OSAHS合并症中医证型研究及丹蒌片干预CIH诱导血脂异常、动脉硬化的机制

发布时间：2020-06-03 18:54

【摘要】：研究背景阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(Obstructive Sleep Apnea Hypopnea Syndrome,OSAHS)是一种临床常见的睡眠障碍疾病,与多种慢性病的发生率及病死率相关,对人体造成很大的危害。OSAHS常合并多系统合并症,近年来其合并症也逐渐受到人们重视,尤其心血管疾病,此外可以进一步诱发心血管疾病的高脂血症、动脉硬化也逐渐被关注,OSAHS与合并症常互相影响,加重了患者身体及经济负担。目前OSAHS患者的治疗方式以佩戴呼吸机联合运动疗法为主,但仍有一部分患者控制不佳,合并症、并发症控制较差,而中医药治疗OSAHS对患者进行整体论治,对原发病、合并症、并发症均干预,取得了很好的疗效,且副作用小,可有效改善患者症状。但目前也存在着中医辨证分型尚不规范,OSAHS其合并症中医证型研究资料有限的问题。高脂血症是由于脂质代谢或运转异常所致的病症,它可以通过引起全身的动脉粥样硬化从而导致冠心病、脑梗以及周围血管疾病等动脉硬化性疾病,危害人体健康。它常与OSAHS相伴发,两者相互影响,相互加重。常用的降脂药存在影响肝功能、导致肌炎和肌病的风险,联合用药可能增加了这些不良反应的出现,中医药治疗降脂疗效显著,还具协同西药的降脂作用、减少其临床用量及毒副作用等优点。祖国医学认为高脂血症属“痰浊”、“瘀血”等范畴,而动脉硬化、OSAHS病机中亦有痰浊、瘀血,痰瘀互结证是其常见的证型。痰瘀同治法是其共同的治法,中药丹萎片是痰瘀同治的代表方之一,具有调节血脂、改善动脉硬化、治疗心脑血管疾病的作用,但其对OSAHS诱导的高脂血症、动脉硬化是否有效尚需进一步研究。OSAHS主要病理机制是慢性间歇性缺氧(Chronic Intermittent Hypoxia,CIH),它可以引起代谢紊乱,导致血脂异常、动脉硬化,诱发心脑血管疾病的发生发展。现代研究CIH可通过HIF-1-Angptl4信号通路导致血脂异常、动脉硬化。以往研究已证实丹萎片具有抗炎、保护血管内皮、抗动脉硬化等作用,而适用于OSAHS诱导的血脂异常、动脉硬化,但其疗效及作用机制尚不清楚。本研究通过对载脂蛋白E(Apolipoprotein E,ApoE)--小鼠动脉硬化(Arteriosclerosis,AS)模型进行CIH处理,观察HIF-1-Angptl4信号通路以及该通路可能上游靶点FIH-1在CIH诱导AS过程中的作用,同时给予丹萎片干预,观察其干预效果,并探索其干预间歇性低氧诱导动脉硬化、血脂异常的机制。第一部分:阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征及其合并症中医证型规律研究目的:本研究通过回顾性研究对住院OSAHS患者进行病史、合并症及中医证型采集,分析OSAHS和合并症中医证型特点、分布规律,及其与睡眠监测结果的关系。方法:采用单中心、回顾性研究,纳入中国中医科学院广安门医院2014年1月至2018年12月期间呼吸科住院的,明确诊断为OSAHS的数据齐全的患者77例。按照《鼾症中医诊疗专家共识意见》,分为痰湿内阻、痰瘀互结、痰热内蕴、气虚痰瘀、肺脾气虚、脾肾两虚6个证型。建立数据库,对患者一般情况、中医证型分布及与睡眠监测结果的关系、OSAHS合并症及与中医证型的关系等进行数据分析。