《金匮要略》“诸黄，猪膏发煎主之”的实证研究

发布时间：2020-06-26 13:11

【摘要】：论文共分为三个部分:文献综述、理论研究、实验研究。三个部分均紧密围绕仲景“脾色必黄,瘀热以行”的思想,文献综述整理仲景治黄特点,理论研究对猪膏发煎进行分析,实验部分结合两者,从“瘀”入手,选择肝脏微循环障碍为切入点,复制ANIT诱导肝内胆汁淤积性黄疸大鼠模型,提供“诸黄,猪膏发煎主之”的客观生物学依据。文献综述分整理《伤寒杂病论》中仲景对于黄疸的相关论述,从将黄疸症候按六经辨治,并收集整理经方治疗黄疸的现代临床研究成果。理论研究分为《金匮要略》猪膏发煎应用分析、猪膏发煎应用分析及古代医家对猪膏发煎治疗黄疸的相关论述这三个部分。《金匮要略》中猪膏发煎为治疗黄疸和阴吹的方剂,通过各类验案可以发现此方可治气血不利、津枯体虚、肠燥闭结所引发的多种疾病。实验研究部分,以“诸黄,猪膏发煎主之”为例,从肝脏微循环的角度探讨猪膏发煎治疗黄疸的生物学机制。第一部分《金匮要略》“诸黄,猪膏发煎主之”的客观证据目的:观察猪膏发煎及猪膏对α-荼基异硫氰酸盐(ANIT)诱导肝内胆汁淤积性黄疸大鼠模型的影响。方法:采用随机数字表法将50只SD雄性大鼠分为4组,正常组10只,模型组20只,猪膏发煎组10只,猪膏组10只,以2%ANIT橄榄油溶液灌胃诱导肝内胆汁淤积性黄疸大鼠模型,正常对照组灌以等量橄榄油,造模后48h予以相应药物灌胃,每日两次,持续7天,模型组和正常组予以等量蒸馏水。第9天取材,取肝组织按照常规HE染色,进行病理观察,检测大鼠血清总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、间接胆红素(IBIL)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰转肽酶(GGT)、甘油三酯(TG)等肝功能指标。用代谢笼法收集大鼠24h尿量。造模48h后随机选取10只模型组大鼠进行血清生化检测检验造模是否成功。结果:大鼠血清生化检测造模48h后,模型组大鼠血清ALT、AST、TBIL、DBIL、IBIL、ALP、GGT水平较正常组升高(P0.05),提示造模成功。在未使用药物干预的情况下,模型组大鼠造模后48h和7天血清ALT、AST、TBIL、DBIL、IBIL、ALP、GGT水平有显著性差异(P0.05)。造模后第7天,与正常组比较,模型组(9d)大鼠血清TBIL、DBIL、IBIL、ALP、GGT水平升高(P0.05)。与模型组(9d)比较,猪膏发煎组大鼠血清生化DBIL、IBIL、GGT、ALP水平降低(P0.05),猪膏组大鼠血清生化DBIL、IBIL、ALP水平降低(P0.05)。与正常组比较,模型组大鼠血清TG水平升高(P0.05)。与模型组比较,猪膏发煎组及猪膏组大鼠血清TG水平降低(P0.05)。肝组织病理观察光镜下,正常组大鼠肝小叶结构清晰,肝细胞排列整齐,核圆居中,无明显肿胀、炎性细胞浸润及坏死。模型组大鼠肝小叶结构不清,管区之间呈桥结状连接发生区域坏死,肝索细胞排列疏松,形态消失,界限不明,肝细胞肿胀明显,并有炎性细胞浸润,部分肝细胞核明显偏位。与模型组相比,猪膏发煎组、猪膏组大鼠肝损伤程度减轻,伴有少量炎性浸润。各组大鼠24h尿量的变化与正常组相比,模型组大鼠24h尿量显著增加(P0.05)。与模型组相比,猪膏组大鼠24h尿量显著降低(P0.05)。结论:从本实验结果来看,猪膏发煎能够改善ANIT诱导肝内胆汁淤积性黄疸大鼠模型肝功能及胆红素代谢。猪膏不光为乱发的溶剂,对ANIT诱导黄疸模型大鼠具有干预作用。第二部分《金匮要略》“诸黄,猪膏发煎主之”的生物学机制目的:基于“脾色必黄,瘀热以行”理论,从肝脏微循环角度探讨猪膏发煎治疗作用的生物学机制。方法:增设猪膏组及UCDA组,每组各10只SD雄性大鼠。造模、给药方法、同第一部分。用血液粘度仪测定血浆粘度、低切变率、中切变率和高切变率,血小板聚集凝血因子分析仪测定PT、APTT、TT、FIB,微板法测定血清NO,ELISA法检测血清ET,RT-PCR检测肝组织中iNOS、ET-1 mRNA的表达。结果:各组大鼠血液流变学比较与正常组比较,模型组大鼠全血低切变率、中切变率、高切变率水平均升高(P0.05)。与模型组比较,猪膏发煎组大鼠全血中切变率、高切变率降低(P0.05),猪膏组大鼠全血高切变率降低(P0.05),UCDA组全血低切变率、中切变率、高切变率均降低(P0.05)。各组大鼠凝血功能比较与正常组比较,模型组大鼠PT明显延长,差异具有统计学意义(P0.05),APTT缩短(P0.05),TT延长(P0.05),FIB含量增加(P0.05)。与模型组比较,给药组大鼠PT明显缩短,差异具有统计学意义(P0.05),TT缩短(P0.05),FIB含量减少(P0.05)。各组大鼠血清NO含量比较与正常组比较,模型组大鼠血清一氧化氮(NO)水平显著升高(P0.05)。猪膏发煎组,猪膏组大鼠及UCDA大鼠血清NO水平较模型组显著降低(P0.05)。各组大鼠血清ET-1含量比较与正常组相比,模型组大鼠血清内皮素1(ET-1)水平显著升高(P0.05),猪膏发煎组、猪膏组和UCDA组大鼠血清ET-1含量较模型组显著降低(P0.05)。各组大鼠肝脏组织NO mRNA及ET mRNA表达与正常组相比,模型组大鼠肝脏组织iNOS、ET-1mRNA表达量升高,差异有统计学意义(P0.01)。猪膏发煎组、猪膏组大鼠及UCDA组大鼠肝脏组织ET-1mRNA表达量较模型组大鼠下调(P0.01),猪膏发煎组、猪膏组大鼠肝脏组织iNOS mRNA表达较模型组大鼠下调,UCDA组大鼠肝脏组织iNOS mRNA表达较模型组无明显上下调关系。结论:猪膏发煎对ANIT诱导肝内胆汁淤积性黄疸大鼠具有一定的干预作用,其作用机制可能为降低ET-1、NO水平有关,改善肝脏微循环功能,体现仲景所言“脾色必黄,瘀热以行”。
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R222.3
【图文】：

