灌胃3次,每次0.1ml/20g体重,并根据每周小鼠体重变化调整灌胃容积。14周末食管癌前病变模型成功,至24周末,全部处死小鼠,取14、24周末小鼠食管组织行HE染色,光镜下观察正常组、模型组、预防组小鼠食管粘膜上皮的病理改变。24周末透射电镜下观察各组小鼠食管粘膜上皮超微结构的改变;免疫印迹法测定各组小鼠食管粘膜上皮组织NDRG1蛋白的表达;逆转录-聚合酶链反应法测定各组小鼠食管粘膜上皮组织NDRG1、c-myc基因表达。结果:1各组小鼠一般情况实验过程中,正常对照组小鼠无异常,其余各组小鼠2周内一般情况无异常;2周后,模型组小鼠逐渐出现皮毛凌乱、色枯无泽,颈部毛发脱落,精神不振、卷曲拱背、扎堆,闭目少动,食欲不振,体重下降;14周后,阳性对照组、预防组及治疗组小鼠精神状态和食欲较模型组好;预防组小鼠一般情况好于治疗组。2各项指标检测结果2.1光镜下各组小鼠食管粘膜上皮病理形态学变化第14周末和第24周末,正常对照组小鼠食管粘膜鳞状上皮未见异常;第14周末,模型组的小鼠食管粘膜上皮细胞的层数增多,异型细胞累及到食管上皮全层的下2/3,第24周末时,异型增生现象严重,异型细胞大部分累及食管上皮的全层,细胞核染色加深、核仁增大,可见病理性核分裂;第24周末,阳性对照组小鼠食管粘膜上皮增厚,异型细胞介于上皮层的下1/3~2/3之间;第14周末,预防组小鼠食管上皮异型细胞介于上皮层的下1/3~2/3,第24周末时,异型细胞局限于上皮全层的下1/3;第24周末,治疗组小鼠异型细胞大部分局限在上皮层的下2/3,少部分在1/3~2/3之间。2.2透射电镜下各组小鼠食管上皮细胞超微结构的改变正常对照组小鼠食管粘膜上皮未见异常改变;模型组小鼠食管上皮细胞间隙增宽、桥粒减少、线粒体水肿,部分细胞空泡变性、坏死、上皮脱落,细胞核形态不规则,核周隙增大,核仁变大,可见核切迹,细胞核中染色质边移;与模型组小鼠相比,预防组、阳性对照组和治疗组小鼠的食管上皮病变减轻,细胞间隙变小,桥粒较多;预防组与治疗组相比,细胞间隙较小、桥粒较丰富。2.3 Western-blotting测定24周末各组小鼠NDRG1蛋白的表达情况与正常对照组相比,模型组小鼠NDRG1蛋白表达水平明显上调,经统计学处理有显著差异(P0.01);阳性对照组、预防组、治疗组与模型组相比,NDRG1蛋白表达水平明显下调(P0.01);预防组优于阳性对照组和治疗组(P0.05)。2.4 RT-PCR法测定各组小鼠NDRG1、c-myc基因表达情况各组总RNA分别等量利用通用引物Olig(d T)15逆转录,用NDRG1、c-myc引物将逆转录产物,进行PCR扩增。分别出现483bp、263bp特异性区带。NDRG1m RNA、c-mycm RNA表达水平分别用NDRG1、c-myc扩增片断和GAPDH扩增片断的吸光度比值表示。结果表明,模型组NDRG1m RNA/GAPDHm RNA远远高于正常对照组(P0.01);阳性对照组、治疗组、预防组NDRG1m RNA/GAPDHm RNA明显低于模型组,且有显著差异(P0.01);预防组与阳性对照组相比无统计学意义(P0.05);预防组与治疗组相比,明显降低(P0.05)。模型组c-mycm RNA/GAPDHm RNA远高于正常对照组,经统计学处理有显著性差异(P0.01);阳性对照组、治疗组、预防组c-mycm RNA/GAPDHm RNA明显低于模型组(P0.05);预防组与阳性对照组比较无统计学意义(P0.05);预防组与治疗组比较,比值明显降低(P0.05)。结论:1食管癌前病变发展过程中,NDRG1蛋白表达及NDRG1和c-myc基因表达明显上调;启膈化裁方可降低食管癌前病变小鼠食管组织中NDRG1蛋白表达及NDRG1和c-myc基因的表达,延缓食管癌前病变发展,预防用药有一定优势。2启膈化裁方延缓食管癌前病变发展,发挥预防和治疗作用的机制可能与调控小鼠食管癌前病变分化相关基因NDRG1及原癌基因c-myc的表达有关。
【关键词】：食管癌前病变 NDRG1 c-myc 启膈化裁方 4NQO
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.1
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-12
• 英文缩写12-13
• 前言13-14
• 材料与方法14-23
• 结果23-26
• 附图26-35
• 附表35-36
• 讨论36-41
• 结论41-42
• 参考文献42-47
• 综述 历代名家对食管癌病因病机及治疗思路分析47-59
• 参考文献54-59
• 致谢59-60
• 个人简历60

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 尹素改;王慧慧;陈玉龙;吴耀松;;启膈散乙酸乙酯部位抑制食管癌Eca109细胞STAT3信号通路诱导细胞凋亡的研究[J];广州中医药大学学报;2015年05期

2 周蕾;李和根;刘嘉湘;;刘嘉湘辨证治疗食管癌经验[J];浙江中西医结合杂志;2015年09期

3 张星星;李泽庚;;有毒中药在癌症中的应用及机制研究[J];辽宁中医药大学学报;2015年09期

4 杨旭;潘飞辰;李平;;沈洪教授治疗胃食管反流病临证经验[J];河北中医;2015年05期

5 尹素改;王慧慧;吴耀松;陈玉龙;;启膈散乙酸乙酯提取物对食管癌Eca9706细胞增殖和凋亡的影响[J];中国全科医学;2015年14期

6 周凌;吴耀松;尹素改;王慧慧;陈玉龙;;启膈散对食管癌Eca-9706细胞株诱导血管生成的影响[J];中药材;2015年01期

7 李珊珊;罗忠民;崔会娟;王珍珍;彭湃;李娜;路太英;;全反式维甲酸联合5-氟尿嘧啶对Eca109细胞增殖、迁移和VEGF表达的影响[J];郑州大学学报(医学版);2015年01期

8 陈思宇;鲁宏;;启膈散加减治疗反流性食管炎40例[J];河南中医;2015年01期

9 董筠;;试析周仲瑛临证辨治食道癌术后经验[J];辽宁中医杂志;2014年12期

10 朱宏;梁良;;全蝎组织提取物抗肿瘤活性的研究[J];中华中医药学刊;2014年12期

，

本文编号：901444