结果:1 一般情况:本课题共入选OSAHS患者77例,男性40例,女性37例,年龄最大为80岁,最小为31岁,平均年龄63.82±11.44岁,平均体重指数(Body Mass Index,BMI)28.91±4.45kg/m2。其中轻度 OSAHS 患者 28 例,中度患者19例,重度患者30例。OSAHS疾病程度与BMI进行分析,发现重度OSAHS患者BMI明显高于轻度及中度患者,结果显示差异有统计学意义(P0.05)。2中医证型分析2.1中医证型分布:痰瘀互结证患者26例,占总数的33.8%,痰湿内阻证患者19例,占总数的24.7%,痰热内蕴证患者15例,占总数的19.5%,气虚痰瘀证患者11例,占总数的14.3%。脾肾两虚证患者4例,占总数5.2%,肺脾气虚2例,占总数2.6%。2.2中医证型兼证情况:15例患者存在兼证,占整体的19.5%。其中痰瘀互结+脾肾两虚9例,肺脾气虚+痰湿内阻2例,脾肾两虚+痰湿内阻4例。单纯实证包括痰瘀互结、痰湿内阻、痰热内蕴证者共51例,虚实夹杂证者26例。2.3中医证型与睡眠监测结果之间的比较2.3.1各组中医证型呼吸紊乱指数(Apnea Hyponea Index,AHI)之间的比较:痰湿内阻、痰热内蕴两组AHI明显小于痰瘀互结、气虚痰瘀、痰瘀互结脾肾两虚三组AHI,P0.05,具有统计学意义。痰瘀互结、气虚痰瘀、痰瘀互结脾肾两虚三组AHI之间无明显差异,P0.05,痰湿内阻、痰热内蕴组AHI之间无明显差异,P0.05。2.3.2各组中医证型患者LSpO2之间的比较:痰湿内阻、痰热内蕴两组LSpO2明显高于痰瘀互结、气虚痰瘀、痰瘀互结脾肾两虚三组LSp02,P0.05,具有统计学意义。痰湿内阻、痰热内蕴两组LSp02之间无明显差异,P0.05,痰瘀互结、气虚痰瘀、痰瘀互结脾肾两虚三组LSpC2之间无明显差异,P0.05。2.3.3各组中医证型OSAHS严重程度比较:痰湿内阻、痰热内蕴证OSAHS患者疾病程度以轻度、中度为主,而痰瘀互结、气虚痰瘀、痰瘀互结脾肾两虚证OSAHS患者疾病程度以中、重度为主。2.4各中医证型合并症情况患者OSAHS合并症情况统计:高脂血症是发病率最高的合并症,56例,占72%,其次是高血压52例,占67%,慢性呼吸系统疾病32例,占41%,糖尿病28例,占36%,冠心病27例,占35%,胃食管反流病24例,占31%,中风10例,占13%。其中无合并症的患者7人,合并1种合并症患者6人,合并2种合并症患者15人,合并3种合并症的患者有19人,合并3种以上合并症的患者30人。中医证型与OSAHS合并症之间的关系:合并高脂血症的OSAHS患者常见于痰瘀互结、痰湿内阻证;合并冠心病的OSAHS患者常见证型为痰湿内阻、痰热内蕴证;合并高血压的OSAHS患者常见于痰湿内阻、痰瘀互结证;合并中风的OSAHS患者常见于痰瘀互结证;合并糖尿病的OSAHS患者常见于痰瘀互结证;合并胃食管反流的OSAHS患者常见于痰热内蕴证;合并慢性呼吸系统疾病的OSAHS患者常见于痰湿内阻证。结论:本组OSAHS患者的中医证型分布为痰瘀互结证痰湿内阻证痰热内蕴证气虚痰瘀证脾肾两虚证肺脾气虚证,以实证为主,虚实夹杂次之,痰瘀互结证最为常见。不同证型的睡眠监测结果不同,痰湿内阻、痰热内蕴证OSAHS患者疾病程度以轻度、中度为主,而痰瘀互结、气虚痰瘀、痰瘀互结脾肾两虚证OSAHS患者疾病程度以中、重度为主。OSAHS常伴发多种合并症,高脂血症是发病率最高的合并症,常见中医证型为痰瘀互结,其他心脑血管疾病、代谢性疾病、消化疾病、呼吸系统疾病均可见。