大鼠,尿量,量比

模型组大鼠及猪膏组２４邋ｈ尿量显著增加（比，猪膏组大鼠２４邋ｈ尿量显著降低（Ｐ＜０．０５）。见表表６各组大鼠２４ｈ尿量的比较（ｘ士ｓ，邋ｍｌ）逡逑组别逦动物数（只）逦尿量逡逑正常组逦９逦１０．８９±４．９４逡逑模型组逦９逦２７．６５±丨２．１６＃逡逑猪膏发煎组逦１０逦１６．１０±２．３４逡逑猪膏组逦１０逦１８．７２±４．３７ａ逡逑注：与正常组比较，＃Ｐ＜邋０．０５；与模型组比较，ＡＰ＜邋０．０５逡逑６０－逡逑

含量比较

组大鼠血清ＮＯ含量比较逡逑正常组比较，模型组大鼠血清ＮＯ水平显著升高（Ｐ＜０．０５）。，猪膏发煎组、猪膏组大鼠和ＵＣＤＡ组大鼠血清ＮＯ水平．０５）。见表邋１０，图邋２１逡逑表１０各组大鼠血清Ｎ０含量比较（ｘ士ｓ，ｎｍｏｌＡ）逡逑组别逦动物数（只）逦Ｎ０逦逡逑正常组逦６逦１６．２８±７．３９逡逑模型组逦６逦２２６．２０±７５．５３＃逡逑猪膏发煎组逦６逦１９．２３±３．９０ａ逡逑猪膏组逦６逦１３．６７±２．８４ａ逡逑ＵＣＤＡ邋组逦６逦２８．１２±１３．２４ａ逡逑注：与正常组比较，＃Ｐ＜０．０５；与模型组比较，ａＰ＜０．０５逡逑４５０邋－逡逑

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