中华蜜蜂（Apis cerana）毒液生物活性研究及其蜂针疗法对实验性类风湿关节炎小鼠的治疗作用

发布时间：2017-05-23 19:17

  本文关键词：中华蜜蜂（Apis cerana）毒液生物活性研究及其蜂针疗法对实验性类风湿关节炎小鼠的治疗作用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：到目前为止,类风湿关节炎(rheumatoid arthritis RA)的致病机制仍未厘清,它是一种慢性病,炎性滑膜炎是其主要的临床表现,属于自身免疫疾病。RA的特征是出现侵袭性和对称性的关节炎症,往往是手、足小关节的多关节,可以导致关节畸形及功能丧失。RA病程长,且致残率高,发病一年内致残率20%,10年内可达60%。近年来,类风湿关节炎发病率呈上升趋势,例如,中国RA的发病率为0.37%,发达国家的发病率为1%。由于RA本身的病理特点,加大了治疗难度,同时加重了患者及患者家庭生理、心理和经济上的负担。因此,对类风湿关节炎进行早期的诊断和治疗显得尤其重要。蜜蜂蜂针治疗类风湿关节炎在中西医疗史上均有记载,蜂针疗法具有“廉”、“便”、“灵”的特点。目前,对于蜂针疗法研究报道主要是临床疗效研究,缺少蜂针疗法对机体整体作用机制的研究;其次,蜂针疗法的的操作过程、过敏测定和毒性反应的判断没有统一的标准,治疗没有系统的方案;再则,治疗效果因人而异以及对治疗效果的评估缺少科学、客观的标准。因此,研究蜂针治疗类风湿关节炎是非常必要和重要的。本研究采用生物化学和药理学的方法和技术,分析测试中华蜜蜂(Apis cerana)毒液的理化性质及其生物(或药理)活性;再通过检测小鼠血清中的TNF-α和IL-6,测定小鼠的脾和胸腺脏器指数以及观察小鼠踝关节病理切片,考量中华蜜蜂蜂针疗法对两种实验性类风湿关节炎小鼠的治疗作用。我们实验表明,重庆地区产的中华蜜蜂毒液单只守卫蜂蜂毒蛋白平均含量为256.3μg;磷脂酶活性为56.79U/mg;透明质酸酶活性为16.33U/mg;对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌的最低抑制浓度分别为1.53μg/m L,0.42μg/mL,26.3μg/mL;在溶血活性方面,达到50%溶血时,蜂毒浓度是8.33μg/mL。动物模型实验表明,蜂针疗法可以显著地降低佐剂(AA)、Ⅱ型胶原蛋白(CIA)诱导的的类风湿关节炎小鼠血清中TNF-α和IL-6的含量,减轻小鼠组织肿胀度,降低胸腺指数和脾脏指数;同时对踝关节具有明显的保护作用。这些结果提示了中华蜜蜂蜂针疗法治疗AA和CIA小鼠是有效的。另外,通过比较蜂针留在小鼠身体上的时间,发现留针时间为5 min时,其治疗的性价比最高。综上所述,中华蜜蜂毒液具有较强的抗菌能力和溶血能力。通过对两种实验性类风湿关节炎小鼠模型进行蜂针治疗,肯定了使用中华蜜蜂蜂针疗法对实验性类风湿关节炎具有疗效,但是治疗作用机制还需要进一步的研究。
【关键词】：中华蜜蜂 蜂针疗法 类风湿关节炎 类风湿关节炎动物模型
【学位授予单位】：重庆师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R259
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-11
• 1 引言11-15
• 1.1 研究的目的和意义11-13
• 1.2 本研究的主要内容13-14
• 1.2.1 中华蜜蜂毒液的制备13
• 1.2.2 中华蜜蜂粗毒蛋白质含量及其生物活性的测定13
• 1.2.3 中华蜜蜂蜂疗对小鼠实验性类风湿关节炎模型的治疗作用13-14
• 1.3 本研究的技术路线14-15
• 2 中华蜜蜂毒液的制备及理化性质15-23
• 2.1 主要仪器与设备15
• 2.2 材料与试剂15-17
• 2.2.1 药品16
• 2.2.2 试剂及配置16-17
• 2.3 方法与步骤17-19
• 2.3.1 中华蜜蜂毒液的制备17
• 2.3.2 蜜蜂毒液蛋白质含量的测定17-18
• 2.3.3 中华蜜蜂毒液磷脂酶A2活性测定18-19
• 2.3.4 中华蜜蜂毒液透明质酸酶的活性测定19
• 2.3.5 中华蜜蜂毒液抗菌活性测定19
• 2.3.6 中华蜜蜂毒液溶血活性测定19
• 2.4 结果19-21
• 2.4.1 蜜蜂蜂毒蛋白含量的测定19-20
• 2.4.2 中华蜜蜂毒液磷脂酶A2活性测定20
• 2.4.3 中华蜜蜂毒液透明质酸酶活性测定20
• 2.4.4 中华蜜蜂毒液抗菌活性测定20-21
• 2.4.5 中华蜜蜂毒液的溶血活性测定21
• 2.5 讨论21-23
• 3 中华蜜蜂毒液对实验性类风湿关节炎小鼠的治疗作用23-45
• 3.1 主要仪器与设备23
• 3.2 材料与试剂23-25
• 3.2.1 药品24
• 3.2.2 药品配置24-25
• 3.3 方法与步骤25-28
• 3.3.1 小鼠类风湿关节炎模型的制备25
• 3.3.2 类风湿关节炎小鼠的治疗25
• 3.3.3 小鼠足跖肿胀度的测定25-26
• 3.3.4 小鼠炎症因子及类风湿因子的测定26-27
• 3.3.5 小鼠脾、胸腺脏器系数检测27
• 3.3.6 小鼠关节组织切片的观察27-28
• 3.4 实验结果28-42
• 3.4.1 小鼠足跖肿胀度变化测定28-33
• 3.4.2 小鼠肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的测定33-37
• 3.4.3 小鼠白细胞介素-6(IL-6)的测定37-40
• 3.4.4 小鼠脾脏、胸腺系数的测定40-42
• 3.4.5 小鼠关节切片42
• 3.5 讨论42-45
• 4 全文小结45-47
• 5 文献综述47-55
• 5.1 类风湿关节炎诊断标准47-48
• 5.1.1 美国风湿病学会(ACR)1987分类标准47
• 5.1.2 中医证候分型标准47-48
• 5.2 类风湿关节炎的治疗48-50
• 5.2.1 西医治疗类风湿关节炎48
• 5.2.2 中医治疗类风湿关节炎48-49
• 5.2.3 中西结合治疗类风湿关节炎49-50
• 5.2.4 其它疗法50
• 5.3 中华蜜蜂50-52
• 5.4 类风湿关节炎模型研究进展52-55
• 5.4.1 单纯疾病模型52-53
• 5.4.2 抗CⅡ抗体诱导关节炎( CAIA) 模型53
• 5.4.3 抗血清转移诱导关节炎( STIA) 模型53
• 5.4.4 链球菌诱导的关节炎模型53
• 5.4.5 病症结合模型53-55
• 参考文献55-62
• 附录62-64
• 致谢64

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5 李万瑶;施景中;;蜂针刺激表皮疼痛的防治[J];针灸临床杂志;2005年12期

6 戴耀宗;;蜂针治顽疾[J];蜜蜂杂志;2006年05期

7 朱泽显;;如何加速蜂针疗效[J];中国蜂业;2006年11期

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本文编号：388864