中医证型与合并症的发生具有一定的关系,可以指导OSAHS及其合并症的治疗。第二部分:丹萎片干预慢性间歇低氧诱导的血脂异常和动脉硬化小鼠模型的研究研究一丹萎片干预间歇性低氧诱导的血脂异常及动脉硬化小鼠模型疗效评价目的:评价丹萎片治疗间歇性低氧诱导的血脂异常及动脉硬化小鼠模型的有效性。方法:12周龄的雄性ApoE-/-小鼠16只,分为4组,每组4只,假手术组(Sham)不进行CIH造模。CIH+生理盐水组进行CIH处理,同时每天生理盐水(2ml/次)灌胃1次。CIH+Angptl4抗体组进行CIH处理,同时Angpt14免疫组化抗体(30mg/kg)每周腹腔注射。CIH+丹萎片组进行CIH处理,同时丹萎片(250mg/kg)每天灌胃1次。每组干预4周后取材,采集眶后血液,离心取血清。动物处死留取附睾脂肪垫,心脏组织标本,放入-80℃冰箱中保存。动物处死后从左心室缓慢灌流磷酸盐缓冲液,分离主动脉弓。进行指标检测,ELISA检测血清脂质,试剂盒测定血清脂蛋白,脂蛋白脂酶(Lipoproteinlipase,LPL)活性检测试剂盒检测血清LPL活性,HE和免疫组化观察动脉斑块形态性质。结果:1各组ApoE-/-小鼠血清脂质和脂蛋白测定CIH组TC、TG、LDL、VLDL等与Sham组相比较,P0.01,两组差异明显,具有统计学意义,说明CIH可以导致小鼠血脂异常。Angptl4抗体组其TC、TG、LDL、VLDL与CIH组结果相比较,P0.01,两组差异明显,具有统计学意义,AngptI4抗体可以减轻CIH诱导的血脂异常,降低血脂。丹萎片组其TC、TG、LDL、VLDL与CIH组结果相比较,P0.01,两组差异明显,具有统计学意义,丹蒌片可以干预CIH诱导的血脂异常,改善血脂代谢。2各组ApoE-/-小鼠血清脂蛋白脂肪酶(LPL)活性测定CIH组LPL活性与Sham组相比较,P0.01,两组差异明显,具有统计学意义,与Sham组相比,CIH组小鼠血清中LPL的活性水平均显著降低,说明CIH可造成LPL活性减低,阻碍血脂的清除,造成血脂的升高。Angpt14抗体组LPL活性与CIH组相比,P0.01,两组差异明显,具有统计学意义,提示Angptl4抗体组可能通过中和Angptl4,从而升高LPL活性,达到降低血脂的目的。丹萎片组其LPL活性与CIH相比,P0.01,两组差异明显,具有统计学意义,丹萎片干预后LPL活性显著升高,丹萎片通过升高LPL活性改善血脂代谢。3动脉斑块形态性质观察主动脉弓HE染色后,与Sham组相比,CIH组的动脉粥样硬化斑块面积显著增加,动脉壁变厚,管腔变狭窄。与CIH组相比,Angptl4组和丹萎片组的动脉粥样硬化斑块面积显著降低,动脉壁厚度有一定程度的变窄,动脉粥样硬化的病变有所缓解。与CIH组相比,Angpt14抗体组和丹萎片组的动脉粥样硬化斑块CD68染色面积显著降低,染色强度减弱,动脉壁厚度有一定程度的变窄,动脉粥样硬化的病变有所缓解。结论:间歇性低氧处理可加重ApoE-/-小鼠的动脉粥样硬化病变,升高血脂。而通过Angptl4抗体和丹萎片的干预,小鼠的动脉粥样硬化情况有缓解,血脂下降。本实验验证了丹萎片干预治疗CIH诱导的动脉硬化、血脂异常的有效性,但其干预机制尚需进一步探索。研究二丹萎片干预慢性间歇低氧诱导的血脂异常和动脉硬化的机制研究目的:探索HIF-1-Angptl4通路以及其可能上游靶点FIH-1在慢性间歇低氧诱导的血脂异常和动脉硬化过程中的作用,以及丹萎片的可能干预机制。