振腹推拿疗法对2型糖尿病大鼠肠道菌群及糖脂代谢的影响

发布时间：2020-05-29 13:52

【摘要】：研究背景:随着全球经济的发展,人们生活水平普遍提高,饮食习惯转向高糖、高油和高脂,导致2型糖尿病(Type 2 Diabetes Mellitus,T2DM)的发病率逐年升高,目前已成为不可忽视的全球性健康问题。西医认为T2DM的发病机制是胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能障碍,然而随着研究的深入,肠道菌群与T2DM之间的密切联系被学者们发现,肠道菌群已成为研究T2DM机制及T2DM防治方向的新靶点。中医认为,T2DM属于“消渴”范畴,其发病机制是阴虚和燥热,治宜清热润燥、养阴生津,多采用中药治疗及针灸推拿治疗。其中振腹推拿是以振腹操作为主,以神阙穴的独特作用为基础,通过调理任督二脉及脏腑的俞募穴,以达到培补元气、调理气机作用的具有独特的理论体系的推拿疗法,以其良好的治疗效果受到患者推崇。但振腹推拿改善T2DM的相关机制仍未完全阐明。研究目的:本研究通过以高糖高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素(30mg/(kg·bw))诱导T2DM大鼠模型,通过分析空白组、模型组、推拿组三组组间差异及推拿组在振腹干预前后血糖血脂以及肠道菌群等指标的变化,探讨振腹推拿对T2DM大鼠的作用机制以及与肠道菌群的相关性。研究方法:在适应性喂养一周后,对36只8周龄SPF级雄性Wistar大鼠进行正式造模。随机选取6只作为空白组继续基础饲料喂养,另外30只作为T2DM造模大鼠给予高糖高脂饲料喂养。连续喂养4周后,将所有大鼠禁食12个小时,T2DM造模大鼠快速腹腔注射2%链脲佐菌素溶液,正常大鼠腹腔注射同等剂量的柠檬酸钠缓冲液,造模大鼠继续高糖高脂饲养,分别在第3天和第7天测量空腹血糖(Fasting Blood Glucose,FBG),以两次FBG≥11.1mmol/L作为成模标准进行筛选。将成模的大鼠随机分为模型组和推拿组。推拿组大鼠以自制鼠袋固定并给予振腹推拿干预,每次15分钟,每周5次,连续6周;空白组和模型组大鼠以鼠袋固定但不振腹,每次15分钟,每周5次,连续6周。实验期间,空白组始终以普通饲料喂养,而推拿组与模型组以高糖高脂饲料喂养。每周观察大鼠的一般情况、测FBG,干预前以及末次干预后,检测2h餐后血糖(2 Hour Hypoglycemia,2hPG),胰岛素(insulin,INS)、总胆固醇(Cholesterol Total,TC)、甘油三酯(Trimyristate Glycerin,TG)、低密度脂蛋白(Low Density Lipoprotein Cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白(High Density Lipoprotein Cholesterol,HDL-C)、总胆汁酸(Total Bile Acid,TBA);并取干预前各组大鼠粪便以及干预后推拿组大鼠粪便以检测肠道菌群。检测方法:采用GPO-PAP酶法测定TG含量;用COD-PAP酶法测定TC含量;用直接法测定LDL-C及HDL-C;用酶联免疫吸附试验法测定INS含量;用酶比色法测定TBA含量;用葡萄糖氧化酶法测定大鼠FBG及2hPG,并使用公式计算出胰岛素抵抗指数(Homeostatic Model Assessment For Insulin Resistance,HOMA-IR);对粪便标本进行DNA提取后进行PCR扩增、纯化,采用Illumina MiSeq平台进行高通量测序。研究结果:1.与空白组大鼠相比,T2DM大鼠皮毛色泽暗淡、发黄,饮水量较空白组增多,尿量及排便量较空白组明显增多,且尿液粘稠泛白,味道腥臭,精神不振,经振腹推拿干预后症状减轻。2.干预前,与空白组比较,模型组及推拿组的FBG明显较高,差异有显著统计学意义(P0.01),模型组与推拿组的FBG无统计学差异;干预后,推拿组FBG自第3周开始呈下降趋势,在第6周有显著下降,与模型组相比差异有统计学意义(P0.01)。3.干预前,与空白组相比,模型组与推拿组的2hPG、HOMA-IR水平高于空白组,而INS水平低于空白组,均具有显著统计学差异义(P0.01),模型组与推拿组组间均无统计学差异;干预后推拿组INS水平显著升高,与模型组相比差异有统计学意义(P0.01)。4.干预前,与空白组相比,模型组及推拿组的LDL-C、TC、TG及TBA水平均显著升高,差异具有统计学意义(P0.01)。干预后,与模型组相比,推拿大鼠HDL-C水平较前升高,差异具有统计学意义(P0.05);推拿组大鼠的血清LDL-C、TG及TBA水平明显下降,差异具有显著统计学意义(P0.01);虽然干预后推拿组TC水平有所下降,但与模型组相比无统计学差异。5.肠道菌群多样性分析:与正常大鼠相比,T2DM大鼠肠道菌群的群落丰富度较小,群落多样性较低,但没有统计学差异。6.菌群群落组成分析:T2DM大鼠与正常大鼠的肠道菌群有显著差异,T2DM大鼠存在明显的肠道菌群失调,主要表现为T2DM大鼠乳酸杆菌、柔膜菌等益生菌丰度显著低于正常大鼠,蓝藻菌、变形菌、丹毒丝菌、棒状杆菌等多个条件致病菌丰度显著高于正常大鼠。推拿组在干预前后组成有很大差异和明显的变化,主要表现为厚壁菌门/拟杆菌比值的降低,有益菌种如双歧杆菌、苏黎世杆菌的增多,条件致病菌如变形菌门及其相关纲目、棒状杆菌的减少、对机体健康产生负面作用的布劳特氏菌、沃氏嗜胆菌、瘤胃菌、脱硫化弧菌等菌种的减少。结论:1.振腹推拿可以改善T2DM大鼠精神不振、皮毛色泽暗淡发黄、多尿等症状。2.振腹推拿可以降低T2DM大鼠FBG,提高INS水平,促进胰岛素分泌。3.振腹推拿可以提高T2DM大鼠HDL-C水平,降低LDL-C、TG及TBA水平,改善T2DM大鼠脂代谢紊乱,调节TBA代谢平衡。4.振腹推拿可调节T2DM大鼠肠道菌群结构,主要表现为:a)增加拟杆菌相对丰度、降低厚壁菌门/拟杆菌的比值;b)增加有益菌种如双歧杆菌、苏黎世杆菌的相对丰度;c)降低条件致病菌如变形菌门及其相关纲目、棒状杆菌的相对丰度;d)降低对机体健康产生负面作用的布劳特氏菌、沃氏嗜胆菌、瘤胃菌、脱硫化弧菌等菌种的相对丰度等几方面。5.振腹推拿通过改变肠道菌群结构,能够起到如下作用:促进SCFA的生成、增强肠道屏障功能、正向调节肠道菌群、调节肠道稳态;增加多糖水解酶数量、提高机体的多糖利用能力;减少内毒素的生成、缓解肥胖;减轻机体炎症反应、缓解IR和糖耐量异常;降低血糖、维持血糖稳定。6.振腹推拿对肠道菌群的改变可能是影响血清相关指标及T2DM相关症状发生改变的原因。综上所述,振腹推拿可以改善T2DM大鼠糖脂代谢水平,调节TBA代谢平衡,减轻机体炎症反应,其作用机制可能与其能调节肠道菌群,促进胆汁酸代谢有关。
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R244.1

【相似文献】