KLF17在食管鳞癌中的蛋白表达及其对Eca109细胞迁移、侵袭能力的影响

发布时间：2017-10-03 06:14

  本文关键词：KLF17在食管鳞癌中的蛋白表达及其对Eca109细胞迁移、侵袭能力的影响

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【摘要】：目的研究Kruppel样转录及其调控家族的成员KLF17蛋白在不同和食管鳞癌组织中的表达及与其患者临床病理特征间的关系；慢病毒介导过表达KLF17对Eca109细胞迁移、侵袭的能力的影响及作用的机制。为KLF17在食管鳞癌的临床运用中打下一定基础。方法蛋白免疫组化验证KLF17在44例食管鳞癌及37例癌旁正常食管上皮中的表达；构建KLF17慢病毒过表达载体,慢病毒以不同的感染复数(MOI)感染Eca109细胞,根据绿色荧光蛋白的表达量选取最适合的MOI值；实时荧光定量聚合酶链反应(Real—time PCR)检测KLF17mRNA的表达、免疫蛋白印迹(western blotting)法检测KLF17、E-cadherin、N-cadherin蛋白的表达；过表达KLF17的Eca109细胞迁移和侵袭能力的改变通过细胞划痕实验及体外transwell实验证明。结果KLF17在食管鳞癌中的蛋白表达明显低于食管正常上皮中的表达(P0.05)；KLF17蛋白表达与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期显著相关(P0.05)；MOI值为50转染Eca109细胞,转染效率可达95%以上；QRT-PCR及western blotting结果显示Ad-KLF17组KLF17及上皮标志物E-cadherin表达明显高于Ad-GFP组及CON组,而间质标志物N-cadherin表达明显低于Ad-GFP组及CON组；划痕实验结果显示Ad-KLF17组细胞48h迁移距离为(137.2±8.24)um,明显短于Ad-GFP组(228.6±22.48)um和CON组(221.4±25.92)um(P0.05)；体外transwell实验结果显示Ad-KLF17组细胞24小时穿过小孔数量为(27±3.2)个,明显少于Ad-GFP组(54.2±4.3)个及CON组(58±4.5)个(P0.05)。结论食管鳞癌在发生发展中可能会伴随KLF17的表达改变起重要作用,在食管鳞癌组织中KLF17蛋白质水平的表达癌旁正常组织相比明显降低,其与临床病理资料关联密切,过表达基因KLF17能抑制Eca109细胞迁移及侵袭能力,机制可能与其抑制上皮-间质转化相关。
【关键词】：KLF17 食管鳞癌 Eca109细胞
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.1
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-13
• 1 材料与方法13-23
• 1.1 材料13-15
• 1.1.1 临床病理资料13
• 1.1.2 细胞与慢病毒13
• 1.1.3 主要试剂13-14
• 1.1.4 主要仪器14
• 1.1.5 主要溶液配制14-15
• 1.2 方法15-23
• 1.2.1 食管鳞癌标本的收集与临床病理资料归类16
• 1.2.2 食管鳞癌Eca109细胞的培养16-17
• 1.2.3 实时荧光定量PCR检测17-19
• 1.2.4 蛋白免疫印迹实验(western-blotting)19-21
• 1.2.5 过表达KLF17慢病毒的转染与实验分组21
• 1.2.6 组织免疫组化实验21-22
• 1.2.7 细胞划痕实验22
• 1.2.8 体外Transwell实验22-23
• 1.2.9 统计学分类处理23
• 2 结果23-26
• 2.1 KLF17蛋白表达与临床病理特征的关系23-25
• 2.2 过表达KLF17基因慢病毒对Eca109细胞转染效率25
• 2.3 慢病毒对Eca109细胞中KLF17mRNA、蛋白表达的影响25
• 2.4 过表达KLF17能抑制Eca109细胞的迁移能力25
• 2.5 KLF17抑制Eca109细胞的侵袭能力25-26
• 2.6 KLF17对Eca109细胞中EMT相关蛋白表达的影响26
• 3 讨论26-30
• 4 附图30-35
• 全文总结35-36
• 参考文献36-38
• 文献综述38-46
• 参考文献43-46
• 致谢46-47
• 学位期间发裹的学术论文目录47

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本文编号：963587