方法:取实验一中处死的各组动物附睾脂肪垫、心脏组织标本,按照实验一分组分为4组,进行实时荧光定量PCR检测各组小鼠附睾脂肪垫、心脏组织中FIH-1、Angptl4、HIF-1、LPL 的 mRNA 表达量。并用 Western blot 检测各组小鼠附睾脂肪垫、心脏组织中FIH-1、Angpt14、HIF-1、LPL的蛋白水平。结果:1 ApoE-/-小鼠的附睾脂肪垫组织qRT-PCR检测结果与Sham组相比,CIH组的低氧诱导因子抑制因子-1(Factor inhibiting hypoxia-inducible factor-1,FIH-1)mRNA的表达水平显著降低,Angptl4mRNA的表达水平显著增加,低氧诱导因子-1(Hypoxia-induciblefactor-1,HIF-1)mRNA 表达水平显著增加,P0.01,差异有明显的统计学意义;LPL mRNA表达水平无显著性差异,P0.05,差异无统计学意义。与CIH组相比,Angptl4抗体组的FIH-1 mRNA表达水平显著上升,LPL mRNA表达水平显著上升,Angpt14 mRNA表达水平显著升高,HIF-1mRNA的表达水平均显著降低,P0.01,差异有明显的统计学意义。与CIH组相比,丹蒌片干预组的FIH-1 mRNA表达水平显著上升,LPL mRNA表达水平显著上升,Angpt14 mRNA表达水平显著降低,HIF-1mRNA的表达水平均显著降低,P0.01,差异有明显的统计学意义。2 ApoE-/-小鼠的心脏组织qRT-PCR检测结果与Sham组相比,CIH干预后,FIH-1mRNA表达水平显著降低,HIF-1 mRNA表达水平显著升高,P0.01,差异有明显的统计学意义。Angptl4 mRNA、LPL mRNA表达水平无显著性差异。与CIH组相比,Angpt14抗体组和丹蒌片组的FIH-1 mRNA表达水平显著升高,HIF-1 mRNA表达水平显著降低,P0.01,差异有明显的统计学意义。Angptl4 mRNA、LPL mRNA表达水平无显著性差异。3 ApoE-/-小鼠的附睾脂肪垫组织Western blot检测结果与Sham组相比,CIH组的FIH-1蛋白的表达水平显著降低,Angptl4、HIF-1蛋白的表达水平显著增加,P0.01,差异有明显的统计学意义;LPL蛋白的表达水平无显著性差异,P0.05。与CIH组相比,Angpt14体组和丹萎片组的FIH-1、LPL蛋白的表达水平显著上升,Angptl4、HIF-1蛋白的表达水平显著降低,P0.01,差异有明显的统计学意义。4 ApoE-/-小鼠的心脏组织Western blot检测结果。与Sham组相比,CIH干预后FIH-1蛋白表达水平显著降低,HIF-1蛋白表达水平显著升高,P0.01,差异有明显的统计学意义;Angptl4、LPL蛋白表达水平无显著性差异,P0.05,差异无统计学意义。与CIH组相比,Angpt14抗体组和丹萎片组的FIH-1蛋白表达水平显著升高,HIF-1蛋白表达水平显著降低,P0.01,差异有明显的统计学意义;Angptl4、LPL蛋白表达水平无显著性差异,P0.05,差异无统计学意义。结论:丹萎片可能通过影响附睾脂肪垫HIF-1-Angpt14信号通路及该通路可能上游靶点FIH-1治疗慢性间歇低氧诱发的血脂异常和动脉硬化,为中医痰瘀同治法干预OSAHS诱导的血脂异常和动脉硬化提供了研究参考。
【图文】：

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本文编号：2695248