SphK1信号通路和FAK对结肠癌HCT-116细胞上皮间质转化的影响

发布时间：2017-09-23 07:06

  本文关键词：SphK1信号通路和FAK对结肠癌HCT-116细胞上皮间质转化的影响

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【摘要】：目的研究鞘磷酸激酶1(sphingosine kinase 1, SphK 1)信号通路和粘着斑激酶(focal adhesion kinase, FAK)对人结肠癌HCT-116细胞介导上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响,初步探讨SphK1和FAK在结肠癌发展进程中的临床意义及机制研究。方法 将人结肠癌细胞HCT-116分成3组：FAK抑制剂组、SphKl抑制剂组和空白对照组；根据MTT实验结果,分别采用5μmol/L的SphK1抑制剂N,N-二甲基鞘胺醇(N, N-dimethylsphingosine, DMS)、10pmol/L FAK抑制剂PF573228和相同体积的培养基处理人结肠癌HCT-116细胞48 h。采用MTT方法检测细胞增殖能力,采用免疫印迹方法(Western blotting)检测SphK1、FAK、E-cadherin、N-cadhern、Vimentin和MMP2蛋白的表达,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检钡SphK1、S1P、FAK、E-cadherin和vimentin的mRNA表达水平,同时应用细胞划痕实验检测肿瘤细胞侵袭、迁移能力。结果PF573228和DMS均呈时间剂量依赖性的抑制人结肠癌HCT-116细胞的增殖。Western blotting结果表明DMS抑制SphK1的表达,同时下调FA、N-cadherin、Vimentin和MMP2蛋白的表达,而E-cadherin蛋白表达增加；PF573228明显抑制FAK的表达,同时抑制SphK1、N-cadherin、Vimentin和MMP2的表达,上调E-cadherin蛋白。SphKl的蛋白表达结果为,PF573228组(0.78±0.03),DMS组(0.83±0.05)均低于对照组(1.34±0.06)(P0.01); FAK的蛋白表达结果为,PF573228组(0.87±0.04),DMS组(0.84±0.07)均低于对照组(1.35±0.03)(P0.01)；E-cadherin的蛋白表达结果为,PF773228组(1.28±0.06),DMS组(1.10±0.03)均高于对照组(0.67±0.06)(P0.01)；N-cadherin的蛋白表达结果显示,PF573228组(0.84±0.02),DMS组(0.73±0.02)均低于对照组(1.41±0.05)(P0.01)；Vimentin的蛋白表达结果为,PF573228组(0.52±0.01),DMS组(1.044±0.02)均低于对照组(1.36±0.01)(P0.05); MMP2的蛋白表达结果显示,PF573228组(0.98±0.02),DMS组(0.86±0.06)均低于对照组(1.14±0.04)(P0.01)。实时荧光定量PCR检测各组细胞的mRNA结果显示,SphK1、FAK、SIP和Vimentin基因表达降低,而E-cadherin基因表达增加。具体结果为：与对照组比较,PF573228组和DMS组FAK的mRNA表达(1.00±0.00vs0.16±0.01,0.38±0.03)、SphK1的mRNA表达(1.00±0.00vs 0.21±0.08,0.55±0.1)、S1P的mRNA表达(1.00±0.00 vs 0.08±0.01,0.30±06)以及Vimentin的mRNA表达(1.00±0.00 vs 0.244±0.08,0.30±0.06)均明显下调,而E-cadherin的mRNA的表达(1.00±0.00 vs 1.56±0.21,2.39±0.30)则明显上调(P0.05或0.01)。划痕实验结果显示,对照组及药物干预组24h细胞迁移距离分别为：对照组(93.87±6.06) μm、PF573228(22.97±9.54) μm DMS组(36.76±9.94)μm; 48h迁移距离分别为：对照组(139.95±13.4)μm、 PF573228(42.95±12.18)μm, DMS组(50.09±9.7)μm,表明PF573228和DMS显著抑制HCT-116细胞的迁移能力,其差异均有统计学意义(P0.01)。结论SphK1和FAK可能相互作用并通过抑制细胞的侵袭转移在结肠癌HTC-116细胞上皮间质转化过程中发挥重要作用。
【关键词】：鞘氨醇激酶 粘着斑激酶 上皮间质转化 人结肠癌细胞 侵袭和转移
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.35
【目录】：

• 个人简历3-5
• 中英文缩略词一览表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-14
• 实验技术路线图14-15
• 材料与方法15-32
• 结果32-40
• 讨论40-44
• 结论44-45
• 参考文献45-51
• 综述51-70
• 参考文献61-70
• 致谢70-71
• 攻读学位期间参与发表的学术论文71

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本文编号：903863