不同时长艾灸对实验性KOA兔IL-1β、TNF-α影响的研究

发布时间：2018-08-27 14:22

【摘要】：目的：本实验选用3种不同时长艾灸治疗实验性KOA兔。旨在通过观察其关节液中IL-1β、TNF-α的含量与关节软骨中Ⅱ型胶原蛋白表达及其mRNA表达水平变化之间的关系,探讨不同时长艾灸治疗KOA灸时、效之间的关系,为艾灸KOA时选择合适的灸治时长提供实验依据。方法：选用50只日本大耳白兔,雌雄各半,体重2.5±0.25 kg。将实验动物随机分为空白组、模型组、10min治疗组、20min治疗组和40min治疗组,每组10只。模型组、10min治疗组、20min治疗组和40min治疗组的实验兔,采用右侧膝关节腔内注入木瓜蛋白酶溶液的方法复制实验性KOA模型,空白组右膝注入0.5ml的生理盐水。造模后取3个艾灸治疗组的“内膝眼”、“外膝眼”穴位进行治疗。l0min治疗组、20min治疗组和40min治疗组每天治疗一次,5次为一疗程,疗程之间间隔2天,一共治疗4个疗程。治疗结束后取各组动物右侧膝关节股骨内侧髁的软骨和滑膜及相关周围组织,用HE染色法和Masson染色法进病理形态学分析,用免疫组化法测定Ⅱ型胶原蛋白表达水平,用RT-PCR方法检测Ⅱ型胶原mRNA表达水平；抽取各组动物右侧膝关节的关节液,用Elisa法检测IL-1β、TNF-α的含量。实验过程中所得数据采用SPSS21.0进行单因素方差分析的统计学分析,组间比较采用LSD,数据都用“均数±标准差”来表示,P0.05表示差异具有统计学意义。结果：1.HE染色：与空白组比较,模型组均呈明显的炎症细胞浸润；与模型组比较,10min、20min和40min组中明显的炎症细胞浸润标本显著减少；10min、 20min和40min组比较,以40min组少量炎症细胞浸润的标本显著多于其他两组；l0min组和20min组无显著差异。2. Masson染色的OD值：与空白组比较,模型组经Masson染色后测得OD值显著下降(p0.01)；与模型组比较,10min、20min和40min组OD值显著升高(p0.05); 10min、20min和40min组比较,40min组的OD值升高较其他两组更显著(p0.01)；与l0min组比较,20min组无统计学差异(p0.05)。3.关节液中IL-1β、TNF-α含量的检测：与空白组比较,模型组关节液中IL-1β、TNF-α含量显著升高(p0.01)；与模型组比较,10min、20min和40min组关节液中的IL-1β、TNF-α含量显著降低(p0.01)；10min、20min和40min组相比较,40min组降低IL-1β、TNF-α含量较其他两组更加显著(p0.01)。4.关节软骨中Ⅱ型胶原蛋白表达及其mRNA表达水平检测：与空白组比较,模型组中Ⅱ型胶原蛋白表达及其mRNA表达水平显著降低(p0.01)；与模型组比较,10min、20min和40min组中Ⅱ型胶原蛋白表达及其mRNA表达水平显著升高(p0.05);10min,20min和40min组比较,40min组中的Ⅱ型胶原蛋白表达及其mRNA表达水平较其他两组更加显著(p0.05)；与l0min组比较,20min组无统计学差异(p0.05)。结论：1、本实验采用向兔的膝关节腔内注射木瓜蛋白酶溶液的方法可以成功复制实验性KOA模型。2.在KOA的病理发展中,滑膜的炎症浸润是加速软骨基质分解,破坏关节软骨的重要因素。3、10min、20min和40min艾灸“内膝眼”、“外膝眼”穴,通过降低实验性KOA兔关节液中IL-1β、TNF-α含量,以控制滑膜的炎症浸润,增加Ⅱ型胶原蛋白表达及其mRNA表达水平,延缓关节软骨的退变。以40min组最为显著。
[Abstract]:Objective:To observe the relationship between the content of IL-1 beta and TNF-a in the joint fluid and the expression of type II collagen protein and its mRNA in the articular cartilage of experimental KOA rabbits treated with Moxibustion of three different time lengths, and to explore the relationship between the effects of moxibustion of different time lengths on the treatment of KOA rabbits. Methods: Fifty Japanese white rabbits were randomly divided into blank group, model group, 10 min treatment group, 20 min treatment group and 40 min treatment group with 10 rabbits in each group. The experimental KOA model was duplicated by intracavitary injection of papain. The blank group was injected 0.5ml saline into the right knee. After modeling, the "inner knee eye" and "outer knee eye" acupoints of three moxibustion treatment groups were treated. The treatment group was treated for l0 minutes, the treatment group for 20 minutes and the treatment group for 40 minutes once a day, five times a course of treatment, with an interval of 2 days. The cartilage and synovium of the medial femoral condyle of the right knee joint and the adjacent tissues were taken out after 4 courses of treatment. The pathological morphology was analyzed by HE staining and Masson staining. The expression of type II collagen protein was detected by immunohistochemistry. The expression of type II collagen mRNA was detected by RT-PCR. The contents of IL-1beta and TNF-alpha in the joint fluid of the right knee joint were detected by Elisa method.The data obtained during the experiment were analyzed by