早期电针对SAMP8小鼠海马超微结构及β-淀粉样蛋白、Tau蛋白水平的影响

发布时间：2020-06-09 11:37

【摘要】：目的:观察电针百会、大椎、肾俞对3月龄及9月龄SAMP8小鼠学习记忆能力、海马区神经元超微结构及β-淀粉样蛋白、Tau蛋白表达的影响,探讨早期电针对AD的作用。方法:将SAMP8小鼠随机分为模型组、3月龄电针组、9月龄电针组,以同龄正常老化SAMR1小鼠为对照组;12只/组。3月龄电针组与9月龄电针组小鼠分别于3月龄及9月龄用网兜固定后取百会、大椎、肾俞进行针刺干预,其中电针正负两极分别接于大椎、肾俞(每日双侧交替接电针)。进针后,无手法刺激,接电针仪,连续波,频率2 Hz,1.5~2 mA(小鼠肢体微颤为宜)。留针20 min/次,1次/日,8天为1疗程,疗程间隔2天,共3个疗程,计30天。每组小鼠在10月龄进行水迷宫检测学习记忆能力结束后统一取材。电镜观察小鼠海马CA1区神经元超微结构;以免疫组织化学、Western blot检测小鼠海马Aβ、Tau蛋白的表达,qPCR检测小鼠海马Aβ、Tau的mRNA表达。结果:1、Morris水迷宫实验:⑴5天的定位航行试验中,与对照组比,模型组逃避潜伏期明显延长(P0.01);与模型组比,电针组平均逃避潜伏期较短(P0.05);与9月龄电针组比,3月龄电针组平均逃避潜伏期更短(P0.05)。⑵空间探索实验中,与对照组相比,模型组原平台象限停留的时间较短(P0.01)而且跨越平台的次数更少(P0.01);与模型组比,电针组原平台象限停留的时间较长(P0.05)而且跨越平台的次数更多(P0.05);与9月龄电针组比,3月龄电针组停留时间延长且跨越平台次数增多(P0.05)。2、透射电镜:对照组小鼠海马CA1区神经元细胞器数目较多、结构完整,突触结构清晰,突触小泡密集;模型组神经元突触结构不完整,突触前、后膜分界不清,突触小泡肿胀且数量较少;与模型组相比,9月龄电针组和3月龄电针组突触数量较多,突触结构较清晰完整;3月龄电针组较9月龄电针组突触结构更清晰完整。3、免疫组织化学:⑴Aβ:与对照组比较,模型组小鼠Aβ明显升高(P0.01);与模型组比较,9月龄电针组和3月龄电针组小鼠Aβ明显降低(P0.01),且3月龄电针组降低更明显(P0.05)。⑵Tau:(1)本次实验以Tau-5检测总tau。与对照组比较,模型组小鼠Tau-5明显升高(P0.01);与模型组比较,9月龄电针组和3月龄电针组小鼠Tau-5明显降低(P0.01),与9月龄电针组比较,3月龄电针组小鼠Tau-5较低(P0.01);(2)以AT8和p-Tau(T231)检测磷酸化Tau。与3月龄电针组相比,模型组(P0.01)与9月龄电针组(P0.01)AT8和p-Tau(T231)较高;与模型组相比,对照组(P0.01)AT8和p-Tau(T231)阳性表达显著降低。4、Western blot:与对照组相比,模型组Tau-5、AT8表达显著升高(P0.01)。与模型组相比,3月龄及9月龄电针组Tau-5、AT8表达降低(P0.01)。与3月龄电针组相比,9月龄电针组(P0.01)Tau-5、AT8表达较高。5、qPCR:与对照组相比,模型组海马Aβ与Tau的mRNA显著升高(P0.01)。与模型组相比,3月龄及9月龄电针组海马Aβ与Tau的mRNA降低(P0.05)。与3月龄电针组相比,9月龄电针组海马Aβ与Tau的mRNA较高(P0.05)。结论:1、AD早期(3月龄)电针干预更能有效改善SAMP8小鼠的学习记忆能力。2、早期电针治疗AD更有利于保持突触结构完整,增加突触小泡密度,从而提高神经元突触功能。3、早期(3月龄)电针介入AD更能有效减轻SAMP8小鼠Aβ、Tau蛋白的异常表达。
【图文】：

台所在象限的停留时间与游泳跨越原平台位置的次数。.3 实验指标：对小鼠前五天的逃避潜伏期进行统计，对小鼠第 6 天的原平跨越平台次数进行统计。 透射电镜观察.1 动物取材麻醉：10 %的水合氯醛（350 mg/kg）对小鼠行腹腔麻醉。暴露胸腔，灌注针从心尖插入至左心室，剪开右心耳后迅速注进生理盐水冲 4 %多聚甲醛注入以灌流固定组织。倒入 2.5 %戊二醛固定液的培养皿置于冰袋上，将小鼠断头分离出海马，，把养皿中，迅速在培养皿上切取海马 CA1 区对应组织，每只小鼠相应区海马5 块约 1 mm3的组织块（见图 1-1），把组织块即刻浸入前固定液（3 %戊聚甲醛）中 4 ℃冰箱放置 3 d。

早期电针对 SAMP8 小鼠海马超微结构及 β-淀粉样蛋白、Tau 蛋白水平的影响实验结果1 Morris 水迷宫结果在前 5 天的定位航行试验中，与对照组比，模型组逃避潜伏期明显延长(P<0.01)；与模型组比，3 月龄及 9 月龄电针组平均逃避潜伏期缩短(P<0.05)；与 9 月龄电针组比，3 月龄电针组平均逃避潜伏期较短(P<0.05)。见图 2-1、图 2-2 及表 2-1。第 6 天空间探索实验中，与对照组相比，模型组原平台象限停留的时间较短(P<0.01)而且跨越平台的次数更少(P<0.01)；与模型组比，3 月龄及 9 月龄电针组原平台象限停留的时间延长(P<0.05)而且跨越平台的次数较多(P<0.05)；与 9 月龄电针组比，3 月龄电针组停留时间延长且跨越平台次数增加(P<0.05)。见图 2-3、图 2-4、图 2-5 及表 2-2。
【学位授予单位】：福建中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R245

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本文编号：2704628