目的:利用液相色谱-质谱联用(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)技术,寻找2型糖尿病上热下寒证相关的差异性代谢产物,找出糖尿病上热下寒证生物标记物,分析可能涉及的代谢通路。方法:取2型糖尿病上热下寒证组(S组)(n=25)、健康对照组(N组)(n=30)的血液与装有抗凝剂的采血管中,离心后放入ep管中,加有机溶剂,蛋白沉淀后,进入液相色谱质谱仪得到原始数据,将数据导入Progenesis QI软件,经过峰对齐、峰提取、归一化处理后,采用SIMCA-P14.1软件进行多元变量统计分析,主要通过有监督的正交偏最小二乘法(OPLS-DA),建立模型,得到2型糖尿病上热下寒证组(S组)与健康对照组(N组)之间的差异性代谢产物,寻找特定的生物标志物,通过KEGG数据库,对差异性代谢产物进行通路富集,找出差异性代谢产物涉及的代谢途径,从而获得可能参与2型糖尿病上热下寒证发病进程中的代谢通路。结果:1.一般情况及实验室检查:在性别(sex)、体重指数(BMI)上,两组比较p0.05,无统计学差异。在年龄上p0.05,两组间存在统计学差异。临床生化指标方面,总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、血肌酐(Scr)、谷草转氨酶(AST),两组比较p0.05,差异无统计学意义。空腹血糖(FBG)、谷丙转氨酶(ALT)、尿素(Urea),两组比较,P0.05,两组间存在统计学差异;2.35种物质p0.05,vip1,分别是神经酰胺(d18:1/24:1(15Z))、溶 血 磷 脂 酰 胆 碱(16:0/14:0)、乙 醇 胺(22:6(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)/16:0)、乙醇胺(20:4(8Z,11Z,14Z,17Z)/16:0)、乙醇胺(18:0/18:1(11Z))、乙醇胺(18:0/22:6(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z))、乙醇胺(20:4(8Z,11Z,14Z,17Z)/18:0)、戊酰肉碱、丁酰肉碱、丙酰肉碱、氨基辛酸、异亮氨酸、谷氨酸、溶血磷脂酰胆碱(18:3(9Z,12Z,15Z))、溶血磷脂酰胆碱(16:1(9Z))、溶血磷脂酰乙醇胺(18:2(9Z,12Z)/0:0)、溶血磷脂酰胆碱(18:2(9Z,12Z))、溶血磷脂酰胆碱(20:4(8Z,11Z,14Z,17Z))、溶血磷脂酰胆碱(16:0)、溶血磷脂酰乙醇胺(18:1(11Z)/0:0)、溶血磷脂酰胆碱(P-16:0)、溶血磷脂酰胆碱(18:1(11Z))、溶血磷脂酰胆碱(P-18:0)、溶血磷脂酰胆碱(20:2(11Z,14Z))、溶血磷脂酰胆碱(18:0)、溶血磷脂酰胆碱(0-18:0)、溶血磷脂酰胆碱(20:0)、乙醇胺(18:2(9Z,12Z)/18:1(11Z))、磷脂酰胆碱(o-16:0/16:1(9Z))、磷脂酰胆碱(o-16:1(9Z)/18:2(9Z,12Z))、磷脂酰胆碱(0-16:0/18:2(9Z,12Z))、磷脂酰胆碱(P-18:0/18:2(9Z,12Z))、磷脂酰胆碱(P-18:0/18:1(11Z))、乙醇胺(P-18:0/18:2(9Z,12Z))、组氨酸;神经酰胺(d18:1/24:1(15Z))、神经酰胺(d18:1/25:0))、溶血磷脂乙醇胺(22:6(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)/0:0)、磷 脂 乙 醇 胺(22:6(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)/16:0)、磷脂乙醇胺(20:4(8Z,11Z,14Z,17Z)/16:0)、磷脂乙醇胺(18:0/18:1(11Z))、磷脂乙醇胺(18:0/22:6(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z))、磷脂乙醇胺(20:4(8Z,11Z,14Z,17Z)/18:0)、己基肉碱、乙酰肉;13种代谢物fold change1,神经酰胺(d18:1/24:1(15Z))、溶血磷脂酰胆碱(16:0/14:0)、乙醇胺(22:6(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)/16:0)、乙醇胺(20:4(8Z,11Z,14Z,17Z)碱、丁酰肉碱、丙酰肉碱、2-氨基辛酸、戊酰肉碱、2-甲基烟酰胺、亮氨酸、谷氨酸、组氨酸/16:0)、乙醇胺(18:0/18:1(11Z))、乙醇胺(18:0/22:6(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z))、乙醇胺(20:4(8Z,11Z,14Z,17Z)/18:0)、戊酰肉碱、丁酰肉碱、丙酰肉碱、氨基辛酸、异亮氨酸、谷氨酸;22种fold