SPSS21.0 and LSD was used for comparison among groups.The data were expressed by mean (+standard deviation) and P 0.05 respectively. Compared with the model group, the inflammatory cell infiltration in the model group was obvious; compared with the model group, the obvious inflammatory cell infiltration in the 10 minutes, 20 minutes and 40 minutes group was significantly reduced; compared with the 10 minutes, 20 minutes and 40 minutes group, the small amount of inflammatory cell infiltration in the 40 minutes group was significantly more than the other two groups; there was no significant difference between the l0 minutes group and 20 minutes group.2. Masson staining. OD value: Compared with the blank group, the OD value of the model group decreased significantly after Masson staining (p0.01); compared with the model group, the OD value of the 10 min, 20 min and 40 min group increased significantly (p0.05); compared with the 10 min, 20 min and 40 min group, the OD value of the 40 min group increased more significantly than the other two groups (p0.01); compared with the l0 min group, 20 min group had no statistical difference (p0.05). 3. Detection of IL-1beta and TNF-alpha in synovial fluid: Compared with the blank group, the levels of IL-1beta and TNF-alpha in the synovial fluid of the model group increased significantly (p0.01); Compared with the model group, the levels of IL-1beta and TNF-alpha in the synovial fluid of the 10 min, 20 min and 40 min groups decreased significantly (p0.01); Compared with the other two groups, the levels of IL-1beta and TNF-alpha in the 40 min group decreased significantly (p0.01). Detection of type II collagen protein expression and its mRNA expression level in articular cartilage: Compared with the blank group, the expression level of type II collagen protein and its mRNA in the model group was significantly lower (p0.01); compared with the model group, the expression level of type II collagen protein and its mRNA in the 10 min, 20 min and 40 min groups were significantly higher (p0.05). Compared with the other two groups, the expression of collagen type II protein and its mRNA in the 40-minute group were more significant (p0.05); there was no significant difference between the 20-minute group and the l0-minute group (p0.05). Conclusion: 1. The experimental KOA model could be successfully reproduced by intraarticular injection of papain into the knee joint of rabbits. Type 2. Inflammatory infiltration of synovium is an important factor in accelerating cartilage matrix decomposition and destroying articular cartilage during the pathological development of KOA. Moxibustion at "inner knee eye" and "outer knee eye" points for 3, 10, 20 and 40 minutes can control the inflammatory infiltration of synovium, increase the expression of type II collagen protein and decrease the content of IL-1beta and TNF-alpha in the joint fluid of experimental KOA rabbits. The expression level of mRNA delayed the degeneration of articular cartilage, the most significant in group 40min.
【学位授予单位】：成都中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R245.81

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本文编号：2207549