辐射通过内质网应激诱导CHOP和JNK的表达对乳腺癌细胞自噬和凋亡的调节机制研究

发布时间：2017-09-27 10:25

  本文关键词：辐射通过内质网应激诱导CHOP和JNK的表达对乳腺癌细胞自噬和凋亡的调节机制研究

  更多相关文章： X射线辐照 内质网应激 凋亡 自噬 CHOP JNK

【摘要】：很多生理或病理条件会使未折叠/错误折叠蛋白聚集于内质网腔中,引起内质网应激;进而会诱发未折叠蛋白响应以维持内质网稳态;严重的内质网应激会诱发凋亡使细胞死亡。作为未折叠蛋白响应的重要调控因子,研究证实CHOP和JNK在调控内质网应激诱导的肿瘤细胞自噬和凋亡的过程中发挥重要的作用,但是具体作用机制及对细胞辐射敏感性的影响还不清楚。本研究以高发病率和致死率的乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7为对象,不同剂量X射线辐照后,用免疫印迹和流式细胞术等方法探索了未折叠蛋白响应的可能信号通路及辐照是否诱发自噬和凋亡;用RNA干扰和抑制剂SP600125分别抑制了CHOP和JNK的表达,研究了X射线辐照后CHOP和JNK调控乳腺癌发生自噬和凋亡的可能作用机制及其对细胞辐射敏感性的影响。结果表明:X射线诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7发生的内质网应激及未折叠蛋白响应具有时间依赖性,并诱导CHOP表达升高和JNK磷酸化。X射线诱导自噬和凋亡具有时间效应,射线首先诱导肿瘤细胞自噬的发生,随后诱导凋亡。在MDA-MB-231细胞中抑制CHOP表达抑制了自噬的发生,而在MCF-7细胞中抑制CHOP抑制了凋亡的发生;JNK在两种乳腺癌细胞中诱导自噬抑制细胞凋亡,抑制JNK表达能有效的提高这两种乳腺癌细胞的辐射敏感性。本研究表明,CHOP调控的自噬与凋亡具有细胞依赖性,而JNK由于调控功能的唯一性,在乳腺癌的放疗中更适合作为提高放疗敏感性的一个靶点。
【关键词】：X射线辐照 内质网应激 凋亡 自噬 CHOP JNK
【学位授予单位】：中国科学院研究生院(近代物理研究所)
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 致谢5-7
• 摘要7-8
• ABSTRACT8-12
• 第一章 绪论12-34
• 1.1 乳腺癌及治疗现状12-13
• 1.2 内质网应激及未折叠蛋白响应13-25
• 1.2.1 背景介绍13-14
• 1.2.2 信号通路简述14-15
• 1.2.3 内质网应激与自噬15-19
• 1.2.4 内质网应激与凋亡19-21
• 1.2.5 UPR在放疗中的研究进展21-25
• 1.3 CHOP调控自噬和凋亡的通路25-29
• 1.3.1 分子结构及转录调控25-27
• 1.3.2 诱导自噬和凋亡的通路27-29
• 1.4 JNK调控自噬和凋亡的通路29-32
• 1.4.1 结构和功能概述29-30
• 1.4.2 诱导自噬和凋亡的通路30-32
• 1.5 本研究目的及意义32-34
• 1.5.1 目前存在的问题32
• 1.5.2 研究目的及意义32-34
• 第二章 材料及方法34-46
• 2.1 实验材料34-37
• 2.1.1 实验用细胞株34
• 2.1.2 实验主要仪器34-35
• 2.1.3 实验主要试剂35-37
• 2.2 实验方法37-46
• 2.2.1 细胞培养37-38
• 2.2.2 细胞辐照38
• 2.2.3 流式细胞术及分析38-39
• 2.2.4 RNA提取及浓度测定39-40
• 2.2.5 反转录技术40
• 2.2.6 qRT-RCR技术40-42
• 2.2.7 免疫印迹方法42-44
• 2.2.8 细胞转染44
• 2.2.9 克隆存活技术44
• 2.2.10 MDC染色44-45
• 2.2.11 数据统计及分析方法45-46
• 第三章 实验结果46-65
• 3.1 X射线诱导乳腺癌细胞发生内质网应激及未折叠蛋白响应46-48
• 3.2 X射线诱导乳腺癌细胞发生自噬和凋亡48-51
• 3.3 CHOP对X射线诱发的乳腺癌细胞自噬和凋亡的调控具有细胞依赖性51-57
• 3.4 JNK调控X射线诱导的自噬和凋亡具有唯一性57-63
• 3.5 CHOP和JNK表达对乳腺癌细胞辐射敏感性的影响63-65
• 第四章 讨论65-69
• 4.1 X射线诱导乳腺癌细胞发生未折叠蛋白响应的信号通路65-66
• 4.2 CHOP对受辐照乳腺癌细胞发生自噬和凋亡的调控具有细胞依赖性的机制66-67
• 4.3 JNK在乳腺癌治疗中的应用67-69
• 第五章 结论与展望69-71
• 参考文献71-85
• 作者简介85-86
• 参与项目及成果86-87

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