针药并举对因动脉硬化引发轻度认知障碍小鼠模型的作用机制研究

发布时间：2020-06-09 11:27

【摘要】：目的:本实验通过建立因动脉粥样硬化引发的轻度认知障碍小鼠模型,检测小鼠乙酰胆碱酯酶(Ach E)、乙酰胆碱转移酶(Ch AT)、白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、β-淀粉样蛋白(Aβ)等指标的变化,探究针药治疗模型小鼠胆碱能系统和炎症反应的作用机制。本实验基于“心脑合病”理论探讨动脉粥样硬化对认知功能的影响及机制,旨在为临床开展因动脉粥样硬化导致的轻度认知障碍的防治工作,提供实验依据和理论指导。材料与方法:选取10只C57BL/6J小鼠给予普通小鼠饲料喂养,作为空白对照组。选取40只Apo E-/-小鼠给予高脂饲料喂养,作为模型对照组。喂养12周后,全自动生化分析仪检测小鼠血脂水平,HE染色检测小鼠动脉病理形态,水迷宫检测小鼠认知能力,其中定位航行实验检测小鼠的学习能力,空间探索实验检测小鼠的记忆能力。确定模型成功建立后,空白对照组小鼠仍作为空白组,模型对照组小鼠随机分为模型组、中药组、针刺组、针药组。中药组给予二陈汤合桃红四物汤灌胃治疗,0.2m L/次,1次/d;针刺组选穴百会、关元、双侧丰隆,加以电针,留针15min,左右两侧交替进行,1次/d;针药组同时给予中药组和针刺组的治疗方式;空白组和模型组给予同等程度的抓取与固定并给予蒸馏水灌胃,0.2m L/次,1次/d,连续治疗28天。治疗期间,按照各组小鼠既定的喂养方式,继续喂养。治疗结束后,采用Morris水迷宫检测行为学,采用免疫组织化学技术检测Ch AT、Ach E的表达,采用酶联免疫吸附剂测定IL-1β、TNF-α、Aβ的含量。结果:1.造模后,血脂水平检测结果表明:与空白对照组相比,模型对照组小鼠血清中TC水平、TG水平、LDL水平均显著升高(P0.01),HDL水平显著降低(P0.01)。2.造模后,HE染色结果表明:与空白对照组相比,模型对照组小鼠的动脉形成了较大斑块。3.造模后,Morris水迷宫检测结果表明:定位航行实验中,随着训练时间的增加,各组小鼠的逃避潜伏期均有减少。与空白组对照相比,模型对照组小鼠的逃避潜伏期和游泳路程显著增加(P0.05)。空间探索实验中,与空白对照组相比,模型对照组小鼠穿越平台次数显著减少(P0.05)。4.治疗后,Morris水迷宫检测结果表明:定位航行实验中,随着训练时间的增加,各组小鼠的逃避潜伏期均有减少,与空白组相比,模型组小鼠的逃避潜伏期和游泳路程均显著增加(P0.05);与模型组相比,中药组、针刺组、针药组小鼠的逃避潜伏期和游泳路程均显著减少(P0.05),以针药组的变化更为明显。空间探索实验中,与空白组相比,模型组小鼠穿越平台次数显著减少(P0.05);与模型组相比,中药组、针刺组、针药组小鼠穿越平台次数显著增加(P0.05),针药组小鼠穿越次数增加更为明显。5.治疗后,免疫组织化学染色技术检测结果表明:与空白组相比,模型组小鼠Ch AT表达显著减少(P0.05);与模型组相比,中药组、针刺组、针药组小鼠Ch AT表达显著增加(P0.05),针药组小鼠Ch AT表达增加更为明显。与空白组相比,模型组小鼠Ach E表达显著增加(P0.05);与模型组相比,中药组、针刺组、针药组小鼠Ach E表达显著减少(P0.05),针药组小鼠Ach E表达减少更为明显。6.治疗后,酶联免疫吸附剂检测结果表明:与空白组相比,模型组小鼠Aβ含量、IL-1β含量、TNF-α含量均显著升高(P0.05);与模型组相比,中药组、针刺组、针药组小鼠Aβ含量、IL-1β含量、TNF-α含量均显著降低(P0.05),以针药组小鼠降低更为明显。结论:1.采用针药并举的治疗方法,可以很好改善因动脉硬化导致的轻度认知障碍小鼠的习及记忆能力;2.采用针药并举的治疗方法,能够明显降低因动脉硬化导致的轻度认知障碍小鼠的炎性细胞因子含量,增加Ch AT表达,降低Ach E表达;3.采用针药并举的治疗方法,对因动脉硬化导致轻度认知障碍小鼠的影响可能与胆碱能系统和炎症反应有关。
【图文】：

小鼠,血脂水平,情况,胆碱能

针药并举对动脉硬化引发的轻度知障碍小鼠模型胆碱能抗炎通路的影响实验结果1 血脂水平检测小鼠血脂水平检测结果显示：与空白对照组相比，模型对照组小鼠血清中 TC、TG、LDL 的水平明显增加（P<0.01），HDL 水平明显减少（P<0.01）。结果见表 1、图 1。表 1 小鼠血脂水平变化情况（mmol/L，， x s）组别 TC TG HDL LDL空白对照组 2.69 0.36 0.79 0.11 1.21 0.10 0.19 0.05模型对照组 20.46 3.09** 2.50 0.24** 0.36 0.12** 2.23 0.15**注：与空白对照组相比，**P＜0.01。

小鼠,行为学,实验小鼠,训练时间

图 2 不同组别小鼠动脉病理切片图（HE， 100）3 行为学检测3.1 造模后3.1.1 定位航行实验小鼠定位航行实验结果显示：随着训练时间的增加，小鼠的训练潜伏期均有所减少。与空白对照组相比，模型对照组小鼠逃避潜伏期时间显著增加（P<0.05），游泳路程显著增加（P<0.05）。结果见表 3-1、图 3-1、3-2。表 3-1 小鼠定位航行实验逃避潜伏期变化情况（s， x s）组别第一天第二天第三天第四天第五天空白对照组 47.64 4.52 41.4 4.12 38.65 4.12 32.78 4.52 29.53 3.21模型对照组 58.41 2.01 55.23 3.85 53.34 4.40 50.63 4.78 45.23 4.23*注：与空白对照组相比，**P＜0.05。
【学位授予单位】：辽宁中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R245

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