甲状旁腺激素对卵巢癌的作用及其机制研究

发布时间：2017-10-07 13:43

  本文关键词：甲状旁腺激素对卵巢癌的作用及其机制研究

  更多相关文章： 卵巢癌 甲状旁腺激素 上皮间质转化 肿瘤干细胞 增殖

【摘要】：卵巢癌是致死率较高的女性疾病之一,由于卵巢癌早期难以诊断,等到出现身体症状就诊时多已发展为晚期,往往取不到理想的治疗效果。因此,卵巢癌的死亡率目前已位居妇科癌症第三位。甲状旁腺激素(PTH),是一种多肽类激素,具有碱性单链结构由甲状旁腺分泌,它的主要功能是调节人体内钙和磷的代谢水平,促血钙,降血磷,维持体内的钙磷平衡。多种癌症的发生、发展都与甲状旁腺激素的分泌水平有密切关系其中,卵巢癌与甲状旁腺激素的关系已经引起了学术界的关注。有研究报道指出PTH对卵巢癌的发生、发展都有一定的影响。甲状旁腺亢进症多是由于人体中甲状旁腺激素分泌过多引起的,与性别关系密切,在女性尤为多见,男女发病比例可达到1：2-4,尤其以围绝经期及绝经期以后妇女高发。作为女性健康杀手的卵巢癌,目前有研究发现PTH可能通过TGF-beta 1影响它的细胞活力。当前,很多临床研究表明甲状旁腺激素与卵巢癌的发生发展有相关性。鉴于目前国内外对卵巢癌的治疗手段大多还停留在放疗、化疗及手术治疗,药物治疗只是作为辅助疗法,应用并不普遍,而且这些药物大都存在选择性差、有副作用、长期服用具有耐药性等缺点,因此,我们从PTH对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭、细胞凋亡等方面的影响为切人点,探索PTH对卵巢癌细胞上皮间质转化和干细胞干性的作用及其作用机制,并试图通过以上几个方面的研究为临床开发靶向药物提供实验基础和理论依据,这项研究有着重要的科学意义和应用价值。我们通过细胞增殖实验分析了PTH对卵巢癌细胞系ES2及skov3的影响,结果发现PTH能显著促进这两种细胞系的增殖,之后我们进一步通过细胞迁移、细胞侵袭实验发现,PTH能够促进skov3及ES2细胞株的迁移能力和侵袭能力。流式细胞术检测细胞凋亡的实验结果表明,PTH处理过的skov3及ES2较空白对照组相比,细胞凋亡明显减少,说明PTH具有抑制卵巢癌细胞凋亡的作用。蛋白质印迹实验(Western Blotting)显示PTH处理过的skov3及ES2细胞系中AKT及磷酸化的AKT表达增多ERK及磷酸化的ERK表达增多,通过PTH促进这些重要信号通路关键蛋白的表达,我们推测PTH对skov3及ES2的增殖、凋亡、侵袭等作用可能与PI3K/AKT信号通路以及ERK1/2信号通路的激活有关。蛋白质印迹实验(Western Blotting)证实snail、 N-cad、Vemention等EMT marker在经PTH处理过的skov3及ES2细胞系中高表达。为了进一步证实PTH能促进卵巢癌细胞的上皮间质转化,我们又进行了qRT-PCR实验,发现经过PTH处理的样品中snail、N-cad、Vemention等基因在mRNA层面也出现了高表达。综上,我们认为PTH能促进卵巢癌细胞的上皮间质转化,加速肿瘤分化。通过肿瘤干细胞微球形成实验,我们发现PTH处理过的skov3及ES2细胞株成瘤率明显高于未经处理的skov3及ES2细胞株,可以确定PTH促进肿瘤干细胞的形成。我们进一步通过蛋白质印迹(Western Blotting)检测了OCT-4、Sox2、Bmi1等干细胞marker.Western Blotting结果显示,经PTH处理的细胞较对照组相比,OCT-4. Sox2、 Bmi1等干细胞marker均出现了高表达,这个现象在qRT-PCR实验中也得到了印证,OCT-4、Sox2、Bmi1等干细胞marker在mRNA层面同样出现了高表达,以上一系列实验表明,PTH促进卵巢癌肿瘤干细胞形成,对肿瘤干细胞干性有深刻重要影响。在我们的研究中,PTH显著提高卵巢癌的增殖、侵袭以及迁移能力,能够使细胞凋亡受到抑制。同时,PTH促进卵巢癌细胞的上皮间质转化,影响肿瘤分化,加速肿瘤转移和恶化；PTH还能促进卵巢癌细胞干细胞的形成,对卵巢癌干细胞干性有重要影响。因此调节PTH在体内的含量,找到PTH对卵巢癌作用的具体靶点和通路,并探寻对这些重要靶点起调控作用的纯天然药物,例如中药等,将为治疗卵巢癌提供新的思路,为攻克卵巢癌找到新的突破口。
【关键词】：卵巢癌 甲状旁腺激素 上皮间质转化 肿瘤干细胞 增殖
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 缩略词8-10
• 上篇：甲状旁腺激素对卵巢癌的作用及卵巢癌与上皮间质转化和干细胞干性的作用进展研究10-23
• 综述一：综述一甲状旁腺激素生理病理作用的研究进展10-17
• 参考文献14-17
• 综述二：卵巢癌与上皮间质转化及肿瘤干细胞干性的相关研究17-23
• 参考文献21-23
• 下篇 实验研究部分23-56
• 前言23-24
• 实验一 PTH对卵巢癌细胞增殖、调亡、迁移、侵袭的作用及机制研究24-40
• 1 实检材料与试剂24-28
• 2 实验方法28-33
• 结果33-39
• 讨论39-40
• 实验二：PTH对卵巢癌EMT现象的影响40-48
• 1实验材料与试剂40-41
• 2 实验方法41-44
• 结果44-47
• 讨论47-48
• 实验三：PTH对卵巢癌细胞干细胞干性的作用48-56
• 1 实验材料与试剂49
• 2 实验方法49-52
• 结果52-56
• 讨论56
• 结论56-58
• 参考文献58-59
• 致谢59-60
• 个人简历60-61
• 附录A 常用仪器一览表61

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本文编号：988184