基于MiRNA-146a调控TLR4信号通路探讨枢经推拿对神经病理性疼痛大鼠的镇痛机制

发布时间：2020-06-26 13:16

【摘要】：目的:通过建立脊神经结扎(Spinal nerve ligation,SNL)大鼠模型模拟神经病理性疼痛,观察枢经推拿干预后大鼠的机械痛阈和热痛阈变化以明确枢经推拿镇痛效果。检测干预后大鼠背根神经节的MiRNA-146a以及TLR4信号通路表达水平,以及上调MiRNA-146a后TLR4信号通路表达水平,探索枢经推拿镇痛机制。本次研究从分子生物学层面阐述枢经推拿镇痛机制,以期为枢经推拿镇痛提供科学理论依据。方法:对56只雌性大鼠随机分为空白对照组、假手术组、模型组、假推拿组、枢经推拿组、MiRNA-146a过表达组和阴性对照组(NC组),每组各8只。MiRNA-146a过表达组和阴性对照组大鼠鞘内置管成功后与模型组、假推拿组、枢经推拿组一起建立SNL大鼠模型,假手术组暴露脊神经不予结扎,空白对照组不作任何处理。建模成功后MiRNA-146a过表达组鞘内给予10μl可以靶向上调MiRNA-146a表达水平的慢病毒agoMiRNA-146a;NC组则给予等剂量的阴性对照试剂agoMiRNA-146a negative control。枢经推拿组采用按摩推拿手法模拟仪每天推拿一次,连续干预14d;假推拿组大鼠每天采用布袋束缚并轻轻抚摸大鼠双后肢,连续干预14d。空白对照组、假手术组和模型组不进行干预,观察14d。在造模前及造模后的1,3,7,14天检测各组大鼠的热痛阈值和机械痛阈值。于造模后第14天检测空白对照组、假手术组、模型组、假推拿组、枢经推拿组大鼠的MiRNA-146a、TLR4、IRAK1、TRAF6、TNF-α和IL-6表达水平,检测MiRNA-146a过表达组和NC组MiRNA-146a、IRAK1、TRAF6表达水平。结果:1.大鼠体重变化:各组大鼠在造模前及造模后第1、3天体重差异均无统计学意义(P0.05)。造模第7、14天,空白对照组和假手术组大鼠体重差异无统计学意义(P0.05),空白对照组、假手术组大鼠体重与模型组、假推拿组、枢经推拿组大鼠体重比较差异有统计学意义(P0.05),模型组与假推拿组大鼠体重差异无统计学意义(P0.05),枢经推拿组与模型组、假推拿组大鼠体重比较差异有统计学意义(P0.05),MiRNA-146a过表达组和NC组相比较差异有统计学意义(P0.05)。2.大鼠机械痛阈值和热痛阈值变化:各组大鼠在造模前的机械痛阈值和热痛阈值差异无统计学意义(P0.05),造模后第1、3、7、14天,空白对照组和假手术组大鼠机械痛阈值和热痛阈值差异均无统计学意义(P0.05),模型组与假推拿组大鼠机械痛阈值和热痛阈值差异均无统计学意义(P0.05),空白对照组、假手术组与模型组、假推拿组、枢经推拿组大鼠之间机械痛阈值和热痛阈值差异有统计学意义(P0.05)。造模后第1、3天,枢经推拿组大鼠与模型组、假推拿组大鼠之间机械痛阈值和热痛阈值差异无统计学意义(P0.05),MiRNA-146a过表达组和NC组之间机械痛阈值和热痛阈值差异无统计学意义(P0.05)。造模后第7、14天,枢经推拿组大鼠与模型组、假推拿组大鼠之间机械痛阈值和热痛阈值差异有统计学意义(P0.05),MiRNA-146a过表达组和NC组之间机械痛阈值和热痛阈值差异有统计学意义(P0.05)。3.QPCR结果:造模后第14天,空白对照组与假手术组的MiRNA-146a、TLR4、IRAK1、TRAF6表达水平相比差异无统计学意义(P0.05);模型组和假推拿组的MiRNA-146a、TLR4、IRAK1、TRAF6表达水平相比差异无统计学意义(P0.05);空白对照组、假手术组MiRNA-146a表达水平高于模型组、假推拿组、枢经推拿组(P0.05);空白对照组、假手术组TLR4、IRAK1、TRAF6表达水平低于模型组、假推拿组、枢经推拿组(P0.05);模型组、假推拿组MiRNA-146a表达水平低于枢经推拿组(P0.05);模型组、假推拿组TLR4、IRAK1、TRAF6表达水平高于枢经推拿组(P0.05);MiRNA-146a过表达组MiRNA-146a表达水平高于NC组(P0.05);MiRNA-146a过表达组IRAK1和TRAF6表达水平低于NC组(P0.05)。4.ELISA结果:造模后第14天,空白对照组与假手术组TNF-α和IL-6表达水平相比差异无统计学意义(P0.05);模型组和假推拿组TNF-α和IL-6表达水平相比差异无统计学意义(P0.05);空白对照组、假手术组TNF-α和IL-6表达水平低于模型组、假推拿组、枢经推拿组(P0.05);模型组、假推拿组TNF-α和IL-6表达水平高于枢经推拿组(P0.05)。结论:上调MiRNA-146a的表达进而下调TLR4信号通路的活化情况,减少炎症因子的释放,可能是枢经推拿治疗神经病理性疼痛的起效机制之一。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R244.1
【图文】：

图 3-1 各组大鼠术前、术后 1d、3d、7d、14d 体重比较Fig.3-1 Comparison of weight before and after SNL 1d， 3d， 7d and 14d in each group of rats3.1.2 各组大鼠机械痛阈（PWMT）的变化各组大鼠在造模前的机械痛阈值差异无统计学意义（P＞0.05），提示各组大鼠造模前的机械痛阈值相当，具有可比性。造模后第 1、3、7、14 天，空白对照组和假手术组大鼠机械痛阈值差异均无统计学意义（P＞0.05），提示空白对照组和假手术组大鼠机械痛阈值相当；模型组与假推拿组大鼠机械痛阈值差异均无统计学意义（P＞0.05），提示模型组与假推拿组大鼠机械痛阈值相当；空白对照组、假手术组与模型组、假推拿组、枢经推拿组大鼠之间机械痛阈值差异有统计学意义（*P＜0.05），提示造模导致模型组、假推拿组、枢经推拿组大鼠的机械痛阈低于空白对照组、假手术组。造模

于 MiRNA-146a 调控 TLR4 信号通路探讨枢经推拿对神经病理性疼痛大鼠的镇痛机制 2016 级硕士学位论文表 3-2 各组大鼠机械痛阈值变化比较（ ，g，n=8）组别 术前 术后 1 天 术后 3 天 术后 7 天 术后 14 天空白对照组 55.75±5.87 54.33±6.06 55.29±6.70 51.04±10.84 52.46±11.22假手术组 54.33±6.06 46.33±10.64 50.08±7.26 49.17±10.91 49.63±13.34模型组 52.92±5.86 38.33±7.14*35.00±8.74*22.33±2.77 #18.33±2.47 #假推拿组 53.88±6.66 39.25±6.03*35.96±9.43*24.25±6.03 #20.50±1.96 #枢经推拿组 52.00±6.80 40.17±5.25*35.54±7.99*33.58±6.94 31.71±7.76 注：与空白对照组、假手术组比较，*P<0.05，与枢经推拿组比较#P<0.05X ± s

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本文编号：2730364