change1分别是溶血磷脂酰胆碱(18:3(9Z,12Z,15Z))、溶血磷脂酰胆碱(16:1(9Z))、溶血磷脂酰乙醇胺(18:2(9Z,12Z)/0:0)、溶血磷脂酰胆碱(18:2(9Z,12Z))、溶血磷脂酰胆碱(20:4(8Z,11Z,14Z,17Z))、溶血磷脂酰胆碱(16:0)、溶血磷脂酰乙醇胺(18:1(11Z)/0:0)、溶血磷脂酰胆碱(P-16:0)、溶血磷脂酰胆碱(18:1(11Z))、溶血磷脂酰胆碱(P-18:0)、溶血磷脂酰胆碱(20:2(11Z,14Z))、溶血磷脂酰胆碱(18:0)、溶血磷脂酰胆碱(0-18:0)、溶血磷脂酰胆碱(20:0)、乙醇胺(18:2(9Z,12Z)/18:1(11Z))、磷脂酰胆碱(o-16:0/16:1(9Z))、磷脂酰胆碱(o-16:1(9Z)/18:2(9Z,122))、磷脂酰胆碱(0-16:0/18:2(92,122))、磷脂酰胆碱(P-18:0/18:2(9Z,12Z))、磷脂酰胆碱(P-18:0/18:1(11Z))、乙醇胺(P-18:0/18:2(9Z,12Z))、组氨酸;乙醇胺(22:6(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)/16:0)fold change2,溶血磷脂酰胆碱(18:2(9Z,12Z))fold change0.5。所富集到的通路为甘油脂代谢、氨基酰基-tRNA生物合成、组氨酸代谢、谷氨酰胺和谷氨酸代谢、糖基磷脂酰肌醇生物合成、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢、鞘脂代谢、缬草碱、亮氨酸和异亮氨酸的生物合成、谷胱甘肽代谢、精氨酸与脯氨酸代谢、缬草碱、亮氨酸和异亮氨酸降解。结论:1.2型糖尿病上热下寒组(S组)与健康对照组(N组)之间共鉴定出35种差异性代谢物,13种物质上调,差异性代谢物:神经酰胺(d18:11/24:1(15Z))、溶血磷脂酰胆碱(16:0/14:0)、乙醇胺(22:6(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)/16:0)、乙醇胺(20:4(8Z,11Z,14Z,17Z)/16:0)、乙 醇 胺(18:0/18:1(11Z))、乙 醇 胺(18:0/22:6(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z))、乙醇胺(20:4(8Z,11Z,14Z,17Z)/18:0)、戊酰肉碱、丁酰肉碱、丙酰肉碱、氨基辛酸、异亮氨酸、谷氨酸。22种差异性代谢物下调,差异性代谢物:溶血磷脂酰胆碱(18:3(9Z,12Z,15Z))、溶血磷脂酰胆碱(16:1(9Z))、溶血磷脂酰乙醇胺(18:2(9Z,12Z)/0:0)、溶血磷脂酰胆碱(18:2(9Z,12Z))、溶血磷脂酰胆碱(20:4(8Z,11Z,14Z,17Z))、溶血磷脂酰胆碱(16:0)、溶血磷脂酰乙醇胺(18:1(11Z)/0:0)、溶血磷脂酰胆碱(P-16:0)、溶血磷脂酰胆碱(18:1(11Z))、溶血磷脂酰胆碱(P-18:0)、溶血磷脂酰胆碱(20:2(11Z,14Z))、溶血磷脂酰胆碱(18:0)、溶血磷脂酰胆碱(0-18:0)、溶血磷脂酰胆碱(20:0)、乙醇胺(18:2(9Z,12Z)/18:1(11Z))、磷脂酸胆碱(0-16:0/16:1(9Z))、磷脂酰胆碱(0-16:1(9Z)/18:2(9Z,12Z))、磷脂酰胆碱(0-16:0/18:2(9Z,12Z))、磷脂酰胆碱(P-18:0/18:2(9Z,12Z))、磷脂酰胆碱(P-18:0/18:1(11Z))、乙醇胺(P-18:0/18:2(9Z,12Z))、组氨酸;其中差异性代谢产物乙醇胺(22:6(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)/16:0和溶血磷脂酰胆碱(18:2(9Z,12Z))可作为2型糖尿病上热下寒证的潜在生物标志物以及与其他证型相区别的生物学基础;3.2型糖尿病上热下寒证涉及多种代谢途径,有甘油脂代谢、氨基酰基-tRNA生物合成、组氨酸代谢、谷氨酰胺和谷氨酸代谢、糖基磷脂酰肌醇生物合成、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢、鞘脂代谢、缬草碱、亮氨酸和异亮氨酸的生物合成、谷胱甘肽代谢、精氨酸与脯氨酸代谢、缬草碱、亮氨酸和异亮氨酸降解等重要代谢途径。
【学位单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R259
【部分图文】：
反相色谱正离子典型色澹图
图２亲水色谱正离子典型色谱图?
反相色谱正离子(QC)
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本文编号：
2881055
